目的:成釉細(xì)胞瘤(ameloblastoma,AB)是口腔頜面部最常見的牙源性腫瘤,約占60%以上。AB雖屬良性腫瘤,但具有交界性腫瘤的性質(zhì)。AB多發(fā)于青壯年,以下頜體及下頜角部常見。初期患者多無(wú)自覺癥狀,隨著病情進(jìn)展,頜骨逐漸膨大,造成畸形,腫瘤最終可穿透骨質(zhì),周圍軟組織遭受侵犯。AB最重要的生物學(xué)特性是具有局部侵襲性。目前,針對(duì)AB僅限于外科手術(shù)治療,但術(shù)后容易導(dǎo)致復(fù)發(fā),復(fù)發(fā)多次還可能發(fā)生惡變甚至遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移,患者的生存質(zhì)量受到嚴(yán)重的影響。因此,準(zhǔn)確揭示AB的發(fā)病機(jī)制,將會(huì)為AB的預(yù)防以及探尋新的治療途徑提供理論指導(dǎo)。微小RNA(microRNA,miRNA)是廣泛存在于真核生物中的一組長(zhǎng)度大概為22個(gè)核苷酸的非編碼單鏈RNA家族,其通常在轉(zhuǎn)錄后水平調(diào)控基因的翻譯表達(dá)。有報(bào)道表明miRNA廣泛存在于各種真核細(xì)胞中,參與機(jī)體的生長(zhǎng)發(fā)育、細(xì)胞凋亡、脂肪代謝等過(guò)程。同時(shí),miRNA在腫瘤的發(fā)生發(fā)展中也發(fā)揮著至關(guān)重要的作用。miR-300是一類新發(fā)現(xiàn)的miRNA,目前對(duì)其研究較少,之前的文獻(xiàn)對(duì)于miR-300的報(bào)道更多集中在血液病中。本實(shí)驗(yàn)將對(duì)miR-300的研究轉(zhuǎn)移到腫瘤的發(fā)病機(jī)制中,探討其...

【文章頁(yè)數(shù)】：84 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
英文縮略語(yǔ)
第一部分:miRNA-300、Periostin在臨床成釉細(xì)胞瘤組織中的研究
    1 前言
    2 材料和方法
        2.1 實(shí)驗(yàn)材料
            2.1.1 組織標(biāo)本
            2.1.2 芯片
            2.1.3 主要試劑
            2.1.4 實(shí)驗(yàn)設(shè)備
        2.2 實(shí)驗(yàn)方法
            2.2.1 miRNA芯片分析
            2.2.2 莖環(huán)實(shí)時(shí)定量PCR方法
            2.2.3 實(shí)時(shí)熒光定量PCR(qRT-PCR)方法
            2.2.4 Western Blot方法
            2.2.5 免疫組織化學(xué)染色SP法
        2.3 統(tǒng)計(jì)分析
    3 結(jié)果
        3.1 miRNA芯片結(jié)果分析
        3.2 qRT-PCR檢測(cè)miR-300、Periostin的表達(dá)
        3.3 Western blot檢測(cè)Periostin的表達(dá)
        3.4 免疫組化檢測(cè)Periostin的表達(dá)
    4 討論
第二部分:miR-300、Periostin對(duì)成釉細(xì)胞瘤細(xì)胞生物學(xué)特性的影響
    1 前言
    2 材料和方法
        2.1 實(shí)驗(yàn)材料
            2.1.1 所用細(xì)胞系
            2.1.2 主要試劑
            2.1.3 實(shí)驗(yàn)設(shè)備
        2.2 實(shí)驗(yàn)方法
            2.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)、傳代、凍存、復(fù)蘇
            2.2.2 miR-300 mimics、miR-300 inhibitor的設(shè)計(jì)和合成
            2.2.3 Periostin si RNA的設(shè)計(jì)和合成
            2.2.4 脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法轉(zhuǎn)染
            2.2.5 MTS法
            2.2.6 平板克隆形成實(shí)驗(yàn)
            2.2.7 流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞凋亡
            2.2.8 流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞周期
            2.2.9 Transwell侵襲實(shí)驗(yàn)
            2.2.10 雙熒光素酶活性檢測(cè)
        2.3 統(tǒng)計(jì)分析
    3 結(jié)果
        3.1 miR-300對(duì)AM-1細(xì)胞功能的影響
            3.1.1 miR-300 mimics、inhibitor轉(zhuǎn)染效率的檢測(cè)
            3.1.2 miR-300對(duì)AM-1細(xì)胞增殖的影響
            3.1.3 miR-300對(duì)AM-1細(xì)胞凋亡的影響
            3.1.4 miR-300對(duì)AM-1細(xì)胞周期的影響
            3.1.5 miR-300對(duì)AM-1細(xì)胞侵襲的影響
        3.2 miR-300靶向調(diào)控Periostin的研究
            3.2.1 miR-300與Periostin靶向關(guān)系生物學(xué)信息預(yù)測(cè)
            3.2.2 過(guò)表達(dá)miR-300對(duì)AM-1細(xì)胞表達(dá)Periostin的影響
            3.2.3 抑制miR-300對(duì)AM-1細(xì)胞表達(dá)Periostin的影響
            3.2.4 雙熒光素酶活性檢測(cè)實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證miR-300與Periostin 3'UTR結(jié)合情況
        3.3 Periostin對(duì)AM-1細(xì)胞功能的影響
            3.3.1 Periostin轉(zhuǎn)染效率的檢測(cè)
            3.3.2 si-Periostin對(duì)AM-1細(xì)胞增殖的影響
            3.3.3 si-Periostin對(duì)AM-1細(xì)胞凋亡的影響
            3.3.4 si-Periostin對(duì)AM-1細(xì)胞周期的影響
            3.3.5 si-Periostin對(duì)AM-1細(xì)胞侵襲的影響
    4 討論
第三部分:miR-300調(diào)控Periostin參與成釉細(xì)胞瘤骨質(zhì)破壞的機(jī)制研究
    1 前言
    2 材料和方法
        2.1 實(shí)驗(yàn)材料
            2.1.1 所用細(xì)胞系
            2.1.2 主要試劑
            2.1.3 實(shí)驗(yàn)設(shè)備
        2.2 實(shí)驗(yàn)方法
            2.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)
            2.2.2 細(xì)胞轉(zhuǎn)染
            2.2.3 實(shí)時(shí)定量PCR
            2.2.4 Western-blot
        2.3 統(tǒng)計(jì)分析
    3 結(jié)果
        3.1 miR-300 在各組細(xì)胞中的表達(dá)
        3.2 OPG、Rankl、C-fos在各組細(xì)胞中的表達(dá)
    4 討論
結(jié)論
本研究創(chuàng)新性的自我評(píng)價(jià)
參考文獻(xiàn)
綜述
    參考文獻(xiàn)
攻讀學(xué)位期間取得的研究成果
致謝
個(gè)人簡(jiǎn)歷



本文編號(hào)：3803232