目的:用人骨形成蛋白-7(human bone morphogenetic protein-7, hBMP-7)基因轉(zhuǎn)染SD大鼠骨髓基質(zhì)細(xì)胞(bone marrow stromal cells,BMSCs),并復(fù)合膠原膜BME-10X在體外構(gòu)建組織工程化復(fù)合物,移植修復(fù)骨質(zhì)疏松癥SD大鼠牙周組織缺損,探討hBMP-7基因修飾的BMSCs在促進(jìn)骨質(zhì)疏松大鼠牙周組織再生中的作用,為基因治療與組織工程技術(shù)聯(lián)合在牙周組織再生治療中的進(jìn)一步應(yīng)用奠定基礎(chǔ)。 方法:1、利用切除SD大鼠雙側(cè)卵巢的方法建立骨質(zhì)疏松大鼠模型,通過體重檢測、骨密度測量、血清生化檢測以及標(biāo)本組織學(xué)觀察確定絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松癥模型建立成功;2、全骨髓貼壁法培養(yǎng)SD大鼠骨髓基質(zhì)細(xì)胞,觀察去卵巢(OVX)大鼠和假手術(shù)大鼠(SHAM)BMSCs的增殖情況及堿性磷酸酶(alkaline phosphatase, ALP)表達(dá)的差異。體外通過重組腺病毒轉(zhuǎn)染hBMP-7基因,通過熒光倒置相差顯微鏡觀察、流式細(xì)胞儀、RealTime-PCR、免疫細(xì)胞化學(xué)染色、ELISA以及Western Blot檢測目的基因的轉(zhuǎn)錄和表達(dá)。3、體外hBMP-7基...

【文章頁數(shù)】：116 頁

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【部分圖文】：

圖1-1SD大鼠卵巢切除術(shù)及切除的卵巢和脂肪組織：A：切開腹部皮膚；B：暴露腹腔；C：探及子宮體后沿子宮角上行找到卵巢（子宮體：紅色箭頭所示，子宮角：黑色箭頭所示）；D：暴露雙側(cè)卵巢；E：雙端結(jié)扎卵巢伴行血管；F：OVX組切除的卵巢及SHAM組切除的脂肪（卵巢：紅色箭頭所示；脂肪：黃色箭頭所示）

12圖1-1SD大鼠卵巢切除術(shù)及切除的卵巢和脂肪組織：A：切開腹部皮膚；B：暴露腹腔；C：探及子宮體后沿子宮角上行找到卵巢（子宮體：紅色箭頭所示，子宮角：黑色箭頭所示）；D：暴露雙側(cè)卵巢；E：雙端結(jié)扎卵巢伴行血管；F：OVX組切除的卵巢及SHAM組切除的脂肪（卵巢：紅....

圖1-2SD大鼠骨密度(BMD)測量示意圖

圖1-2SD大鼠骨密度(BMD)測量示意圖本取材及固定。大鼠用乙醚麻醉后從眶后靜脈取血，每只2-3ml，常溫靜置分清，保存于－20℃冰箱待用。大鼠脫頸處死后立即取大鼠隨機(jī)剝離軟組織后，將股骨標(biāo)本置入4%多聚甲醛中固定，用于組解剖SD大鼠確認(rèn)卵巢是否完全摘除，并觀察大....

圖1-3A：OVX組卵巢組織顯微鏡下觀察的形態(tài)（×100）

(4)浸蠟6h，石蠟包埋；(5)切片：股骨遠(yuǎn)心干骺端連續(xù)切片10張，厚度4μm；(6)H&E染色：常規(guī)H&E染色。（七）統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。所得數(shù)據(jù)以Mean±SD(均值±標(biāo)準(zhǔn)差)表示，采用SPSS16.0統(tǒng)計(jì)軟件，各指標(biāo)數(shù)據(jù)經(jīng)過正態(tài)性檢驗(yàn)和方差齊性檢驗(yàn)，采用兩....

圖1-4SD大鼠去卵巢前后體重變化,*與SHAM組相比P<0.05

SHAM組略有躁動(dòng)不安，糞便略為干燥，術(shù)后1周癥狀消失。術(shù)后8w，OVX組活動(dòng)較遲緩，動(dòng)物體型變大，反應(yīng)遲鈍，毛發(fā)較稀疏、暗淡無光澤，后肢支撐力減弱；SHAM組毛發(fā)相對(duì)較為光潔，體型及活動(dòng)均正常，反應(yīng)較靈敏。三、SD大鼠卵巢摘除前后的體重變化。實(shí)驗(yàn)前兩組大鼠體重不存....

本文編號(hào)：3955750