口腔癌和頭頸部腫瘤是全球第六大常見癌癥,口腔鱗狀細胞癌（oral squamous cell carcinomas,OSCC）是其主要類型,其5年生存率仍較低�？谇坏奶厥忾_放環(huán)境下,口腔黏膜癌發(fā)生受到由內源性和外界環(huán)境因素共同調控。闡明調節(jié)口腔癌發(fā)生和發(fā)展的分子機制有助于更好地對疾病的病因進行分析,為疾病的診斷和治療設計更有效的方案;也有助于為藥物研發(fā)提供新的作用靶標。我們前期研究發(fā)現(xiàn),Wnt信號通路可能與OSCC的發(fā)生發(fā)展有關。WNT通路廣泛參與機體發(fā)育以及包括腫瘤在內的疾病發(fā)生發(fā)展過程,通�？煞譃閃nt/β-catenin或稱為經典Wnt信號通路,平面細胞極性（Wnt-PCP）通路和Wnt-鈣信號傳導途徑。本研究重點關注在OSCC發(fā)生中,兩個重要的配體蛋白,WNT7B和WNT5A,是否通過Wnt/β-catenin通路,參與口腔癌的發(fā)生發(fā)展過程。通過對現(xiàn)有病人組織以及GEO數(shù)據庫中下載的口腔癌病人測序數(shù)據進行分析,我們發(fā)現(xiàn)人類的19種WNT配體中,WNT7B和WNT5A在口腔癌中都有著不同程度的高表達。針對臨床病人和OSCC腫瘤細胞的驗證表明,WNT7BmRNA和蛋白在病人及腫瘤細... 

【文章頁數(shù)】：71 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
第一章 緒論
    1.1 口腔癌簡介
    1.2 WNT/Β-CATENIN信號通路
    1.3 WNT經典信號通路在口腔癌中的研究進展
    1.4 WNT5A和 WNT7B
    1.5 展望
第二章 材料與方法
    2.1 細胞培養(yǎng)基本方法
        2.1.1 儀器設備和試劑
            2.1.1.1 儀器設備
            2.1.1.2 試劑及材料
        2.1.2 溶液配制
        2.1.3 實驗方法
    2.2 組織和細胞總RNA提取及反轉錄
        2.2.1 儀器設備和試劑
            2.2.1.1 儀器設備
            2.2.1.2 試劑及材料
        2.2.2 溶液配制及準備工作
        2.2.3 實驗方法
            2.2.3.1 組織和細胞總RNA的提取
            2.2.3.2 反轉錄
    2.3 實時熒光定量PCR
        2.3.1 儀器設備和試劑
            2.3.1.1 儀器設備
            2.3.1.2 試劑及材料
        2.3.2 實驗方法
    2.4 細胞和組織蛋白提取及WESTERN BLOT
        2.4.1 儀器設備和試劑
            2.4.1.1 儀器設備
            2.4.1.2 試劑及材料
        2.4.2 溶液配制
        2.4.3 實驗方法
            2.4.3.1 蛋白提取
            2.4.3.2 蛋白含量測定
            2.4.3.3 蛋白變性
            2.4.3.4 WESTERN BLOT
    2.5 免疫組織化學實驗
        2.5.1 儀器設備和試劑
            2.5.1.1 儀器設備
            2.5.1.2 試劑及材料
        2.5.2 溶液配制
        2.5.3 實驗方法
    2.6 WNT7B SIRNA轉染
        2.6.1 儀器設備和試劑
            2.6.1.1 儀器設備
            2.6.1.2 試劑及材料
        2.6.2 試劑配制
        2.6.3 實驗方法
    2.7 WNT7B穩(wěn)定低表達細胞系的構建
        2.7.1 儀器設備和試劑
            2.7.1.1 儀器設備
            2.7.1.2 試劑及材料
        2.7.2 溶液配制
        2.7.3 實驗方法
            2.7.3.1 病毒包裝
            2.7.3.2 病毒液轉染
            2.7.3.3 嘌呤霉素篩選
    2.8 CCK8 細胞增殖實驗
        2.8.1 儀器設備和試劑
            2.8.1.1 儀器設備
            2.8.1.2 試劑及材料
        2.8.2 溶液配制
            2.8.3.1 細胞鋪板
            2.8.3.2 檢測方法
    2.9 劃痕實驗
        2.9.1 儀器設備和試劑
            2.9.1.1 儀器設備
            2.9.1.2 試劑及材料
        2.9.2 實驗方法
            2.9.2.1 劃板法
            2.9.2.2 插件法
    2.10 細胞周期流式檢測
        2.10.1 儀器設備和試劑
            2.10.1.1 儀器設備
            2.10.1.2 試劑及材料
        2.10.2 試劑配制
        2.10.3 實驗方法
    2.11 動物模型構建
        2.11.1 儀器設備和試劑
            2.11.1.1 儀器設備
            2.11.1.2 試劑及材料
            2.11.1.3 實驗動物
        2.11.2 溶液配制
        2.11.3 實驗方法
            2.11.3.1成瘤實驗
            2.11.3.2 腫瘤樣本處理
    2.12 質粒構建
        2.12.1 儀器設備和試劑
            2.12.1.1 儀器設備
            2.12.1.2 試劑及材料
        2.12.2 試劑配制
        2.12.3 實驗方法
            2.12.3.1 線性化載體制備
            2.12.3.2 插入片段獲得
            2.12.3.3 重組克隆
            2.12.3.4 轉化
            2.12.3.5 菌種凍存
            2.12.3.6 質粒提取
    2.13 本章小結
第三章 WNT5A和WNT7B在口腔癌中特異性高表達
    3.1 前期研究基礎
    3.2 實驗結果
        3.2.1 人口腔癌組織與癌旁組織WNT配體的測序結果
        3.2.2 口腔癌與癌旁組織WNT5A和WNT7B的 QPCR驗證
        3.2.3 口腔癌與癌旁組織WNT5A和WNT7B的 IHC驗證
    3.3 本章小結
第四章 WNT7B敲減細胞株及WNT5A過表達細胞株構建
    4.1 緒論
    4.2 實驗結果
        4.2.1 WNT7B SIRNA瞬時沉默對口腔癌細胞表型的影響
            4.2.1.1 WNT7B SIRNA瞬時沉默成功驗證
            4.2.1.2 CCK8 增殖檢測結果
            4.2.1.3 劃痕實驗結果
        4.2.2 WNT7B穩(wěn)定敲減細胞株構建
            4.2.2.1 慢病毒包裝
            4.2.2.2 病毒轉染
            4.2.2.3 嘌呤霉素篩選
            4.2.2.4 細胞系驗證
        4.2.3 目的基因敲除及過表達細胞系未能成功構建
    4.3 本章小結
第五章 WNT7B穩(wěn)定敲減在口腔癌細胞中的功能驗證
    5.1 緒論
    5.2 CCK8 增殖檢測結果
    5.3 劃痕實驗結果
    5.4 EMT相關蛋白檢測結果
    5.5 細胞周期檢測結果
    5.6 動物成瘤實驗結果
    5.7 本章小結
第六章 Wnt/β-catenin信號通路下游靶基因的變化
    6.1 緒論
    6.2 WNT/Β-CATENIN信號通路下游靶基因的蛋白表達
    6.3 本章小結
第七章 全文總結與展望
    7.1 全文總結
    7.2 后續(xù)工作展望
致謝
參考文獻



本文編號：3664856