目的:研究永生化成牙本質(zhì)細(xì)胞(immortalized odontoblasts,i ODs)的間充質(zhì)干細(xì)胞表型和骨形態(tài)發(fā)生蛋白(bone morphogenetic protein, BMP)-2、-4、-6、-7和-9差異介導(dǎo)i ODs成骨分化的作用。方法:使用SV40 T抗原永生化成牙本質(zhì)細(xì)胞(odontoblasts),建立i OD細(xì)胞株,并連續(xù)檢測(cè)BMP的內(nèi)源性表達(dá)。使用Ad-Easy技術(shù)合成表達(dá)BMP和GFP的重組腺病毒,使用MTT試劑盒檢測(cè)i OD的增殖能力。通過(guò)免疫熒光檢測(cè)i OD的間充質(zhì)干細(xì)胞表面標(biāo)志物。在體外,使用半定量RT-PCR、堿性磷酸酶活性、茜素紅染色及油紅O染色檢測(cè)i OD的成骨和成脂分化能力。最后,使用micro-CT和組織學(xué)分析評(píng)估體內(nèi)形成的異位礦化組織的體積和密度。采用SPSS 21.0軟件包中的單因素方差分析和Scheffe的多重比較檢驗(yàn)對(duì)結(jié)果進(jìn)行分析。結(jié)果:SV40 T抗原有效地永生化OD。i OD細(xì)胞株保持良好的增殖活性,表達(dá)間充質(zhì)干細(xì)胞表面標(biāo)志物并具有多向分化能力。相比BMP-4、-6和-7,BMP-2和BMP-9具有更強(qiáng)的介導(dǎo)i OD的成骨...

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【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 化學(xué)材料、細(xì)胞培養(yǎng)和ODs的永生化
    1.2 表達(dá)BMP和綠色熒光蛋白（GFP）的重組腺病毒的產(chǎn)生、擴(kuò)增和轉(zhuǎn)染
    1.3 結(jié)晶紫染色和MTT增殖測(cè)定
    1.4 免疫熒光染色
    1.5 RNA分離和半定量RT-PCR檢測(cè)
    1.6 堿性磷酸酶（ALP）活性測(cè)定
    1.7 基質(zhì)礦化測(cè)定（茜素紅S染色）
    1.8 油紅O染色
    1.9 BMPs轉(zhuǎn)染的iOD植入和異位礦化組織形成實(shí)驗(yàn)
    1.1 0 微型計(jì)算機(jī)體層掃描（micro-CT）分析
    1.1 1 組織學(xué)評(píng)估以及阿爾辛藍(lán)和三色染色
    1.1 2 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
2 結(jié)果
    2.1 iOD的增長(zhǎng)率高于OD
    2.2 i ODs表達(dá)MSC標(biāo)志物
    2.3 iOD中BMP的內(nèi)源表達(dá)
    2.4 在BMP刺激下，iOD可以分為成骨和成脂譜系
    2.5 BMPs差異誘導(dǎo)iODs異位礦化組織的形成
3 討論



本文編號(hào)：3855946