本文關(guān)鍵詞：PRDX3真核表達(dá)載體構(gòu)建及亞細(xì)胞定位

  更多相關(guān)文章： 過(guò)氧化物還原酶 克隆 真核表達(dá) 亞細(xì)胞定位

【摘要】：目的構(gòu)建帶FLAG標(biāo)簽的過(guò)氧化物還原酶3(peroxiredoxin3,PRDX3,PRX3)的真核表達(dá)載體,并對(duì)其在人舌癌SCC15細(xì)胞中的定位進(jìn)行檢測(cè)。方法以乳腺文庫(kù)為模板,PCR擴(kuò)增帶有FLAG標(biāo)簽的PRDX3基因片段,并將擴(kuò)增產(chǎn)物插入到PCDH空載體中,構(gòu)建成PCDH-FLAG-PRDX3,質(zhì)粒測(cè)序正確后瞬時(shí)轉(zhuǎn)染入人胚腎293T細(xì)胞,Western免疫印跡檢測(cè)克隆載體的表達(dá)情況,細(xì)胞免疫熒光實(shí)驗(yàn)檢測(cè)PRDX3的亞細(xì)胞定位。結(jié)果雙酶切和測(cè)序結(jié)果表明,PCDH-FLAG-PRDX3真核表達(dá)載體構(gòu)建成功,轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞后成功表達(dá)了FLAG-PRDX3融合蛋白;細(xì)胞免疫熒光顯示FLAG-PRDX3蛋白定位于舌癌SCC15細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)中,不存在于細(xì)胞核內(nèi)。結(jié)論成功構(gòu)建了帶FLAG標(biāo)簽的PRDX3真核表達(dá)載體,并檢測(cè)其定位于舌癌SCC15細(xì)胞質(zhì)中,為進(jìn)一步明確PRDX3在舌癌發(fā)生發(fā)展中的功能及分子機(jī)制奠定基礎(chǔ)。
【作者單位】： 安徽醫(yī)科大學(xué)附屬安慶市立醫(yī)院口腔科;軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院生物工程研究所;大連醫(yī)科大學(xué)腫瘤干細(xì)胞研究院;解放軍316醫(yī)院內(nèi)分泌科;
【關(guān)鍵詞】： 過(guò)氧化物還原酶 克隆 真核表達(dá) 亞細(xì)胞定位
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金面上資助項(xiàng)目(81572382)
【分類號(hào)】：R739.8
【正文快照】： 過(guò)氧化物還原酶3(peroxiredoxin3,PRDX3,PRX3)是抗氧化物酶的一種,屬于過(guò)氧化物還原酶家族成員之一。該家族廣泛存在于原核生物和真核生物中,是具有過(guò)氧化氫酶活性的抗氧化蛋白[1~5]。這一家族主要通過(guò)降低活性氧化物(ROS)水平從而在腫瘤發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮作用。ROS是一類含氧自

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