目的:探討內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激(ERS)相關(guān)的蛋白激酶R樣內(nèi)質(zhì)網(wǎng)激酶(PERK)/真核翻譯起始因子2α(eIF2α)通路在尖吻蝮蛇毒抑瘤組分I(AAVC-I)誘導(dǎo)人舌鱗癌Tca8113細(xì)胞凋亡中的作用及機(jī)制。方法:不同實(shí)驗(yàn)濃度(4. 0、8. 0和16. 0 mg/L)的AAVC-I處理Tca8113細(xì)胞24 h后采用蘇木素-伊紅(HE)染色觀察細(xì)胞形態(tài);流式細(xì)胞術(shù)(annexin V-FITC/PI雙熒光染色法)檢測(cè)細(xì)胞凋亡;Western blot檢測(cè)ERS相關(guān)蛋白葡萄糖調(diào)節(jié)蛋白78(GRP78),PERK/eIF2α通路中的磷酸化PERK(p-PERK)、磷酸化eIF2α(p-eIF2α)及下游的活化轉(zhuǎn)錄因子4(ATF4)和CCAAT/增強(qiáng)子結(jié)合蛋白同源蛋白(CHOP),以及細(xì)胞凋亡相關(guān)蛋白Bcl-2和Bax的蛋白表達(dá)水平。結(jié)果:AAVCI各濃度組分別與正常對(duì)照組相比以及各濃度組之間相互比較的結(jié)果顯示,隨著AAVC-I濃度的增加,Tca8113細(xì)胞活力逐漸降低,細(xì)胞逐漸皺縮變小,間隙增大,胞核濃縮、碎裂,出現(xiàn)凋亡小體,細(xì)胞凋亡率增高(P<0. 05);GRP78、p-PERK、p-e...

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圖3AAVC-I對(duì)Tca8113細(xì)胞凋亡的影響

本實(shí)驗(yàn)首先應(yīng)用MTT法檢測(cè)不同濃度的AAVC-I對(duì)人舌鱗癌Tca8113細(xì)胞活力的抑制作用。結(jié)果顯示，在AAVC-I處理Tca8113細(xì)胞24h后，隨著濃度的增加，AAVC-I對(duì)細(xì)胞活力的抑制作用逐漸增強(qiáng)；另外，根據(jù)IC50值確定AAVC-I的合適實(shí)驗(yàn)濃度，繼續(xù)作用細(xì)胞24h....

圖1AAVC-I對(duì)Tca8113細(xì)胞活力的影響

實(shí)驗(yàn)濃度的AAVC-I作用Tca8113細(xì)胞24h，對(duì)細(xì)胞進(jìn)行HE染色可以明顯觀察到細(xì)胞的形態(tài)變化。正常對(duì)照組細(xì)胞的胞核經(jīng)蘇木素染成藍(lán)紫色，胞質(zhì)經(jīng)伊紅染成粉紅色，細(xì)胞飽滿呈良好的貼壁生長狀態(tài)，形態(tài)多為梭形或不規(guī)則多邊形；隨著AAVC-I實(shí)驗(yàn)濃度的增加，實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞逐漸皺縮變小，細(xì)....

圖2AAVC-I對(duì)Tca8113細(xì)胞形態(tài)的影響

圖1AAVC-I對(duì)Tca8113細(xì)胞活力的影響3AAVC-I對(duì)Tca8113細(xì)胞凋亡的影響

圖4AAVC-I對(duì)Tca8113細(xì)胞GRP78、p-PERK和p-eIF2α蛋白水平的影響

圖3AAVC-I對(duì)Tca8113細(xì)胞凋亡的影響圖5AAVC-I對(duì)Tca8113細(xì)胞ATF4和CHOP蛋白表達(dá)水平的影響

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