本文關(guān)鍵詞：變形鏈球菌耐氟菌株中耐酸相關(guān)基因atpABCDEFGH突變的檢測及意義

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【摘要】：目的： 齲病是危害人類身體健康的三大疾病之一，是牙體硬組織的慢性進(jìn)行性感染性疾病，普遍發(fā)生于各個(gè)年齡段。在各種發(fā)病因素中，粘附在牙齒表面的牙菌斑是引起齲病發(fā)生發(fā)展的始動(dòng)因子。牙菌斑中含有各種各樣的細(xì)菌，細(xì)菌以口腔中的食物殘留為為底物產(chǎn)酸，而變形鏈球菌作為主要病原菌，與齲病的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)。從20世紀(jì)40年代開始，人們就開始陸續(xù)使用氟化物及其產(chǎn)品來防止齲病。氟化物防齲主要是因?yàn)榉锬芙档脱烙再|(zhì)脫礦程度、促進(jìn)牙釉質(zhì)再礦化；同時(shí)抑制口腔中致齲菌的生長和產(chǎn)酸過程。氟化物的防齲作用在很長一段時(shí)間內(nèi)是真實(shí)有效的。但口腔中長期的局部高濃度氟環(huán)境可以引起變形鏈球菌耐氟菌株的出現(xiàn)。國內(nèi)外學(xué)者研究證明變形鏈球菌耐氟菌株擁有更強(qiáng)的致齲性和對氟化物的抗性，這賦予了耐氟菌株在高氟環(huán)境下繼續(xù)生存、產(chǎn)酸、促進(jìn)牙釉質(zhì)脫礦的能力，大大降低了氟化物防齲的效果。F0F1-ATP酶是由兩個(gè)結(jié)構(gòu)域構(gòu)成的功能蛋白，可將變形鏈球菌細(xì)胞內(nèi)ATP分解，產(chǎn)生的能量將細(xì)胞內(nèi)的質(zhì)子泵出細(xì)胞，維持細(xì)胞內(nèi)PH值穩(wěn)定，使細(xì)菌免受外界酸性環(huán)境的破壞而繼續(xù)生存。已經(jīng)有實(shí)驗(yàn)證明變形鏈球菌耐氟菌株的耐酸相關(guān)基因dltC，Dgk，comD，ccpA發(fā)生了個(gè)別位點(diǎn)的突變，可能與變形鏈球菌耐氟菌株相應(yīng)蛋白功能活性增強(qiáng)密切相關(guān)，確切相關(guān)性有待后續(xù)研究。本實(shí)驗(yàn)對變形鏈球菌耐氟菌株另一耐酸相關(guān)基因atpABCDEFGH進(jìn)行突變位點(diǎn)的檢測，探究是否發(fā)生堿基突變，若堿基突變證明耐氟菌株F0F1-ATP酶活性增強(qiáng)是由于基因突變所致；若堿基未發(fā)生突變，則推測耐氟菌株F0F1-ATP酶活性增強(qiáng)是由于耐氟菌株在高氟環(huán)境下的適應(yīng)性改變，或其他相關(guān)蛋白活性改變導(dǎo)致的連鎖反應(yīng)，具體機(jī)制有待研究。為研發(fā)更有效的防齲、治齲方法提供理論基礎(chǔ)。 方法： 1.變形鏈球菌耐氟菌株UA159-FR的鑒定 2.UA159-FR全基因組提取 3.PCR擴(kuò)增目的基因 4.重組質(zhì)粒的構(gòu)建：目的基因與PMD-18T載體連接，轉(zhuǎn)化入大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞中。 5.質(zhì)粒的提取，目的基因的鑒定 6.送檢測序 結(jié)果： 1.實(shí)驗(yàn)用菌為UA159-FR鑒定成功 2.成功構(gòu)建重組質(zhì)粒 3.完成UA159-FR中atpABCDEFGH的基因序列測定，將測序結(jié)果與Genbank上公布的變形鏈球菌UA159的atpABCDEFGH序列進(jìn)行對比發(fā)現(xiàn):將S.mutans UA159-FR中的基因atpABCDEFGH與S.mutans UA159通過blastn比對，發(fā)現(xiàn)所有堿基均未發(fā)生突變。 結(jié)論： UA159-FR中基因atpABCDEFGH的序列測定成功，未發(fā)現(xiàn)突變位點(diǎn)。但國內(nèi)外學(xué)者研究證明UA159-FR中的F0F1-ATP酶活性有所增強(qiáng)，本實(shí)驗(yàn)未發(fā)現(xiàn)突變位點(diǎn)，推測蛋白酶活性增強(qiáng)可能與基因甲基化有關(guān)，或者與其他相關(guān)蛋白功能改變有關(guān)。本實(shí)驗(yàn)證明F0F1-ATP酶活性增強(qiáng)與基因突變無關(guān)，但為進(jìn)一步研F0F1-ATP酶的結(jié)構(gòu)功能提供堅(jiān)實(shí)的理論基礎(chǔ)。
【關(guān)鍵詞】：變形鏈球菌 耐酸相關(guān)基因atpABCDEFGH 基因突變
【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R781.1
【目錄】：

