目的:牙周炎是牙周支持組織的慢性感染性疾病,是危害人類口腔健康的主要疾病之一。重度牙周炎患者的深牙周袋面積可達72crrm2,是大量細菌及炎性因子的儲庫,可引起鄰近及遠隔組織器官的疾病。大量研究發(fā)現(xiàn)牙周炎與多種全身系統(tǒng)性疾病存在相關(guān)性,如心血管疾病、糖尿病、慢性阻塞性肺疾病、低出生體重兒等。近20年,一些學者開始關(guān)注牙周炎及其致病菌與惡性腫瘤的關(guān)系研究。目前已有多項研究報告了牙周炎及其致病菌與惡性腫瘤,尤其是口腔癌之間可能存在相關(guān)關(guān)系。Virchow認為腫瘤起源于慢性炎癥位點,慢性炎癥環(huán)境富含炎癥細胞、生長因子、活化的基質(zhì)和DNA損傷促進劑等,在這種環(huán)境下持續(xù)的細胞增殖可能加強和提升腫瘤發(fā)生的風險。P.gingivalis是一種革蘭陰性厭氧桿菌,多在慢性牙周炎患者中檢出,是毒力最強的牙周致病菌之一。P.gingivalis具有許多毒力因子,使細菌能夠黏附于口腔表面,并侵入到宿主的牙周組織內(nèi),調(diào)控宿主細胞的免疫炎癥反應。研究表明細胞內(nèi)的P.gingivalis可以在不同水平對與細胞周期相關(guān)的某些分子發(fā)揮影響,如cyclin D1、cyclinE、CDK4/6等�？梢钥s短細胞周期,促進細胞... 

