目的：觀察體外應用醋酸棉酚(GAA)對人舌鱗癌Tca8113細胞hMLH1、MGMT基因蛋白表達的情況;檢測體外應用GAA對人舌鱗癌Tca8113細胞hMLH1、MGMT基因mRNA水平的影響;檢測體外應用GAA對入舌鱗癌Tca8113細胞DNA甲基轉移酶mRNA的表達情況。探討棉酚的抗腫,瘤作用機制。 方法：常規(guī)培養(yǎng)人舌鱗癌Tca8113細胞,用不同濃度的GAA處理細胞,應用Western-b lot檢測hMLH1、MGMT基因的蛋白水平變化;利用免疫共沉淀法檢測人舌鱗癌Tca8113細胞hMLH1、MGMT基因蛋白相互作用；應用RT-PCR法檢測不同濃度的GAA處理后的人舌鱗癌Tca8113細胞hMLH1、MGMT基因及DNA甲基轉移酶(DNMT1)mRNA表達的變化。 結果：Western-blot檢測顯示,用不同濃度的GAA分別處理人舌鱗癌Tca8113細胞24h.48h、72h, hMLH1、MGMT基因的蛋白表達比對照組明顯增高(P<0.05);免疫共沉淀法檢測結果顯示人舌鱗癌Tca8113細胞hMLH1、MGMT基因蛋白表達有相互作用;經RT-PCR檢測,用不...

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【學位級別】：碩士

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英文縮寫詞表
摘要
Abstract
引言
一 實驗材料
    1. 細胞株
    2. 實驗藥物
    3. 主要試劑
    4. 主要實驗儀器
    5. 主要溶液配制
    6. 軟件
二 實驗方法
    1. 細胞培養(yǎng)
    2. 應用Western-blot檢測GAA對人舌鱗癌Tca8113細胞hMLH1、MGMT基因蛋白水平變化
        2.1 Western-blot原理
        2.2 Western-blot測定步驟
            2.2.1 試劑配置
            2.2.2 細胞總蛋白的提取
            2.2.3 電泳
    3. 免疫共沉淀法檢測人舌鱗癌Tca8113細胞hMLH1、MGMT基因蛋白相互用
        3.1 免疫共沉淀原理
        3.2 免疫共沉淀檢測步驟
    4. 實時熒光定量RT-PCR(real-time fluorescence quantitative RT-PCR)法檢測不同濃度的GAA處理后的人舌鱗癌Tca8113細胞hMLH1、MGMT基因及DNA甲基轉移酶(DNMT1)mRNA表達的變化
        4.1 Real-time PCR的原理
        4.2 Real-time PCR相對定量分析方法
        4.3 RNA提取
        4.4 反轉錄反應第一鏈cDNA合成
        4.5 Real-time PCR
        4.5.1 設計引物序列
            4.5.2 Real-time PCR擴增的熱循環(huán)條件
    5. 數據分析
三 實驗結果
    1. Western-blot檢測GAA對人舌鱗癌Tca8113細胞hMLH1、MGMT基因蛋白水平變化
        1.1 hMLH1蛋白表達
        1.2 MGMT蛋白表達
    2. 免疫共沉淀法檢測人舌鱗癌Tca8113細胞hMLH1及MGMT基因蛋白相互作用
    3. RT-PCR法檢測不同濃度的GAA處理后的人舌鱗癌Tca8113細胞hMLH1、MGMT基因及DNA甲基轉移酶(DNMT1)mRNA表達檢測結果
        3.1 hMLH1 mRNA表達
        3.2 MGMT mRNA表達
        3.3 DNMT1 mRNA表達
四 討論
五 問題與展望
六 結論
參考文獻
文獻綜述：棉酚及其衍生物抗腫瘤作用的研究進展
    參考文獻
攻讀學位期間發(fā)表的文章
致謝



本文編號：4027617