本文關(guān)鍵詞：宏基因組法檢測侵襲性牙周炎治療前后菌斑微生物多樣性，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的：口腔是人體與外界相通的環(huán)境,是微生物進(jìn)入人體消化道、呼吸道的門戶,口腔中定植著復(fù)雜的微生物群落,是人體各種微生物群落最復(fù)雜的環(huán)境之一。通常在健康人的口腔中有700多種細(xì)菌、真菌及病毒等微生物,它們與宿主的齲病及牙周病等口腔疾病密切相關(guān)。正常情況下在口腔環(huán)境中寄居的各種微生物之間存在著錯綜復(fù)雜的共棲方式,并保持著菌群微生物之間的相對平衡,同時保持著菌群微生物與宿主之間的動態(tài)平衡,這種平恒對于保持口腔的健康非常重要。這種平衡通常不是一成不變的,口腔內(nèi)菌群微生物的種類與數(shù)量隨人的年齡、飲食、口腔衛(wèi)生狀況、口腔局部及全身情況等變動,這種平衡是相對的、可變的和有條件的,當(dāng)口腔內(nèi)菌群微生物之間、微生物與宿主之間達(dá)到動態(tài)的平衡時,就能保持宿主的口腔健康。反之,當(dāng)口腔內(nèi)菌群微生物之間的平衡被打破,口腔內(nèi)菌群微生物失去制約,或菌群微生物與宿主之間平衡被打破,都會引起宿主的口腔疾病,甚至影響全身健康。近年來,宏基因組與人類健康和和疾病的關(guān)系越來越受到關(guān)注。身體不同部位的微生物和功能性宏基因組應(yīng)當(dāng)作為人體生物系統(tǒng)的一部分的觀點(diǎn)逐漸得到認(rèn)同。身體不同部位的宏基因組之間的區(qū)別揭示了宏基因組影響組織和器官功能的機(jī)制。不同的微生物組成及其功能與身體的健康或疾病狀態(tài)緊密聯(lián)系在一起。因此對人體組織器官中的宏基因組進(jìn)行更多的細(xì)節(jié)研究將會為多種疾病的診斷和治療提供幫助。本研究用宏基因組學(xué)的方法對侵襲性牙周炎治療前后的微生物構(gòu)成進(jìn)行比較分析,從微生物群落水平揭示侵襲性牙周炎患者治療前后齦下菌斑的組成與多樣性,解析齦下菌斑微生物群落的變化與侵襲性牙周炎之間的相互關(guān)系。方法：對符合納入標(biāo)準(zhǔn)兩例侵襲性牙周炎患者(G、Z)詳細(xì)詢問并記錄病史,對患者進(jìn)行口腔檢查、牙周檢查、拍攝曲面斷層片,記錄探診出血(bleeding on probing,BOP)和探診深度(probing depth, PD)。給予患者牙周基礎(chǔ)治療,包括潔治、刮治和根面平整。分別在基線水平及牙周基礎(chǔ)治療1月后進(jìn)行臨床牙周檢查和齦下菌斑取樣。在上下頜第一磨牙近中頰面的牙周袋部位棉球隔濕,去除齦上菌斑,吹干,用滅菌刮器在牙周袋底采取齦下菌斑樣品,取得牙菌斑置于盛有0.5mmPBS的EP管中,3000r/min離心5min,棄上清液,將盛有沉淀的EP管儲存于-80℃冰箱中備用。提取樣品總DNA,經(jīng)過PCR擴(kuò)增,對16S rDNA的V4高變區(qū)進(jìn)行測序,對侵襲性牙周炎齦下菌斑菌群組成與結(jié)構(gòu)進(jìn)行分析。結(jié)果：1、患者G、Z經(jīng)牙周基礎(chǔ)治療1月后,臨床癥狀和牙周指數(shù)(BOP、PD)都得到改善。2、患者G、Z牙周基礎(chǔ)治療前后齦下菌斑16份樣品DNA擴(kuò)增出特異性DNA產(chǎn)物用于測序分析,16份樣品均可注釋到屬水平,經(jīng)Illumina Miseq測序平臺共獲得原始序列952272條,經(jīng)過拼接質(zhì)控、過濾低質(zhì)量和短長度及過濾嵌合體后的有效序列915626條,通過與文庫比對分析,能夠分類的序列887803條。3、患者G、Z牙周基礎(chǔ)治療前后齦下菌斑內(nèi)菌種種類、數(shù)目均有明顯改變。其中放線菌門、變形菌門在牙周治療后在齦下菌斑微生物菌群中所占比例顯著增多,而擬桿菌門、螺旋體門、互養(yǎng)菌門在牙周基礎(chǔ)治療后在齦下菌斑微生物菌群中所占比例明顯減少。牙周基礎(chǔ)治療前后齦下菌斑菌種及多樣性差別大,治療前菌種多樣性及菌群結(jié)構(gòu)復(fù)雜性比治療后要高；治療前不同個體侵襲性牙周炎齦下菌斑菌群結(jié)構(gòu)相似,經(jīng)牙周基礎(chǔ)治療,侵襲性牙周炎得到控制后,不同個體間的齦下菌斑結(jié)構(gòu)差異較大。結(jié)論：綜上所述,本研究通過宏基因組高通量測序的方法對兩名廣泛型侵襲性牙周炎患者牙周基礎(chǔ)治療前后的微生物組成和多樣性進(jìn)行分析。實驗結(jié)果顯示：擬桿菌門、螺旋體門、互養(yǎng)菌門均與侵襲性牙周炎的致病性有關(guān),而放線菌門和變形菌門與臨床癥狀的改善有關(guān)。本研究顯示齦下菌群的豐度與差異性和菌群的組成與多樣性一樣隨著牙周基礎(chǔ)治療而改變。進(jìn)一步的研究會繼續(xù)擴(kuò)大樣本容量來深入地揭示齦下菌群與牙周的健康和疾病的因果關(guān)系。
【關(guān)鍵詞】：宏基因組 侵襲性牙周炎 微生物多樣性
【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R781.4
【目錄】：

• 中文摘要6-9
• 英文摘要9-12
• 中英文縮略詞對照12-13
• 第一章 緒論13-19
• 第二章 侵襲性牙周炎患者口腔微生物宏基因組文庫的構(gòu)建19-23
• 一、研究對象19
• 二、主要材料、試劑及其配置方法19
• 三、主要實驗設(shè)備19
• 四、實驗步巧和方法19-23
• 第三章 侵襲性牙周炎患者口腔微生物多樣性分析23-42
• 一、患者臨床指標(biāo)23-29
• 二、實驗室檢測29-42
• 第四章 結(jié)論42-43
• 參考文獻(xiàn)43-45
• 致謝45-46
• 附件46

【相似文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

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本文編號：367108