目的:①探索簡便、高效的方法獲得富血小板血漿(platelet-ich plasma,PRP)并觀察人脂肪干細(xì)胞成骨礦化細(xì)胞分化過程中PRP的作用,及其與支架材料納米羥基磷灰石/膠原生物相容性的實(shí)驗(yàn)研究。②觀察釉基質(zhì)蛋白(eamel matrix proteins, EMPs)對(duì)Beagle犬脂肪干細(xì)胞增殖的影響,探索EMPs促進(jìn)脂肪干細(xì)胞增殖作用的最佳濃度。 方法:①抽取三名健康成人靜脈血各40ml,分別用二次離心法和三次離心法制備PRP,進(jìn)行血小板計(jì)數(shù)分析,并進(jìn)行相關(guān)系數(shù)分析。酶消化法獲得人脂肪干細(xì)胞,取生長狀態(tài)良好的第3代人脂肪干細(xì)胞分別培養(yǎng)在含100ml/L FBS的DMEM培養(yǎng)液、成骨細(xì)胞誘導(dǎo)液和添加PRP的成骨細(xì)胞誘導(dǎo)液中,通過Von Kossa染色觀察60ul/mLPRP對(duì)人脂肪干細(xì)胞向成骨細(xì)胞分化的影響;并將人脂肪干細(xì)胞與納米羥基磷灰石/膠原復(fù)合培養(yǎng)7天后,環(huán)境掃描電鏡觀察人脂肪干細(xì)胞在支架材料上附著增殖情況。 ②提取豬EMPs并SDS-PAGE結(jié)果鑒定,分別用含400 mg/L、200 mg/L、100 mg/L、50 mg/L EMPs作用于體外培養(yǎng)Beagle犬脂...

【文章頁數(shù)】：72 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
ABSTRACT
研究一 人脂肪干細(xì)胞成骨分化過程中 PRP 的作用及其與納米羥基磷灰石/膠原生物相容性的研究
    1 前言
    2 材料和方法
        2.1 實(shí)驗(yàn)材料
            2.1.1 標(biāo)本采集
        2.2 主要儀器和設(shè)備
        2.3 試劑來源及主要液體配制
            2.3.1 胎牛血清（FBS）
            2.3.2 細(xì)胞消化液
            2.3.3 細(xì)胞凍存液
            2.3.4 0.01M pH 7.4 磷酸鹽(PBS)緩沖液
            2.3.5 DMEM 培養(yǎng)液
            2.3.6 PBS
            2.3.7 青霉素
            2.3.8 鏈霉素
            2.3.9 紅細(xì)胞裂解液
            2.3.10 I 型膠原酶
            2.3.11 中性蛋白酶
            2.3.12 牛凝血酶的配制
            2.3.13 4%多聚甲醛
            2.3.14 枸櫞酸鈉抗凝劑
            2.3.15 瑞氏染液的配制
        2.4 細(xì)胞培養(yǎng)
            2.4.1 培養(yǎng)器皿的準(zhǔn)備
            2.4.2 細(xì)胞復(fù)蘇
            2.4.3 細(xì)胞培養(yǎng)和傳代
            2.4.4 細(xì)胞凍存
    3 實(shí)驗(yàn)方法
        3.1 PRP 的制備及比較
            3.1.1 傳統(tǒng)二次離心法制備PRP（Landesber 法）
            3.1.2 改良三次離心法制備PRP
            3.1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
        3.2 人 ADSCs 分離培養(yǎng)及鑒定
            3.2.1 人ADSCs 分離培養(yǎng)
            3.2.2 人 ADSCs 的鑒定
            3.2.3 人ADSCs 生長曲線測定
        3.3 PRP 對(duì)人 ADSCs 成骨礦化的影響
            3.3.1 PRP 對(duì)人 ADSCs 成骨礦化的影響
            3.3.2 Von Kossa 鈣結(jié)節(jié)染色
        3.4 人 ADSCs 與納米羥基磷灰石/膠原共培養(yǎng)
    4 結(jié)果
        4.1 全血與傳統(tǒng)二次離心法、改良三次離心法制備的PRP 中的血小板數(shù)量
        4.2 傳統(tǒng)二次離心法、改良三次離心法制備的 PRP 相關(guān)系數(shù)的比較
        4.3 PRP 的制備及瑞氏染色
        4.4 人脂肪干細(xì)胞分離培養(yǎng)
        4.5 人 ADSCs 免疫組化鑒定
        4.6 人 ADSCs 生長曲線測定
        4.7 PRP 對(duì)人脂肪干細(xì)胞向成骨細(xì)胞分化的影響
        4.8 人脂肪干細(xì)胞與納米羥基磷灰石/膠原共培養(yǎng)
    5 討論
        5.1 脂肪干細(xì)胞作為種子細(xì)胞的應(yīng)用前景
        5.2 PRP 的概念及應(yīng)用前景
        5.3 PRP 制作方法比較
        5.4 脂肪干細(xì)胞成骨分化過程中富血小板血漿（PRP）的作用
        5.5 脂肪干細(xì)胞增殖過程中富血小板血漿對(duì)其的影響
        5.6 人脂肪干細(xì)胞與納米羥基磷灰石/膠原支架生物相容性
    6 結(jié)論與展望
        6.1 結(jié)論
        6.2 展望
    參考文獻(xiàn)
研究二 釉基質(zhì)蛋白的提取及對(duì)脂肪干細(xì)胞增殖的影響
    1 前言
    2 材料和方法
        2.1 實(shí)驗(yàn)材料
            2.1.1 標(biāo)本采集
            2.1.2 主要試劑和儀器同第一部分
    3 實(shí)驗(yàn)方法
        3.1 EMPs 的提取
        3.2 蛋白質(zhì)聚丙酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)
        3.3 EMPs 對(duì) Beagle 犬 ADSCs 增殖影響的測定
        3.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
    4 結(jié)果
        4.1 SDS-PAGE 結(jié)果
        4.2 EMPs 對(duì) Beagle 犬 ADSCs 增殖的影響
    5 討論
        5.1 EMPs
        5.2 EMPs 促進(jìn)細(xì)胞增殖的作用
    6 結(jié)論與展望
        6.1 結(jié)論
        6.2 展望
    參考文獻(xiàn)
附錄
致謝
綜述
    參考文獻(xiàn)



本文編號(hào)：3783126