目的構(gòu)建HIF-1α(Hypoxia inducible factor1α,(?)氧誘導(dǎo)因子-1α)的慢病毒載體(Lenti-HIF-lα),轉(zhuǎn)染骨髓基質(zhì)干細(xì)胞(Bone marrow stromal cells,BMSCs)后,檢測(cè)HIF-1α在BMSCs內(nèi)的不同時(shí)間點(diǎn)的表達(dá)及其位置的鑒定。 方法根據(jù)野生型人源的HIF.1α基因(NM₀01530)序列設(shè)計(jì)引物及序列片段的PCR擴(kuò)增,將目的基因PCR產(chǎn)物連接到載體pEGFP-N1上,構(gòu)建真核表達(dá)載體pEGFP-N1-HIF-1α,挑選陽(yáng)性克隆進(jìn)行測(cè)序鑒定,然后將目的基因PCR產(chǎn)物和目的載體pEGFP-N1用NheI和BamHI分別進(jìn)行酶切,經(jīng)凝膠電泳進(jìn)行pEGFP-N1-HIF-1α重組載體菌落PCR鑒定,鑒定重組質(zhì)粒中的HIF-1α目的基因。采用LR重組系統(tǒng)將目的序列重組到慢病毒載體plenti6.3V5-DEST上,構(gòu)建慢病毒載體Lenti.HIF-1α(Lenti-LacZ為對(duì)照組)。取細(xì)胞狀態(tài)良好,處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的293T細(xì)胞,用構(gòu)建的慢病毒表達(dá)載體pEGFP-N1-HIF-1α-IRES-GRP及包裝質(zhì)...

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【學(xué)位級(jí)別】：碩士

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中文摘要
Abstract
1 引言
2 實(shí)驗(yàn)材料與方法
3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
4 討論
5 結(jié)論
6 參考文獻(xiàn)
附錄
致謝
綜述
    參考文獻(xiàn)



本文編號(hào)：3991955