【文章頁數(shù)】：104 頁

【學位級別】：博士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
英文縮略語
第一部分: P.gingivalis在口腔鱗癌組織中的檢測
    1 前言
    2 材料與方法
        2.1 實驗材料
            2.1.1 主要試劑、儀器
            2.1.2 臨床樣本收集
            2.1.3 實驗菌株
        2.2 實驗方法
            2.2.1 臨床樣本HE染色
            2.2.2 臨床樣本中P.gingivalis熒光原位雜交檢測
            2.2.3 臨床樣本中P.gingivalis的DNA含量檢測
        2.3 統(tǒng)計學處理
    3 結(jié)果
        3.1 口腔鱗癌臨床特征
        3.2 口腔鱗癌患者牙周臨床指數(shù)與患者臨床病理參數(shù)的相關(guān)性研究
        3.3 熒光原位雜交法檢測P.gingivalis在臨床樣本中的陽性率
        3.4 臨床樣本中P.gingivalis的DNA含量測定和分析
        3.5 鱗癌組織中P.gingivalis陽性率與口腔鱗癌患者臨床病理參數(shù)的關(guān)系
    4 討論
    5 結(jié)論
第二部分: P.gingivalis促進口腔鱗癌細胞增殖及對腫瘤增殖相關(guān)因子的影響
    1 前言
    2 材料與方法
        2.1 實驗材料
            2.1.1 主要試劑、儀器
            2.1.2 主要實驗菌株和細胞株
            2.1.3 臨床樣本收集
        2.2 實驗方法
            2.2.1 菌株的培養(yǎng)和計數(shù)
            2.2.2 細胞培養(yǎng)
            2.2.3 建立P.gingivalis感染Tca8113細胞的模型
            2.2.4 P.gingivalis感染Tca8113細胞的透射電鏡觀察
            2.2.5 CCK-8法檢測P.gingivalis感染Tca8113細胞的增殖活性
            2.2.6 流式細胞儀檢測P.gingivalis感染Tca8113細胞后細胞周期分布
            2.2.7 qRT-PCR檢測cyclin D1、AP-1 (c-Jun、c-Fos) mRNA
            2.2.8 Western blot分析cyclin D1、AP-1 (c-Jun、c-Fos)及其磷酸化蛋白表達水平
            2.2.9 cyclinD1與AP-1染色質(zhì)免疫沉淀(CHIP)
            2.2.10 臨床樣本cyclin D1、AP-1 (c-Jun、c-Fos)免疫組化染色
        2.3 統(tǒng)計學處理
    3 結(jié)果
        3.1 P.gingivalis感染口腔鱗癌細胞Tca8113電鏡結(jié)果
        3.2 P.gingivalis感染口腔鱗癌細胞Tca8113后細胞增殖的變化
        3.3 流式細胞儀檢測P.gingivalis感染Tca8113細胞細胞周期的分布
        3.4 P.gingivalis感染Tca8113細胞cyclin D1、AP-1 (c-Jun、c-Fos) mRNA的表達
        3.5 P.gingivalis感染Tca8113細胞cyclin D1、AP-1 (c-Jun、c-Fos)及其磷酸化蛋白的表達
        3.6 P.gingivalis感染促進Tca8113細胞cyclin D1與AP-1的結(jié)合活性
        3.7 臨床樣本AP-1 (c-Jun、c-Fos)、cyclin D1免疫組化結(jié)果分析
        3.8 口腔鱗癌組織中P.gingivalis與c-Jun、c-Fos及cyclin D1的相關(guān)性分析
    4 討論
    5 結(jié)論
第三部分: P.gingivalis通過miR-21/PDCD4/AP-1負反饋環(huán)路提高cyclin D1表達促進口腔鱗癌細胞增殖
    1 前言
    2 材料與方法
        2.1 實驗材料
            2.1.1 主要試劑和儀器
            2.1.2 實驗菌株和細胞株
            2.1.3 臨床樣本收集
        2.2 實驗方法
            2.2.1 P.gingivalis感染Tca8113細胞后miRNA的芯片篩查
            2.2.2 miRNA實時定量PCR (qRT-PCR)
            2.2.3 miR-21inhibitor轉(zhuǎn)染
            2.2.4 miR-21下游相關(guān)基因質(zhì)粒轉(zhuǎn)染
            2.2.5 CCK-8檢測miR-21/PDCD4/AP-1相關(guān)基因轉(zhuǎn)染對P.gingivalis感染Tca8113細胞增殖的影響
            2.2.6 qRT-PCR檢測轉(zhuǎn)染后miR-21/PDCD4/AP-1相關(guān)基因mRNA表達
            2.2.7 Western blot分析轉(zhuǎn)染后miR-21/PDCD4/AP-1相關(guān)基因蛋白表達
        2.3 統(tǒng)計方法
    3 結(jié)果
        3.1 miRNA芯片結(jié)果
            3.1.1 P.gingivalis感染Tca8113細胞差異miRNA表達譜的篩選
            3.1.2 P.gingivalis感染Tca8113細胞差異miRNA功能注釋及pathway分析
        3.2 miRNA芯片結(jié)果驗證
        3.3 臨床樣本中差異miRNA的檢測和分析
        3.4 P.gingivalis感染細胞后miR-21和其靶基因mRNA及蛋白的表達
        3.5 抑制miR-21對P.gingivalis感染所致細胞增殖及靶基因表達的改變
        3.6 過表達PDCD4對細胞增殖及AP-1(c-Jun、c-Fos)激活的影響
        3.7 沉默c-Jun降低AP-1活性對P.gingivalis感染所致miR-21及其靶基因和細胞增殖的影響
    4 討論
    5 結(jié)論
本研究創(chuàng)新性自我評價
參考文獻
綜述
    參考文獻
在學期間科研成績
致謝
個人簡歷


【參考文獻】：
期刊論文
[1]Presence of Porphyromonas gingivalis in gingival squamous cell carcinoma[J]. Joseph Katz,Mairelys D. Onate,Kaleb M. Pauley,Indraneel Bhattacharyya,Seunghee Cha.  International Journal of Oral Science. 2011(04)
[2]Oral cancer incidence and mortality in China, 2011[J]. Shao-Kai Zhang,Rongshou Zheng,Qiong Chen,Siwei Zhang,Xibin Sun,Wanqing Chen.  Chinese Journal of Cancer Research. 2015(01)



本文編號：3699443