本文關鍵詞：生物鐘基因Per1對Cyclins-CDKs-CKIs細胞周期網絡的調控作用及抑癌機理

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【摘要】：目的:探討生物鐘基因Per1對細胞周期相關基因的調控作用,以及對人口腔鱗癌細胞SCC15增殖、凋亡、細胞周期和體內成瘤的影響。方法:構建3組針對Per1 RNA的短發(fā)夾RNA(short hairpin RNA,shRNA)慢病毒重組質粒,轉染SCC15細胞,用Western-blot及實時熒光定量PCR(Quantitative real-time PCR,QRT-PCR)檢測篩選干擾效果最佳組為實驗組,對照組(Control-shRNA)為對任何基因均無干擾效應的慢病毒質粒,空白組為未做任何處理的SCC15細胞。用QRT-PCR檢測各組細胞中細胞周期相關基因p53、CyclinD1、CyclinE、CyclinA2、CyclinB1、CDK1、CDK2、CDK4、CDK6、p16、p21、Wee1、cdc25、E2F、Rb1 mRNA的表達;用流式細胞儀檢測各組細胞增殖、凋亡和細胞周期分布;將實驗組和空白組細胞分別接種于裸鼠背部皮下,觀察成瘤情況。結果:成功構建了3組Per1-shRNA慢病毒質粒,通過QRT-PCR和Western-blot證明Per1-shRNA-I組沉默效果最佳,作為實驗組。Per1-shRNA-I組細胞中CyclinD1、CyclinE、CyclinB1、CDK1和Wee1mRNA的表達水平較Control-shRNA和SCC15組顯著增高(P0.05),而p53、CyclinA2、p16、p21和cdc25 mRNA的表達水平顯著降低(P0.05),Control-shRNA和SCC15組細胞中各基因mRNA的表達水平無差異(P0.05),CDK2、CDK4、CDK6、E2F和Rb1 mRNA的表達水平在3組中均無顯著改變(P0.05);與Control-shRNA和SCC15組比較,Per1-shRNA-I組中細胞增殖指數顯著增高(P0.05),凋亡指數顯著降低(P0.05),S期的細胞數顯著降低(P0.05),G2/M期的細胞數顯著增加(P0.05),而Control-shRNA和SCC15組細胞的增殖指數、凋亡指數及細胞周期分布無差異(P0.05);Per1-shRNA-I組細胞體內成瘤能力顯著增強(P0.05)。結論:生物鐘基因Perl是重要的抑癌基因,Perl能調控下游眾多的細胞周期基因,其表達變化影響細胞細胞周期進程、增殖和凋亡的平衡失調及體內成瘤能力,對Per1深入研究有可能進一步明確癌癥的發(fā)生發(fā)展機制,為癌癥的治療提供新的有效分子靶點。
【關鍵詞】：生物鐘 Per1 細胞周期基因 口腔癌
【學位授予單位】：重慶醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R739.8
【目錄】：

• 英文縮略語名詞對照4-6
• 中文摘要6-8
• 英文摘要8-11
• 前言11-13
• 第一部分 PER1短發(fā)夾RNA（PER1-SHORT HAIRPIN RNA，，SHRNA)慢病毒干擾質粒載體構建和鑒定13-18
• 1 材料與方法13-16
• 1.1 材料13-14
• 1.2 方法14-16
• 1.3 統(tǒng)計學分析16
• 2 結果16-18
• 第二部分 PER1對CYCLINS-CDKS-CKIS細胞周期網絡的調控作用18-28
• 1 材料與方法18-23
• 1.1 材料18-19
• 1.2 方法19-23
• 2 結果23-28
• 第三部分 沉默PER1基因對口腔鱗癌SCC15細胞體內成瘤能力的影響28-30
• 1 材料與方法28
• 1.1 材料28
• 1.2 方法28
• 2 結果28-30
• 討論30-32
• 全文總結32-33
• 參考文獻33-38
• 文獻綜述38-49
• 參考文獻43-49
• 致謝49-50
• 攻讀碩士學位期間發(fā)表論文目錄50

【參考文獻】

中國期刊全文數據庫 前4條

1 葉華;楊凱;譚雪梅;趙丹;呂曉強;王青青;;鐘基因Per2和腫瘤相關鐘控基因在金黃地鼠口腔頰黏膜癌變不同階段的晝夜節(jié)律改變[J];華西口腔醫(yī)學雜志;2015年05期

2 譚雪梅;葉華;楊凱;陳丹;唐洪;;鼠口腔黏膜癌變過程中生物鐘基因Per1與細胞周期基因晝夜節(jié)律的表達[J];中華口腔醫(yī)學雜志;2015年07期

3 趙寧波;楊凱;陳丹;唐洪;趙丹;趙春蓉;;生物鐘PER1基因在口腔鱗癌中的晝夜節(jié)律變化及與體內腫瘤生長的關系[J];第三軍醫(yī)大學學報;2013年14期

4 趙春蓉;楊凱;趙寧波;唐洪;;生物鐘Per1基因在人頰部鱗狀細胞癌中的表達及臨床意義[J];重慶醫(yī)科大學學報;2013年02期

本文編號：639230