本文關鍵詞：microRNA-188作用于靶基因SIX1負調(diào)控ERK信號通路抑制口腔鱗癌細胞的增殖侵襲

  更多相關文章： SIX1 口腔鱗癌 增殖 侵襲 細胞外信號調(diào)節(jié)激酶 上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化 miR-188

【摘要】：[目的]摸索SIX1、miR-188在口腔鱗癌組織細胞中的生物學效應及其所能具有的能力。分析SIX1在口腔鱗癌細胞中發(fā)揮其作用所依賴的信號通路以及miR-188在口腔鱗癌細胞中的潛在分子機制。[方法]原發(fā)性腫瘤樣本、口腔鱗癌新鮮組織以及相對應的臨近的健康組織進行免疫組織化學；細胞培養(yǎng)、轉(zhuǎn)染；實時熒光定量PCR；Western blot;集落形成實驗；MTT實驗；流式細胞術分析細胞周期；基質(zhì)膠侵襲實驗；熒光素報告實驗。[結(jié)果]1.SIX1在口腔鱗癌中的表達：正常的口腔上皮細胞里是沒有SIX1表達陽性染色的。在80例的口腔鱗癌病理樣本里有32例的SIX1呈現(xiàn)細胞核和細胞漿陽性反應。2.SIX1對于口腔鱗癌的臨床意義：SIX1的過度表達同較高的TNM分級,瘤體不同時期以及是否有淋巴結(jié)的轉(zhuǎn)移顯著相關。3.SIX1促進口腔鱗癌細胞的增殖和侵襲：Detroit 562細胞系內(nèi)源增殖數(shù)量偏大,KB細胞系內(nèi)源增殖數(shù)量偏小。SIX1轉(zhuǎn)染后能夠顯著上調(diào)SIX1信使RNA以及相應蛋白質(zhì)的表達量,siRNA基因干擾則能起到相反的作用。MTT發(fā)現(xiàn)SIX1轉(zhuǎn)染能夠增強KB細胞系的增殖能力,經(jīng)過siRNA處理的Detroit 562細胞系則阻礙細胞增殖。transwell實驗證明了,SIX1干擾后細胞的增殖浸潤弱化而SIX1轉(zhuǎn)染后細胞的增殖浸潤顯著增強。4.SIX1調(diào)控cyclin D1以及MMP-2:SIX1轉(zhuǎn)染能夠顯著提高cyclin D1以及MMP-2蛋白合成,SIX1干擾則抑制了這些蛋白的合成。5.SIX1通過ERK信號通路調(diào)控MMP-2：SIX1過表達能夠明顯提高ERK的磷酸化能力,相反對于JNK和p38的磷酸化能力不產(chǎn)生改變。6.SIX1調(diào)控上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化：SIX1過度表達能夠降低KB細胞群內(nèi)E-cadherin的含量水平,相反SIX1干擾會略提高E-cadherin的含量水平。同時SIX1對Snail和Twist蛋白質(zhì)的表達還具有正向調(diào)控作用。7.miR-188在口腔鱗癌細胞中表達下調(diào)-13腔鱗癌病理組織內(nèi)miR-188的含量顯著下調(diào)�？谇击[癌病理組織細胞中miR-188含量較相應的健康部分為少,比值為0.457。8.miR-188在體外細胞系中的表達：Detroit 562細胞群內(nèi)miR-188的含量并不高,而FaDu細胞群內(nèi)miR-188的含量略高。miR-188 mimic轉(zhuǎn)染能夠顯著上調(diào)Detroit 562細胞系中miR-188的表達量；但miR-188抑制劑能夠顯著下調(diào)FaDu細胞系中miR-188的含量。9.miR-188在體外能夠調(diào)控細胞的增殖和侵襲miR-188 mimic轉(zhuǎn)染后Detroit 562細胞系集落形成數(shù)目顯著降低,miR-188抑制劑轉(zhuǎn)染后FaDu細胞系集落形成數(shù)目顯著增加�；|(zhì)膠侵襲實驗中Detroit 562細胞系中外源性miR-188含量增加,穿過基底膠的細胞總量明顯降低。miR-188抑制劑轉(zhuǎn)染FaDu細胞系,穿過基質(zhì)膠到達上層的細胞數(shù)目明顯增加。10.miR-188在體外能夠調(diào)控細胞周期進程：經(jīng)過miR-188 mimic爭染后能夠抑制細胞由G1向S轉(zhuǎn)變,經(jīng)過miR-188抑制劑處理的細胞系能夠促進細胞周期進程的轉(zhuǎn)變。11.miR-188上調(diào)cyclin D1, cyclin E和MMP9蛋白的表達量：經(jīng)過miR-188 mimic轉(zhuǎn)染后能夠顯著下調(diào)cyclin D1, cyclin E和MMP9的表達量,miR-188抑制劑轉(zhuǎn)染能夠明顯上調(diào)以上蛋白質(zhì)的表達量。12.miR-188負調(diào)控致癌基因SIX1:Detroit 562細胞系轉(zhuǎn)染后,miR-188的過量表達能夠顯著減少SIX1信使RNA的表達量。13.S1X1為miR-188作用的直接靶基因：載有野生型SIX1基因的Detroit 562細胞系,經(jīng)過miR-188mimic的轉(zhuǎn)染之后,熒光含量測定呈現(xiàn)降低的趨勢,而載有突變型SIX1基因的Detroit562細胞系中熒光強度則沒有明顯變化。表明SIX1基因的3'端非編碼區(qū)域是miR-188的直接結(jié)合位點,并通過這樣的結(jié)合下調(diào)SIX1信使RNA的表達量。miR-188與SIX1信使RNA表達量呈現(xiàn)負相關。SIX1基因千擾后發(fā)現(xiàn)：SIX1能夠消除siRNASIX1對于cyclin D1以及MMP9蛋白質(zhì)表達下調(diào)的影響。在SIX1基因沉默的FaDu細胞系中,使用miR-188抑制劑也未能上調(diào)cyclin D1以及MMP9蛋白質(zhì)的表達量。[結(jié)論]1.SIX1于人類口腔鱗癌病理組織中呈過量表達。2.SIX1的過表達對于腫瘤細胞的增殖、浸潤有促進作用。3.SIX1促進腫瘤細胞增殖和浸潤的作用機制為ERK-MMP-2信號傳導以及上皮間質(zhì)的轉(zhuǎn)化(EMT).4. miR-188是口腔鱗癌細胞中一種下調(diào)的miRNA,并且它是一種惡性腫瘤細胞抑制劑。5.在口腔鱗癌病理組織中miR-188通過SIX1基因達到抑制細胞的擴增和浸潤的目的。
【關鍵詞】：SIX1 口腔鱗癌 增殖 侵襲 細胞外信號調(diào)節(jié)激酶 上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化 miR-188
【學位授予單位】：中國人民解放軍醫(yī)學院
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R739.8
【目錄】：

