目的：觀察體外應(yīng)用醋酸棉酚(GAA)對(duì)人舌鱗癌Tca8113細(xì)胞hMLH1、MGMT基因蛋白表達(dá)的情況;檢測(cè)體外應(yīng)用GAA對(duì)人舌鱗癌Tca8113細(xì)胞hMLH1、MGMT基因mRNA水平的影響;檢測(cè)體外應(yīng)用GAA對(duì)入舌鱗癌Tca8113細(xì)胞DNA甲基轉(zhuǎn)移酶mRNA的表達(dá)情況。探討棉酚的抗腫,瘤作用機(jī)制。 方法：常規(guī)培養(yǎng)人舌鱗癌Tca8113細(xì)胞,用不同濃度的GAA處理細(xì)胞,應(yīng)用Western-b lot檢測(cè)hMLH1、MGMT基因的蛋白水平變化;利用免疫共沉淀法檢測(cè)人舌鱗癌Tca8113細(xì)胞hMLH1、MGMT基因蛋白相互作用；應(yīng)用RT-PCR法檢測(cè)不同濃度的GAA處理后的人舌鱗癌Tca8113細(xì)胞hMLH1、MGMT基因及DNA甲基轉(zhuǎn)移酶(DNMT1)mRNA表達(dá)的變化。 結(jié)果：Western-blot檢測(cè)顯示,用不同濃度的GAA分別處理人舌鱗癌Tca8113細(xì)胞24h.48h、72h, hMLH1、MGMT基因的蛋白表達(dá)比對(duì)照組明顯增高(P<0.05);免疫共沉淀法檢測(cè)結(jié)果顯示人舌鱗癌Tca8113細(xì)胞hMLH1、MGMT基因蛋白表達(dá)有相互作用;經(jīng)RT-PCR檢測(cè),用不...

【文章頁數(shù)】：65 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
英文縮寫詞表
摘要
Abstract
引言
一 實(shí)驗(yàn)材料
    1. 細(xì)胞株
    2. 實(shí)驗(yàn)藥物
    3. 主要試劑
    4. 主要實(shí)驗(yàn)儀器
    5. 主要溶液配制
    6. 軟件
二 實(shí)驗(yàn)方法
    1. 細(xì)胞培養(yǎng)
    2. 應(yīng)用Western-blot檢測(cè)GAA對(duì)人舌鱗癌Tca8113細(xì)胞hMLH1、MGMT基因蛋白水平變化
        2.1 Western-blot原理
        2.2 Western-blot測(cè)定步驟
            2.2.1 試劑配置
            2.2.2 細(xì)胞總蛋白的提取
            2.2.3 電泳
    3. 免疫共沉淀法檢測(cè)人舌鱗癌Tca8113細(xì)胞hMLH1、MGMT基因蛋白相互用
        3.1 免疫共沉淀原理
        3.2 免疫共沉淀檢測(cè)步驟
    4. 實(shí)時(shí)熒光定量RT-PCR(real-time fluorescence quantitative RT-PCR)法檢測(cè)不同濃度的GAA處理后的人舌鱗癌Tca8113細(xì)胞hMLH1、MGMT基因及DNA甲基轉(zhuǎn)移酶(DNMT1)mRNA表達(dá)的變化
        4.1 Real-time PCR的原理
        4.2 Real-time PCR相對(duì)定量分析方法
        4.3 RNA提取
        4.4 反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)第一鏈cDNA合成
        4.5 Real-time PCR
        4.5.1 設(shè)計(jì)引物序列
            4.5.2 Real-time PCR擴(kuò)增的熱循環(huán)條件
    5. 數(shù)據(jù)分析
三 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
    1. Western-blot檢測(cè)GAA對(duì)人舌鱗癌Tca8113細(xì)胞hMLH1、MGMT基因蛋白水平變化
        1.1 hMLH1蛋白表達(dá)
        1.2 MGMT蛋白表達(dá)
    2. 免疫共沉淀法檢測(cè)人舌鱗癌Tca8113細(xì)胞hMLH1及MGMT基因蛋白相互作用
    3. RT-PCR法檢測(cè)不同濃度的GAA處理后的人舌鱗癌Tca8113細(xì)胞hMLH1、MGMT基因及DNA甲基轉(zhuǎn)移酶(DNMT1)mRNA表達(dá)檢測(cè)結(jié)果
        3.1 hMLH1 mRNA表達(dá)
        3.2 MGMT mRNA表達(dá)
        3.3 DNMT1 mRNA表達(dá)
四 討論
五 問題與展望
六 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
文獻(xiàn)綜述：棉酚及其衍生物抗腫瘤作用的研究進(jìn)展
    參考文獻(xiàn)
攻讀學(xué)位期間發(fā)表的文章
致謝



本文編號(hào)：4027617