第一部分:血清剝奪對于山羊顳下頜關(guān)節(jié)盤細胞凋亡和自噬的影響目的:模擬生理顳下頜關(guān)節(jié)盤(temporomandibular joint disc,TMJ disc)的低血供狀態(tài),通過檢測血清剝奪后山羊顳下頜關(guān)節(jié)盤細胞自噬和凋亡的變化,探索顳下頜關(guān)節(jié)盤細胞自噬和凋亡的關(guān)系。方法:無菌分離培養(yǎng)3-6月齡山羊顳下頜關(guān)節(jié)盤細胞,取P2代細胞進行實驗。倒置顯微鏡下觀察血清剝奪前后細胞的形態(tài)學(xué)變化,蘇木精-伊紅(Hematoxylin-Eosin,HE)染色觀察細胞的形態(tài)學(xué)改變,通過熒光染色Hoechst33258觀察細胞凋亡的發(fā)生以及丹磺酰戊二胺(monodansylcadaverine,MDC)熒光染色檢測細胞的溶酶體活性。MTT檢測細胞的吸光度值并繪制生長曲線。流式細胞術(shù)檢測細胞的自噬率和凋亡率,實時熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)(real time PCR,RT-PCR)檢測自噬相關(guān)基因Beclin1和LC3II的變化,最后加入自噬抑制劑3-甲基腺嘌呤(3-methyladenine,3-MA),通過觀察細胞的凋亡變化探索細胞自噬和凋亡之間的關(guān)系。結(jié)果:血清剝奪后山羊TMJ關(guān)節(jié)盤細胞皺縮,由長梭形變?yōu)?..

【文章頁數(shù)】：50 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
Abstract
縮略詞表
第一章 緒論
    1.1 顳下頜關(guān)節(jié)概述
        1.1.1 顳下頜關(guān)節(jié)
        1.1.2 顳下頜關(guān)節(jié)盤
        1.1.3 顳下頜關(guān)節(jié)紊亂病
    1.2 顳下頜關(guān)節(jié)盤細胞的死亡方式
        1.2.1 凋亡
        1.2.2 自噬
        1.2.3 壞死
    1.3 低氧概述
    1.4 選題依據(jù)及研究思路
第二章 無血清培養(yǎng)對山羊顳下頜關(guān)節(jié)盤細胞凋亡和自噬的影響.
    2.1 概述
    2.2 實驗材料
        2.2.1 實驗動物
        2.2.2 主要試劑
        2.2.3 主要儀器
        2.2.4 主要試劑配制
    2.3 實驗方法
        2.3.1 山羊顳下頜關(guān)節(jié)盤細胞的分離與培養(yǎng)的操作方法
        2.3.2 山羊顳下頜關(guān)節(jié)盤細胞傳代
        2.3.3 MTT測山羊顳下頜關(guān)節(jié)盤細胞的生長曲線
        2.3.4 HE染色步驟
        2.3.5 Hoechst33258染色
        2.3.6 Dansylcadaverine染色
        2.3.7 流式細胞儀檢測山羊顳下頜關(guān)節(jié)盤細胞的凋亡率
        2.3.8 流式細胞儀檢測山羊顳下頜關(guān)節(jié)盤細胞的自噬率
        2.3.9 PCR檢測自噬相關(guān)基因的表達
        2.3.10 統(tǒng)計學(xué)分析
    2.4 實驗結(jié)果
        2.4.1 鏡下觀察山羊顳下頜關(guān)節(jié)盤細胞的形態(tài)學(xué)變化
        2.4.2 山羊顳下頜關(guān)節(jié)盤細胞生長曲線繪制
        2.4.3 流式細胞儀檢測山羊顳下頜關(guān)節(jié)盤細胞的自噬率
        2.4.4 PCR檢測山羊顳下頜關(guān)節(jié)盤細胞自噬相關(guān)基因的表達
        2.4.5 流式細胞儀檢測山羊顳下頜關(guān)節(jié)盤細胞的凋亡率
    2.5 討論
    2.6 結(jié)論
第三章 低氧對山羊顳下頜關(guān)節(jié)盤細胞凋亡和自噬的影響
    3.1 概述
    3.2 實驗材料
        3.2.1 實驗動物
        3.2.2 主要試劑
        3.2.3 主要儀器
    3.3 實驗方法
        3.3.1 山羊顳下頜關(guān)節(jié)盤細胞的分離、培養(yǎng)
        3.3.2 實驗分組
        3.3.3 流式細胞儀檢測山羊顳下頜關(guān)節(jié)盤細胞的凋亡率
        3.3.4 流式細胞儀檢測山羊顳下頜關(guān)節(jié)盤細胞的自噬率
        3.3.5 PCR檢測自噬相關(guān)基因的表達
        3.3.6 統(tǒng)計學(xué)分析
    3.4 實驗結(jié)果
        3.4.1 流式細胞儀檢測山羊顳下頜關(guān)節(jié)盤細胞的自噬率
        3.4.2 PCR檢測山羊顳下頜關(guān)節(jié)盤細胞自噬相關(guān)基因的表達
        3.4.3 流式細胞儀檢測山羊顳下頜關(guān)節(jié)盤細胞的凋亡率
    3.5 討論
    3.6 結(jié)論
第四章 全文總結(jié)
參考文獻
在學(xué)期間的研究成果
致謝
臨床病例



本文編號：3852777