• 英文縮略語5-7
• 中文摘要7-9
• Abstract9-11
• 前言11-13
• 技術路線13-14
• 1. 課題研究背景14-16
• 2. 實驗一 SIX1在口腔鱗癌中過表達并促進細胞的增殖及侵襲的研究16-33
• 2.1 材料與方法16-25
• 2.2 結(jié)果25-31
• 2.3 討論31-32
• 2.4 小結(jié)32-33
• 3. 實驗二 SIX1通過ERK信號通路以及EMT促進細胞侵襲33-42
• 3.1 材料與方法33-38
• 3.2 結(jié)果38-40
• 3.3 討論40-41
• 3.4 小結(jié)41-42
• 4. 實驗三 microRNA-188在口腔鱗癌細胞中下調(diào)并通過靶基因SIX1抑制細胞的增殖與侵襲42-60
• 4.1 材料與方法42-51
• 4.2 結(jié)果51-59
• 4.3 討論59-60
• 4.4 小結(jié)60
• 5. 全文總結(jié)60-62
• 參考文獻62-67
• 文獻綜述67-77
• 參考文獻73-77
• 個人簡介77
• 攻讀學位期間發(fā)表文章情況77-78
• 致謝78

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9 ;Possible Mechanism Responsible for Changes of β-dystroglycanin Oral Squamous Cell Carcinoma[J];口腔醫(yī)學研究;2006年01期

10 李德超;李善昌;關鍵;;口腔鱗癌細胞缺氧誘導因子表達水平與其對順鉑敏感性的研究[J];臨床和實驗醫(yī)學雜志;2007年11期

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本文編號：581130