• 附件4-5
• 中文摘要5-8
• Abstract8-12
• 第1章 引言12-15
• 第2章 材料和方法15-55
• 2.1 實(shí)驗(yàn)材料15-16
• 2.1.1 細(xì)菌和載體15
• 2.1.2 儀器設(shè)備15
• 2.1.3 試劑及溶液15-16
• 2.2 實(shí)驗(yàn)方法16-23
• 2.2.1 設(shè)計(jì)引物16-17
• 2.2.2 S.mutans UA159-FR 的復(fù)蘇，培養(yǎng)和鑒定17
• 2.2.3 FOREGENE 細(xì)菌 DNA 少量提取試劑盒提取 S.mutans UA159-FR 全基因組17-18
• 2.2.4 以 S.mutans UA159-FR 全基因組作為模板 PCR18-19
• 2.2.5 瓊脂糖凝膠電泳鑒定 PCR 產(chǎn)物19
• 2.2.6 Magen 瓊脂糖凝膠 DNA 回收試劑盒回收后 PCR 產(chǎn)物19-20
• 2.2.7 鑒定回收后 PCR 產(chǎn)物20
• 2.2.8 回收后 PCR 產(chǎn)物與 pMB18-T 載體連接20
• 2.2.9 連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化至大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞中20-21
• 2.2.10 Magen 常規(guī)質(zhì)粒提取試劑盒提取重組質(zhì)粒21-22
• 2.2.11 重組質(zhì)粒 PCR，瓊脂糖凝膠電泳鑒定22-23
• 2.2.12 重組質(zhì)粒送檢測序23
• 2.2.13 該實(shí)驗(yàn)重復(fù)三次23
• 2.3 結(jié)果23-55
• 2.3.1 S.mutans UA159-FR 培養(yǎng)23-24
• 2.3.2 atpAB/C/D/EF/GH PCR 產(chǎn)物24-25
• 2.3.3 大腸桿菌培養(yǎng)25
• 2.3.4 重組質(zhì)粒的提取與鑒定25-26
• 2.3.5 分析測序結(jié)果26-37
• 2.3.6 附圖37-55
• 第3章 討論55-61
• 3.1 S.MUTANS 及 S.MUTANS FR 的研究意義55-56
• 3.2 F0F1-ATP 酶的研究意義56-58
• 3.3 S.MUTANS FR 耐酸相關(guān)基因 ATPABCDEFGH 的研究意義58-59
• 3.4 基因突變的研究意義59-61
• 第4章 結(jié)論61-62
• 參考文獻(xiàn)62-66
• 導(dǎo)師簡介66-67
• 作者簡介67-68
• 致謝68

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前8條

1 張志民;任寶華;張家穎;高心;王成坤;;變形鏈球菌耐氟菌株中耐酸相關(guān)基因dgk突變的檢測及臨床意義[J];吉林大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);2008年05期

2 劉莉;張志民;王麗穎;鄭鵬;李會(huì);;變形鏈球菌耐氟菌株中耐酸相關(guān)基因gluA突變的檢測及其意義[J];吉林大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);2011年01期

3 張志民;任寶華;張家穎;高心;王成坤;;變形鏈球菌耐氟菌株中耐酸相關(guān)基因dltC突變的檢測及臨床意義[J];口腔生物醫(yī)學(xué);2010年01期

4 盛江筠,劉正;變形鏈球菌和遠(yuǎn)緣鏈球菌耐氟菌株DNAG+C含量測定[J];上�？谇会t(yī)學(xué);2001年01期

5 盛江筠,黃正蔚,劉正;變形鏈球菌耐氟菌株與親代菌株質(zhì)子移位膜ATP酶活性的比較[J];上�？谇会t(yī)學(xué);2005年01期

6 盛江筠,劉正;變形鏈球菌耐氟菌株的誘導(dǎo)及產(chǎn)酸性的實(shí)驗(yàn)研究[J];中華口腔醫(yī)學(xué)雜志;2000年02期

7 黃曉晶,劉天佳,陳國弟,辛軍平,陳舟;變形鏈球菌(血清型C)臨床分離株AP-PCR基因分型[J];中華口腔醫(yī)學(xué)雜志;2001年04期

8 于丹妮,陳錦英,殷曉萍,司進(jìn);變形鏈球菌耐氟株質(zhì)子移位ATP酶活性的體外研究[J];中華醫(yī)院感染學(xué)雜志;2005年01期

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本文編號(hào)：581511