目的通過二維和三維條件下的細(xì)胞共培養(yǎng)模型觀察轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)對(duì)口腔癌相關(guān)成纖維細(xì)胞(carcinoma associated fibroblasts,CAFs)遷移的影響。方法二維培養(yǎng)條件下,以培養(yǎng)基中加入10 ng/mL TGF-β1刺激的CAFs為實(shí)驗(yàn)組,以未經(jīng)處理的CAFs細(xì)胞為對(duì)照組,通過劃痕實(shí)驗(yàn)、Transwell實(shí)驗(yàn)觀察CAFs的遷移現(xiàn)象;通過逆轉(zhuǎn)錄病毒轉(zhuǎn)染,培養(yǎng)綠色熒光蛋白(green fluorescent protein,GFP)陽(yáng)性的CAFs細(xì)胞,建立人舌鱗癌細(xì)胞SCC25、GFP(+) CAFs和CAFs三維細(xì)胞共培養(yǎng)模型,以培養(yǎng)基中加入10 ng/mL TGF-β1刺激下培養(yǎng)的三維模型為實(shí)驗(yàn)組,以未加的TGF-β1的三維模型為對(duì)照組,觀察在三維模型的細(xì)胞遷移現(xiàn)象。結(jié)果在二維培養(yǎng)條件下驗(yàn)證了10 ng/mL TGF-β1可促進(jìn)口腔CAFs的遷移;成功建立SCC25、GFP(+) CAFs和CAFs三維細(xì)胞共培養(yǎng)模型,觀察到CAFs和口腔癌細(xì)胞的遷移現(xiàn)象,但10 ng/mL的TGF-β1對(duì)...

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圖2CAFs免疫細(xì)胞化學(xué)陽(yáng)性結(jié)果×40

α-SMA和FAP常作為鑒定CAFs的標(biāo)志蛋白，染色陽(yáng)性表達(dá)（圖2），說明培養(yǎng)的細(xì)胞為CAFs[12]。2.2二維培養(yǎng)培養(yǎng)條件下口腔CAFs的遷移

圖3兩組間二維細(xì)胞培養(yǎng)遷移結(jié)果的比較

在實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞培養(yǎng)基中加入TGF-β1,HE染色后，進(jìn)行比較（圖5a），結(jié)果示實(shí)驗(yàn)組平均浸潤(rùn)深度/三維細(xì)胞培養(yǎng)組織全層深度的比值約0.436，對(duì)照組約0.433，兩組間腫瘤細(xì)胞平均浸潤(rùn)深度比差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=0.03,P=0.977，圖5b）；熒光成像比較GFP(+)CAFs在....

圖4三維細(xì)胞共培養(yǎng)模型的遷移結(jié)果觀察

圖3兩組間二維細(xì)胞培養(yǎng)遷移結(jié)果的比較3討論

圖5兩組間三維細(xì)胞培養(yǎng)遷移結(jié)果的比較

目前CAFs研究大多采用二維模型，即劃痕實(shí)驗(yàn)和Transwell小室實(shí)驗(yàn)[5-6,13]。二維培養(yǎng)條件較難模擬體內(nèi)環(huán)境，缺乏與腫瘤細(xì)胞、細(xì)胞間基質(zhì)的相互作用，與體內(nèi)CAFs真實(shí)生存環(huán)境有一定差異[14]。為了能更好地模擬體內(nèi)環(huán)境，研究者們模擬出三維共培養(yǎng)模型[15-16],Hor....

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