目的:研究永生化成牙本質細胞(immortalized odontoblasts,i ODs)的間充質干細胞表型和骨形態(tài)發(fā)生蛋白(bone morphogenetic protein, BMP)-2、-4、-6、-7和-9差異介導i ODs成骨分化的作用。方法:使用SV40 T抗原永生化成牙本質細胞(odontoblasts),建立i OD細胞株,并連續(xù)檢測BMP的內源性表達。使用Ad-Easy技術合成表達BMP和GFP的重組腺病毒,使用MTT試劑盒檢測i OD的增殖能力。通過免疫熒光檢測i OD的間充質干細胞表面標志物。在體外,使用半定量RT-PCR、堿性磷酸酶活性、茜素紅染色及油紅O染色檢測i OD的成骨和成脂分化能力。最后,使用micro-CT和組織學分析評估體內形成的異位礦化組織的體積和密度。采用SPSS 21.0軟件包中的單因素方差分析和Scheffe的多重比較檢驗對結果進行分析。結果:SV40 T抗原有效地永生化OD。i OD細胞株保持良好的增殖活性,表達間充質干細胞表面標志物并具有多向分化能力。相比BMP-4、-6和-7,BMP-2和BMP-9具有更強的介導i OD的成骨...

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【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 化學材料、細胞培養(yǎng)和ODs的永生化
    1.2 表達BMP和綠色熒光蛋白（GFP）的重組腺病毒的產生、擴增和轉染
    1.3 結晶紫染色和MTT增殖測定
    1.4 免疫熒光染色
    1.5 RNA分離和半定量RT-PCR檢測
    1.6 堿性磷酸酶（ALP）活性測定
    1.7 基質礦化測定（茜素紅S染色）
    1.8 油紅O染色
    1.9 BMPs轉染的iOD植入和異位礦化組織形成實驗
    1.1 0 微型計算機體層掃描（micro-CT）分析
    1.1 1 組織學評估以及阿爾辛藍和三色染色
    1.1 2 統(tǒng)計學分析
2 結果
    2.1 iOD的增長率高于OD
    2.2 i ODs表達MSC標志物
    2.3 iOD中BMP的內源表達
    2.4 在BMP刺激下，iOD可以分為成骨和成脂譜系
    2.5 BMPs差異誘導iODs異位礦化組織的形成
3 討論



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