發(fā)布時間：2024-06-10 21:56

　　目的構(gòu)建HIF-1α(Hypoxia inducible factor1α,(?)氧誘導(dǎo)因子-1α)的慢病毒載體(Lenti-HIF-lα),轉(zhuǎn)染骨髓基質(zhì)干細胞(Bone marrow stromal cells,BMSCs)后,檢測HIF-1α在BMSCs內(nèi)的不同時間點的表達及其位置的鑒定。 方法根據(jù)野生型人源的HIF.1α基因(NM₀01530)序列設(shè)計引物及序列片段的PCR擴增,將目的基因PCR產(chǎn)物連接到載體pEGFP-N1上,構(gòu)建真核表達載體pEGFP-N1-HIF-1α,挑選陽性克隆進行測序鑒定,然后將目的基因PCR產(chǎn)物和目的載體pEGFP-N1用NheI和BamHI分別進行酶切,經(jīng)凝膠電泳進行pEGFP-N1-HIF-1α重組載體菌落PCR鑒定,鑒定重組質(zhì)粒中的HIF-1α目的基因。采用LR重組系統(tǒng)將目的序列重組到慢病毒載體plenti6.3V5-DEST上,構(gòu)建慢病毒載體Lenti.HIF-1α(Lenti-LacZ為對照組)。取細胞狀態(tài)良好,處于對數(shù)生長期的293T細胞,用構(gòu)建的慢病毒表達載體pEGFP-N1-HIF-1α-IRES-GRP及包裝質(zhì)...

【文章頁數(shù)】：49 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
中英文縮略詞表
中文摘要
Abstract
1 引言
2 實驗材料與方法
3 實驗結(jié)果
4 討論
5 結(jié)論
6 參考文獻
附錄
致謝
綜述
    參考文獻



本文編號：3991955