本文關鍵詞：PRDX3真核表達載體構建及亞細胞定位

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【摘要】：目的構建帶FLAG標簽的過氧化物還原酶3(peroxiredoxin3,PRDX3,PRX3)的真核表達載體,并對其在人舌癌SCC15細胞中的定位進行檢測。方法以乳腺文庫為模板,PCR擴增帶有FLAG標簽的PRDX3基因片段,并將擴增產物插入到PCDH空載體中,構建成PCDH-FLAG-PRDX3,質粒測序正確后瞬時轉染入人胚腎293T細胞,Western免疫印跡檢測克隆載體的表達情況,細胞免疫熒光實驗檢測PRDX3的亞細胞定位。結果雙酶切和測序結果表明,PCDH-FLAG-PRDX3真核表達載體構建成功,轉染293T細胞后成功表達了FLAG-PRDX3融合蛋白;細胞免疫熒光顯示FLAG-PRDX3蛋白定位于舌癌SCC15細胞的細胞質中,不存在于細胞核內。結論成功構建了帶FLAG標簽的PRDX3真核表達載體,并檢測其定位于舌癌SCC15細胞質中,為進一步明確PRDX3在舌癌發(fā)生發(fā)展中的功能及分子機制奠定基礎。
【作者單位】： 安徽醫(yī)科大學附屬安慶市立醫(yī)院口腔科;軍事醫(yī)學科學院生物工程研究所;大連醫(yī)科大學腫瘤干細胞研究院;解放軍316醫(yī)院內分泌科;
【關鍵詞】： 過氧化物還原酶 克隆 真核表達 亞細胞定位
【基金】：國家自然科學基金面上資助項目(81572382)
【分類號】：R739.8
【正文快照】： 過氧化物還原酶3(peroxiredoxin3,PRDX3,PRX3)是抗氧化物酶的一種,屬于過氧化物還原酶家族成員之一。該家族廣泛存在于原核生物和真核生物中,是具有過氧化氫酶活性的抗氧化蛋白[1~5]。這一家族主要通過降低活性氧化物(ROS)水平從而在腫瘤發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮作用。ROS是一類含氧自

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本文編號：576117