發(fā)布時間：2017-08-20 11:28

  本文關(guān)鍵詞：自噬對熱誘導(dǎo)舌鱗癌Cal-27細(xì)胞凋亡的調(diào)節(jié)作用研究

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【摘要】：[目的]探索自噬對熱誘導(dǎo)口腔舌鱗癌Cal-27細(xì)胞凋亡作用的影響,為通過促進(jìn)或抑制細(xì)胞自噬作用提高熱療治療效果提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。[方法](1)用含10%胎牛血清的DMEM高糖培養(yǎng)基,置37-C、5%CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)Cal-27細(xì)胞。 (2)實(shí)驗(yàn)分組：對照組(Cal-27細(xì)胞)、加熱組(42℃100min及43℃100min處理Cal-27細(xì)胞)、自噬促進(jìn)劑雷帕霉素組(100nnM雷帕霉素37℃100min處理Cal-27細(xì)胞)、自噬抑制劑3-MA組(5mM 3-MA 37℃100min處理Cal-27細(xì)胞)、自噬促進(jìn)劑+加熱組(100nM雷帕霉素+43℃100min處理Cal-27細(xì)胞)、自噬抑制劑+加熱組(5mM 3-MA+43℃100min處理Cal-27細(xì)胞)。(3)化學(xué)免疫熒光檢測細(xì)胞內(nèi)自噬相關(guān)蛋白Beclin-1。(4)透射電子顯微鏡觀察正常培養(yǎng)及熱誘導(dǎo)后細(xì)胞內(nèi)自噬小體數(shù)量的變化。(5)Annexin V-FITC/PI標(biāo)記流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞凋亡率。(6)免疫印跡法檢測Bax、Beclin-1、 LC3、Atg5蛋白表達(dá)量。(7)SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。[結(jié)果](1)化學(xué)免疫熒光實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)對照組與加熱組在熒光顯微鏡下均能觀察到自噬相關(guān)蛋白Beclin-1的表達(dá),42℃100min加熱組Beclin-1的表達(dá)較對照組增強(qiáng)。 (2)電子顯微鏡下觀察對照組細(xì)胞可發(fā)現(xiàn)內(nèi)單層膜包裹廢用細(xì)胞器的自噬小體,但數(shù)量較少；42℃100min加熱時,Cal-27細(xì)胞內(nèi)自噬小體的數(shù)量明顯多于對照組,可見大量的單層膜結(jié)構(gòu)自噬小體,包繞著廢用的細(xì)胞器,如線粒體,高爾基體等,部分被包裹細(xì)胞器已進(jìn)入分解中后期,細(xì)胞內(nèi)其他細(xì)胞器形態(tài)良好；43℃100min加熱時,細(xì)胞內(nèi)自噬小體的數(shù)量較42℃100min加熱時有所減少,且線粒體呈現(xiàn)腫脹狀態(tài),部分細(xì)胞出現(xiàn)凋亡形態(tài)改變。(3)流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞凋亡率,結(jié)果顯示：對照組Cal-27細(xì)胞凋亡率為(1.29±0.05)%；自噬促進(jìn)劑雷帕霉素處理組細(xì)胞凋亡率為(2.18±0.04)%,自噬抑制劑3-MA處理組細(xì)胞凋亡率為(3.71+0.10)%,雷帕霉素和3-MA處理組與對照組相比,凋亡率差異不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。43℃100mmin加熱組Cal-27細(xì)胞凋亡率為(29.63±0.03)%,與對照組相比,凋亡率明顯高于對照組,統(tǒng)計(jì)學(xué)上有顯著差異(P0.05)：自噬促進(jìn)劑雷帕霉素+43℃100min加熱組細(xì)胞凋亡率為(18.98±0.06)%,與43℃100min加熱組相比,凋亡率明顯降低,且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)；自噬抑制劑3-MA+43℃100min加熱組細(xì)胞凋亡率為(38.92±0.28)%,細(xì)胞凋亡率明顯高于加熱組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。(4)化學(xué)免疫印跡檢測發(fā)現(xiàn)：單獨(dú)加入雷帕霉素或3-MA,升高或降低細(xì)胞的自噬作用,LC3II/LC3I比值及Beclin-1、Atg5、Bax的表達(dá)量與對照組相比,無明顯變化,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)；43℃100min加熱時,LC3ⅡI/LC3I比值,Beclin-1、Atg5的表達(dá)量較對照組相比,明顯下降,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),Bax的表達(dá)量較單獨(dú)43℃100min加熱組升高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)；雷帕霉素+43℃100min加熱組,LC3II/LC3I比值,Beclin-1、Atg5的表達(dá)量較43℃100min加熱組明顯上升,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),Bax的表達(dá)量較43℃100min加熱組降低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)；3-MA+43℃100min加熱組,LC3II/LC3I比值,Beclin-1、Atg5的表達(dá)量較43℃100min加熱組明顯下降,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),Bax的表達(dá)量較43℃100min加熱組升高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。[結(jié)論]加溫可誘發(fā)舌鱗癌Cal-27細(xì)胞發(fā)生自噬。提高細(xì)胞自噬水平,會抑制熱誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡發(fā)生,降低熱殺傷腫瘤細(xì)胞作用；反之,降低細(xì)胞自噬水平,會促進(jìn)熱誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡發(fā)生,提高熱殺傷腫瘤細(xì)胞作用。
【關(guān)鍵詞】：舌鱗癌 Cal-27細(xì)胞 熱療 自噬 凋亡
【學(xué)位授予單位】：昆明醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R739.86
【目錄】：

• 英文縮略表5-6
• 摘要6-8
• Abstract8-11
• 前言11-14
• 材料和方法14-22
• 1. 主要試劑14-15
• 2. 主要設(shè)備15-16
• 3. 主要溶液配制16-17
• 4. 實(shí)驗(yàn)方法17-21
• 4.1 細(xì)胞培養(yǎng)17
• 4.2 細(xì)胞凍存17
• 4.3 細(xì)胞復(fù)蘇17
• 4.4 實(shí)驗(yàn)分組17-18
• 4.5 免疫熒光實(shí)驗(yàn)18
• 4.6 透射電子顯微鏡觀察18-19
• 4.7 細(xì)胞凋亡率檢測19
• 4.8 免疫印跡實(shí)驗(yàn)19-21
• 5 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析21-22
• 結(jié)果22-40
• 討論40-45
• 結(jié)論45-46
• 參考文獻(xiàn)46-48
• 綜述48-56
• 參考文獻(xiàn)54-56
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表文章情況56-57
• 致謝57

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本文編號：706380