本文關鍵詞：自噬對熱誘導舌鱗癌Cal-27細胞凋亡的調節(jié)作用研究

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【摘要】：[目的]探索自噬對熱誘導口腔舌鱗癌Cal-27細胞凋亡作用的影響,為通過促進或抑制細胞自噬作用提高熱療治療效果提供實驗依據。[方法](1)用含10%胎牛血清的DMEM高糖培養(yǎng)基,置37-C、5%CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)Cal-27細胞。 (2)實驗分組：對照組(Cal-27細胞)、加熱組(42℃100min及43℃100min處理Cal-27細胞)、自噬促進劑雷帕霉素組(100nnM雷帕霉素37℃100min處理Cal-27細胞)、自噬抑制劑3-MA組(5mM 3-MA 37℃100min處理Cal-27細胞)、自噬促進劑+加熱組(100nM雷帕霉素+43℃100min處理Cal-27細胞)、自噬抑制劑+加熱組(5mM 3-MA+43℃100min處理Cal-27細胞)。(3)化學免疫熒光檢測細胞內自噬相關蛋白Beclin-1。(4)透射電子顯微鏡觀察正常培養(yǎng)及熱誘導后細胞內自噬小體數量的變化。(5)Annexin V-FITC/PI標記流式細胞儀檢測細胞凋亡率。(6)免疫印跡法檢測Bax、Beclin-1、 LC3、Atg5蛋白表達量。(7)SPSS17.0統計軟件對數據進行統計學分析。[結果](1)化學免疫熒光實驗發(fā)現對照組與加熱組在熒光顯微鏡下均能觀察到自噬相關蛋白Beclin-1的表達,42℃100min加熱組Beclin-1的表達較對照組增強。 (2)電子顯微鏡下觀察對照組細胞可發(fā)現內單層膜包裹廢用細胞器的自噬小體,但數量較少；42℃100min加熱時,Cal-27細胞內自噬小體的數量明顯多于對照組,可見大量的單層膜結構自噬小體,包繞著廢用的細胞器,如線粒體,高爾基體等,部分被包裹細胞器已進入分解中后期,細胞內其他細胞器形態(tài)良好；43℃100min加熱時,細胞內自噬小體的數量較42℃100min加熱時有所減少,且線粒體呈現腫脹狀態(tài),部分細胞出現凋亡形態(tài)改變。(3)流式細胞儀檢測細胞凋亡率,結果顯示：對照組Cal-27細胞凋亡率為(1.29±0.05)%；自噬促進劑雷帕霉素處理組細胞凋亡率為(2.18±0.04)%,自噬抑制劑3-MA處理組細胞凋亡率為(3.71+0.10)%,雷帕霉素和3-MA處理組與對照組相比,凋亡率差異不具有統計學意義(P0.05)。43℃100mmin加熱組Cal-27細胞凋亡率為(29.63±0.03)%,與對照組相比,凋亡率明顯高于對照組,統計學上有顯著差異(P0.05)：自噬促進劑雷帕霉素+43℃100min加熱組細胞凋亡率為(18.98±0.06)%,與43℃100min加熱組相比,凋亡率明顯降低,且差異有統計學意義(P0.05)；自噬抑制劑3-MA+43℃100min加熱組細胞凋亡率為(38.92±0.28)%,細胞凋亡率明顯高于加熱組,差異有統計學意義(P0.05)。(4)化學免疫印跡檢測發(fā)現：單獨加入雷帕霉素或3-MA,升高或降低細胞的自噬作用,LC3II/LC3I比值及Beclin-1、Atg5、Bax的表達量與對照組相比,無明顯變化,差異無統計學意義(P0.05)；43℃100min加熱時,LC3ⅡI/LC3I比值,Beclin-1、Atg5的表達量較對照組相比,明顯下降,差異有統計學意義(P0.05),Bax的表達量較單獨43℃100min加熱組升高,差異有統計學意義(P0.05)；雷帕霉素+43℃100min加熱組,LC3II/LC3I比值,Beclin-1、Atg5的表達量較43℃100min加熱組明顯上升,差異有統計學意義(P0.05),Bax的表達量較43℃100min加熱組降低,差異有統計學意義(P0.05)；3-MA+43℃100min加熱組,LC3II/LC3I比值,Beclin-1、Atg5的表達量較43℃100min加熱組明顯下降,差異有統計學意義(P0.05),Bax的表達量較43℃100min加熱組升高,差異有統計學意義(P0.05)。[結論]加溫可誘發(fā)舌鱗癌Cal-27細胞發(fā)生自噬。提高細胞自噬水平,會抑制熱誘導細胞凋亡發(fā)生,降低熱殺傷腫瘤細胞作用；反之,降低細胞自噬水平,會促進熱誘導細胞凋亡發(fā)生,提高熱殺傷腫瘤細胞作用。
【關鍵詞】：舌鱗癌 Cal-27細胞 熱療 自噬 凋亡
【學位授予單位】：昆明醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R739.86
【目錄】：

• 英文縮略表5-6
• 摘要6-8
• Abstract8-11
• 前言11-14
• 材料和方法14-22
• 1. 主要試劑14-15
• 2. 主要設備15-16
• 3. 主要溶液配制16-17
• 4. 實驗方法17-21
• 4.1 細胞培養(yǎng)17
• 4.2 細胞凍存17
• 4.3 細胞復蘇17
• 4.4 實驗分組17-18
• 4.5 免疫熒光實驗18
• 4.6 透射電子顯微鏡觀察18-19
• 4.7 細胞凋亡率檢測19
• 4.8 免疫印跡實驗19-21
• 5 統計學分析21-22
• 結果22-40
• 討論40-45
• 結論45-46
• 參考文獻46-48
• 綜述48-56
• 參考文獻54-56
• 攻讀學位期間發(fā)表文章情況56-57
• 致謝57

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本文編號：706380