目的:成釉細胞瘤(ameloblastoma,AB)是口腔頜面部最常見的牙源性腫瘤,約占60%以上。AB雖屬良性腫瘤,但具有交界性腫瘤的性質。AB多發(fā)于青壯年,以下頜體及下頜角部常見。初期患者多無自覺癥狀,隨著病情進展,頜骨逐漸膨大,造成畸形,腫瘤最終可穿透骨質,周圍軟組織遭受侵犯。AB最重要的生物學特性是具有局部侵襲性。目前,針對AB僅限于外科手術治療,但術后容易導致復發(fā),復發(fā)多次還可能發(fā)生惡變甚至遠處轉移,患者的生存質量受到嚴重的影響。因此,準確揭示AB的發(fā)病機制,將會為AB的預防以及探尋新的治療途徑提供理論指導。微小RNA(microRNA,miRNA)是廣泛存在于真核生物中的一組長度大概為22個核苷酸的非編碼單鏈RNA家族,其通常在轉錄后水平調控基因的翻譯表達。有報道表明miRNA廣泛存在于各種真核細胞中,參與機體的生長發(fā)育、細胞凋亡、脂肪代謝等過程。同時,miRNA在腫瘤的發(fā)生發(fā)展中也發(fā)揮著至關重要的作用。miR-300是一類新發(fā)現的miRNA,目前對其研究較少,之前的文獻對于miR-300的報道更多集中在血液病中。本實驗將對miR-300的研究轉移到腫瘤的發(fā)病機制中,探討其...

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【學位級別】：博士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
英文縮略語
第一部分:miRNA-300、Periostin在臨床成釉細胞瘤組織中的研究
    1 前言
    2 材料和方法
        2.1 實驗材料
            2.1.1 組織標本
            2.1.2 芯片
            2.1.3 主要試劑
            2.1.4 實驗設備
        2.2 實驗方法
            2.2.1 miRNA芯片分析
            2.2.2 莖環(huán)實時定量PCR方法
            2.2.3 實時熒光定量PCR(qRT-PCR)方法
            2.2.4 Western Blot方法
            2.2.5 免疫組織化學染色SP法
        2.3 統(tǒng)計分析
    3 結果
        3.1 miRNA芯片結果分析
        3.2 qRT-PCR檢測miR-300、Periostin的表達
        3.3 Western blot檢測Periostin的表達
        3.4 免疫組化檢測Periostin的表達
    4 討論
第二部分:miR-300、Periostin對成釉細胞瘤細胞生物學特性的影響
    1 前言
    2 材料和方法
        2.1 實驗材料
            2.1.1 所用細胞系
            2.1.2 主要試劑
            2.1.3 實驗設備
        2.2 實驗方法
            2.2.1 細胞培養(yǎng)、傳代、凍存、復蘇
            2.2.2 miR-300 mimics、miR-300 inhibitor的設計和合成
            2.2.3 Periostin si RNA的設計和合成
            2.2.4 脂質體轉染法轉染
            2.2.5 MTS法
            2.2.6 平板克隆形成實驗
            2.2.7 流式細胞儀檢測細胞凋亡
            2.2.8 流式細胞儀檢測細胞周期
            2.2.9 Transwell侵襲實驗
            2.2.10 雙熒光素酶活性檢測
        2.3 統(tǒng)計分析
    3 結果
        3.1 miR-300對AM-1細胞功能的影響
            3.1.1 miR-300 mimics、inhibitor轉染效率的檢測
            3.1.2 miR-300對AM-1細胞增殖的影響
            3.1.3 miR-300對AM-1細胞凋亡的影響
            3.1.4 miR-300對AM-1細胞周期的影響
            3.1.5 miR-300對AM-1細胞侵襲的影響
        3.2 miR-300靶向調控Periostin的研究
            3.2.1 miR-300與Periostin靶向關系生物學信息預測
            3.2.2 過表達miR-300對AM-1細胞表達Periostin的影響
            3.2.3 抑制miR-300對AM-1細胞表達Periostin的影響
            3.2.4 雙熒光素酶活性檢測實驗驗證miR-300與Periostin 3'UTR結合情況
        3.3 Periostin對AM-1細胞功能的影響
            3.3.1 Periostin轉染效率的檢測
            3.3.2 si-Periostin對AM-1細胞增殖的影響
            3.3.3 si-Periostin對AM-1細胞凋亡的影響
            3.3.4 si-Periostin對AM-1細胞周期的影響
            3.3.5 si-Periostin對AM-1細胞侵襲的影響
    4 討論
第三部分:miR-300調控Periostin參與成釉細胞瘤骨質破壞的機制研究
    1 前言
    2 材料和方法
        2.1 實驗材料
            2.1.1 所用細胞系
            2.1.2 主要試劑
            2.1.3 實驗設備
        2.2 實驗方法
            2.2.1 細胞培養(yǎng)
            2.2.2 細胞轉染
            2.2.3 實時定量PCR
            2.2.4 Western-blot
        2.3 統(tǒng)計分析
    3 結果
        3.1 miR-300 在各組細胞中的表達
        3.2 OPG、Rankl、C-fos在各組細胞中的表達
    4 討論
結論
本研究創(chuàng)新性的自我評價
參考文獻
綜述
    參考文獻
攻讀學位期間取得的研究成果
致謝
個人簡歷



本文編號：3803232