醋酸棉酚對人舌鱗癌Tca8113細胞MGMT和hMLH1基因蛋白及mRNA表達的影響
發(fā)布時間:2025-01-15 17:20
目的:觀察體外應用醋酸棉酚(GAA)對人舌鱗癌Tca8113細胞hMLH1、MGMT基因蛋白表達的情況;檢測體外應用GAA對人舌鱗癌Tca8113細胞hMLH1、MGMT基因mRNA水平的影響;檢測體外應用GAA對入舌鱗癌Tca8113細胞DNA甲基轉移酶mRNA的表達情況。探討棉酚的抗腫,瘤作用機制。 方法:常規(guī)培養(yǎng)人舌鱗癌Tca8113細胞,用不同濃度的GAA處理細胞,應用Western-b lot檢測hMLH1、MGMT基因的蛋白水平變化;利用免疫共沉淀法檢測人舌鱗癌Tca8113細胞hMLH1、MGMT基因蛋白相互作用;應用RT-PCR法檢測不同濃度的GAA處理后的人舌鱗癌Tca8113細胞hMLH1、MGMT基因及DNA甲基轉移酶(DNMT1)mRNA表達的變化。 結果:Western-blot檢測顯示,用不同濃度的GAA分別處理人舌鱗癌Tca8113細胞24h.48h、72h, hMLH1、MGMT基因的蛋白表達比對照組明顯增高(P<0.05);免疫共沉淀法檢測結果顯示人舌鱗癌Tca8113細胞hMLH1、MGMT基因蛋白表達有相互作用;經RT-PCR檢測,用不...
【文章頁數】:65 頁
【學位級別】:碩士
【文章目錄】:
英文縮寫詞表
摘要
Abstract
引言
一 實驗材料
1. 細胞株
2. 實驗藥物
3. 主要試劑
4. 主要實驗儀器
5. 主要溶液配制
6. 軟件
二 實驗方法
1. 細胞培養(yǎng)
2. 應用Western-blot檢測GAA對人舌鱗癌Tca8113細胞hMLH1、MGMT基因蛋白水平變化
2.1 Western-blot原理
2.2 Western-blot測定步驟
2.2.1 試劑配置
2.2.2 細胞總蛋白的提取
2.2.3 電泳
3. 免疫共沉淀法檢測人舌鱗癌Tca8113細胞hMLH1、MGMT基因蛋白相互用
3.1 免疫共沉淀原理
3.2 免疫共沉淀檢測步驟
4. 實時熒光定量RT-PCR(real-time fluorescence quantitative RT-PCR)法檢測不同濃度的GAA處理后的人舌鱗癌Tca8113細胞hMLH1、MGMT基因及DNA甲基轉移酶(DNMT1)mRNA表達的變化
4.1 Real-time PCR的原理
4.2 Real-time PCR相對定量分析方法
4.3 RNA提取
4.4 反轉錄反應第一鏈cDNA合成
4.5 Real-time PCR
4.5.1 設計引物序列
4.5.2 Real-time PCR擴增的熱循環(huán)條件
5. 數據分析
三 實驗結果
1. Western-blot檢測GAA對人舌鱗癌Tca8113細胞hMLH1、MGMT基因蛋白水平變化
1.1 hMLH1蛋白表達
1.2 MGMT蛋白表達
2. 免疫共沉淀法檢測人舌鱗癌Tca8113細胞hMLH1及MGMT基因蛋白相互作用
3. RT-PCR法檢測不同濃度的GAA處理后的人舌鱗癌Tca8113細胞hMLH1、MGMT基因及DNA甲基轉移酶(DNMT1)mRNA表達檢測結果
3.1 hMLH1 mRNA表達
3.2 MGMT mRNA表達
3.3 DNMT1 mRNA表達
四 討論
五 問題與展望
六 結論
參考文獻
文獻綜述:棉酚及其衍生物抗腫瘤作用的研究進展
參考文獻
攻讀學位期間發(fā)表的文章
致謝
本文編號:4027617
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【學位級別】:碩士
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摘要
Abstract
引言
一 實驗材料
1. 細胞株
2. 實驗藥物
3. 主要試劑
4. 主要實驗儀器
5. 主要溶液配制
6. 軟件
二 實驗方法
1. 細胞培養(yǎng)
2. 應用Western-blot檢測GAA對人舌鱗癌Tca8113細胞hMLH1、MGMT基因蛋白水平變化
2.1 Western-blot原理
2.2 Western-blot測定步驟
2.2.1 試劑配置
2.2.2 細胞總蛋白的提取
2.2.3 電泳
3. 免疫共沉淀法檢測人舌鱗癌Tca8113細胞hMLH1、MGMT基因蛋白相互用
3.1 免疫共沉淀原理
3.2 免疫共沉淀檢測步驟
4. 實時熒光定量RT-PCR(real-time fluorescence quantitative RT-PCR)法檢測不同濃度的GAA處理后的人舌鱗癌Tca8113細胞hMLH1、MGMT基因及DNA甲基轉移酶(DNMT1)mRNA表達的變化
4.1 Real-time PCR的原理
4.2 Real-time PCR相對定量分析方法
4.3 RNA提取
4.4 反轉錄反應第一鏈cDNA合成
4.5 Real-time PCR
4.5.1 設計引物序列
4.5.2 Real-time PCR擴增的熱循環(huán)條件
5. 數據分析
三 實驗結果
1. Western-blot檢測GAA對人舌鱗癌Tca8113細胞hMLH1、MGMT基因蛋白水平變化
1.1 hMLH1蛋白表達
1.2 MGMT蛋白表達
2. 免疫共沉淀法檢測人舌鱗癌Tca8113細胞hMLH1及MGMT基因蛋白相互作用
3. RT-PCR法檢測不同濃度的GAA處理后的人舌鱗癌Tca8113細胞hMLH1、MGMT基因及DNA甲基轉移酶(DNMT1)mRNA表達檢測結果
3.1 hMLH1 mRNA表達
3.2 MGMT mRNA表達
3.3 DNMT1 mRNA表達
四 討論
五 問題與展望
六 結論
參考文獻
文獻綜述:棉酚及其衍生物抗腫瘤作用的研究進展
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本文編號:4027617
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