目的:①探索簡便、高效的方法獲得富血小板血漿(platelet-ich plasma,PRP)并觀察人脂肪干細胞成骨礦化細胞分化過程中PRP的作用,及其與支架材料納米羥基磷灰石/膠原生物相容性的實驗研究。②觀察釉基質(zhì)蛋白(eamel matrix proteins, EMPs)對Beagle犬脂肪干細胞增殖的影響,探索EMPs促進脂肪干細胞增殖作用的最佳濃度。 方法:①抽取三名健康成人靜脈血各40ml,分別用二次離心法和三次離心法制備PRP,進行血小板計數(shù)分析,并進行相關系數(shù)分析。酶消化法獲得人脂肪干細胞,取生長狀態(tài)良好的第3代人脂肪干細胞分別培養(yǎng)在含100ml/L FBS的DMEM培養(yǎng)液、成骨細胞誘導液和添加PRP的成骨細胞誘導液中,通過Von Kossa染色觀察60ul/mLPRP對人脂肪干細胞向成骨細胞分化的影響;并將人脂肪干細胞與納米羥基磷灰石/膠原復合培養(yǎng)7天后,環(huán)境掃描電鏡觀察人脂肪干細胞在支架材料上附著增殖情況。 ②提取豬EMPs并SDS-PAGE結(jié)果鑒定,分別用含400 mg/L、200 mg/L、100 mg/L、50 mg/L EMPs作用于體外培養(yǎng)Beagle犬脂...

【文章頁數(shù)】：72 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
ABSTRACT
研究一 人脂肪干細胞成骨分化過程中 PRP 的作用及其與納米羥基磷灰石/膠原生物相容性的研究
    1 前言
    2 材料和方法
        2.1 實驗材料
            2.1.1 標本采集
        2.2 主要儀器和設備
        2.3 試劑來源及主要液體配制
            2.3.1 胎牛血清（FBS）
            2.3.2 細胞消化液
            2.3.3 細胞凍存液
            2.3.4 0.01M pH 7.4 磷酸鹽(PBS)緩沖液
            2.3.5 DMEM 培養(yǎng)液
            2.3.6 PBS
            2.3.7 青霉素
            2.3.8 鏈霉素
            2.3.9 紅細胞裂解液
            2.3.10 I 型膠原酶
            2.3.11 中性蛋白酶
            2.3.12 牛凝血酶的配制
            2.3.13 4%多聚甲醛
            2.3.14 枸櫞酸鈉抗凝劑
            2.3.15 瑞氏染液的配制
        2.4 細胞培養(yǎng)
            2.4.1 培養(yǎng)器皿的準備
            2.4.2 細胞復蘇
            2.4.3 細胞培養(yǎng)和傳代
            2.4.4 細胞凍存
    3 實驗方法
        3.1 PRP 的制備及比較
            3.1.1 傳統(tǒng)二次離心法制備PRP（Landesber 法）
            3.1.2 改良三次離心法制備PRP
            3.1.3 統(tǒng)計學分析
        3.2 人 ADSCs 分離培養(yǎng)及鑒定
            3.2.1 人ADSCs 分離培養(yǎng)
            3.2.2 人 ADSCs 的鑒定
            3.2.3 人ADSCs 生長曲線測定
        3.3 PRP 對人 ADSCs 成骨礦化的影響
            3.3.1 PRP 對人 ADSCs 成骨礦化的影響
            3.3.2 Von Kossa 鈣結(jié)節(jié)染色
        3.4 人 ADSCs 與納米羥基磷灰石/膠原共培養(yǎng)
    4 結(jié)果
        4.1 全血與傳統(tǒng)二次離心法、改良三次離心法制備的PRP 中的血小板數(shù)量
        4.2 傳統(tǒng)二次離心法、改良三次離心法制備的 PRP 相關系數(shù)的比較
        4.3 PRP 的制備及瑞氏染色
        4.4 人脂肪干細胞分離培養(yǎng)
        4.5 人 ADSCs 免疫組化鑒定
        4.6 人 ADSCs 生長曲線測定
        4.7 PRP 對人脂肪干細胞向成骨細胞分化的影響
        4.8 人脂肪干細胞與納米羥基磷灰石/膠原共培養(yǎng)
    5 討論
        5.1 脂肪干細胞作為種子細胞的應用前景
        5.2 PRP 的概念及應用前景
        5.3 PRP 制作方法比較
        5.4 脂肪干細胞成骨分化過程中富血小板血漿（PRP）的作用
        5.5 脂肪干細胞增殖過程中富血小板血漿對其的影響
        5.6 人脂肪干細胞與納米羥基磷灰石/膠原支架生物相容性
    6 結(jié)論與展望
        6.1 結(jié)論
        6.2 展望
    參考文獻
研究二 釉基質(zhì)蛋白的提取及對脂肪干細胞增殖的影響
    1 前言
    2 材料和方法
        2.1 實驗材料
            2.1.1 標本采集
            2.1.2 主要試劑和儀器同第一部分
    3 實驗方法
        3.1 EMPs 的提取
        3.2 蛋白質(zhì)聚丙酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)
        3.3 EMPs 對 Beagle 犬 ADSCs 增殖影響的測定
        3.4 統(tǒng)計學分析
    4 結(jié)果
        4.1 SDS-PAGE 結(jié)果
        4.2 EMPs 對 Beagle 犬 ADSCs 增殖的影響
    5 討論
        5.1 EMPs
        5.2 EMPs 促進細胞增殖的作用
    6 結(jié)論與展望
        6.1 結(jié)論
        6.2 展望
    參考文獻
附錄
致謝
綜述
    參考文獻



本文編號：3783126