口腔癌和頭頸部腫瘤是全球第六大常見癌癥,口腔鱗狀細(xì)胞癌（oral squamous cell carcinomas,OSCC）是其主要類型,其5年生存率仍較低。口腔的特殊開放環(huán)境下,口腔黏膜癌發(fā)生受到由內(nèi)源性和外界環(huán)境因素共同調(diào)控。闡明調(diào)節(jié)口腔癌發(fā)生和發(fā)展的分子機(jī)制有助于更好地對(duì)疾病的病因進(jìn)行分析,為疾病的診斷和治療設(shè)計(jì)更有效的方案;也有助于為藥物研發(fā)提供新的作用靶標(biāo)。我們前期研究發(fā)現(xiàn),Wnt信號(hào)通路可能與OSCC的發(fā)生發(fā)展有關(guān)。WNT通路廣泛參與機(jī)體發(fā)育以及包括腫瘤在內(nèi)的疾病發(fā)生發(fā)展過程,通�？煞譃閃nt/β-catenin或稱為經(jīng)典Wnt信號(hào)通路,平面細(xì)胞極性（Wnt-PCP）通路和Wnt-鈣信號(hào)傳導(dǎo)途徑。本研究重點(diǎn)關(guān)注在OSCC發(fā)生中,兩個(gè)重要的配體蛋白,WNT7B和WNT5A,是否通過Wnt/β-catenin通路,參與口腔癌的發(fā)生發(fā)展過程。通過對(duì)現(xiàn)有病人組織以及GEO數(shù)據(jù)庫中下載的口腔癌病人測(cè)序數(shù)據(jù)進(jìn)行分析,我們發(fā)現(xiàn)人類的19種WNT配體中,WNT7B和WNT5A在口腔癌中都有著不同程度的高表達(dá)。針對(duì)臨床病人和OSCC腫瘤細(xì)胞的驗(yàn)證表明,WNT7BmRNA和蛋白在病人及腫瘤細(xì)... 

【文章頁數(shù)】：71 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
第一章 緒論
    1.1 口腔癌簡介
    1.2 WNT/Β-CATENIN信號(hào)通路
    1.3 WNT經(jīng)典信號(hào)通路在口腔癌中的研究進(jìn)展
    1.4 WNT5A和 WNT7B
    1.5 展望
第二章 材料與方法
    2.1 細(xì)胞培養(yǎng)基本方法
        2.1.1 儀器設(shè)備和試劑
            2.1.1.1 儀器設(shè)備
            2.1.1.2 試劑及材料
        2.1.2 溶液配制
        2.1.3 實(shí)驗(yàn)方法
    2.2 組織和細(xì)胞總RNA提取及反轉(zhuǎn)錄
        2.2.1 儀器設(shè)備和試劑
            2.2.1.1 儀器設(shè)備
            2.2.1.2 試劑及材料
        2.2.2 溶液配制及準(zhǔn)備工作
        2.2.3 實(shí)驗(yàn)方法
            2.2.3.1 組織和細(xì)胞總RNA的提取
            2.2.3.2 反轉(zhuǎn)錄
    2.3 實(shí)時(shí)熒光定量PCR
        2.3.1 儀器設(shè)備和試劑
            2.3.1.1 儀器設(shè)備
            2.3.1.2 試劑及材料
        2.3.2 實(shí)驗(yàn)方法
    2.4 細(xì)胞和組織蛋白提取及WESTERN BLOT
        2.4.1 儀器設(shè)備和試劑
            2.4.1.1 儀器設(shè)備
            2.4.1.2 試劑及材料
        2.4.2 溶液配制
        2.4.3 實(shí)驗(yàn)方法
            2.4.3.1 蛋白提取
            2.4.3.2 蛋白含量測(cè)定
            2.4.3.3 蛋白變性
            2.4.3.4 WESTERN BLOT
    2.5 免疫組織化學(xué)實(shí)驗(yàn)
        2.5.1 儀器設(shè)備和試劑
            2.5.1.1 儀器設(shè)備
            2.5.1.2 試劑及材料
        2.5.2 溶液配制
        2.5.3 實(shí)驗(yàn)方法
    2.6 WNT7B SIRNA轉(zhuǎn)染
        2.6.1 儀器設(shè)備和試劑
            2.6.1.1 儀器設(shè)備
            2.6.1.2 試劑及材料
        2.6.2 試劑配制
        2.6.3 實(shí)驗(yàn)方法
    2.7 WNT7B穩(wěn)定低表達(dá)細(xì)胞系的構(gòu)建
        2.7.1 儀器設(shè)備和試劑
            2.7.1.1 儀器設(shè)備
            2.7.1.2 試劑及材料
        2.7.2 溶液配制
        2.7.3 實(shí)驗(yàn)方法
            2.7.3.1 病毒包裝
            2.7.3.2 病毒液轉(zhuǎn)染
            2.7.3.3 嘌呤霉素篩選
    2.8 CCK8 細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)
        2.8.1 儀器設(shè)備和試劑
            2.8.1.1 儀器設(shè)備
            2.8.1.2 試劑及材料
        2.8.2 溶液配制
            2.8.3.1 細(xì)胞鋪板
            2.8.3.2 檢測(cè)方法
    2.9 劃痕實(shí)驗(yàn)
        2.9.1 儀器設(shè)備和試劑
            2.9.1.1 儀器設(shè)備
            2.9.1.2 試劑及材料
        2.9.2 實(shí)驗(yàn)方法
            2.9.2.1 劃板法
            2.9.2.2 插件法
    2.10 細(xì)胞周期流式檢測(cè)
        2.10.1 儀器設(shè)備和試劑
            2.10.1.1 儀器設(shè)備
            2.10.1.2 試劑及材料
        2.10.2 試劑配制
        2.10.3 實(shí)驗(yàn)方法
    2.11 動(dòng)物模型構(gòu)建
        2.11.1 儀器設(shè)備和試劑
            2.11.1.1 儀器設(shè)備
            2.11.1.2 試劑及材料
            2.11.1.3 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
        2.11.2 溶液配制
        2.11.3 實(shí)驗(yàn)方法
            2.11.3.1成瘤實(shí)驗(yàn)
            2.11.3.2 腫瘤樣本處理
    2.12 質(zhì)粒構(gòu)建
        2.12.1 儀器設(shè)備和試劑
            2.12.1.1 儀器設(shè)備
            2.12.1.2 試劑及材料
        2.12.2 試劑配制
        2.12.3 實(shí)驗(yàn)方法
            2.12.3.1 線性化載體制備
            2.12.3.2 插入片段獲得
            2.12.3.3 重組克隆
            2.12.3.4 轉(zhuǎn)化
            2.12.3.5 菌種凍存
            2.12.3.6 質(zhì)粒提取
    2.13 本章小結(jié)
第三章 WNT5A和WNT7B在口腔癌中特異性高表達(dá)
    3.1 前期研究基礎(chǔ)
    3.2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3.2.1 人口腔癌組織與癌旁組織WNT配體的測(cè)序結(jié)果
        3.2.2 口腔癌與癌旁組織WNT5A和WNT7B的 QPCR驗(yàn)證
        3.2.3 口腔癌與癌旁組織WNT5A和WNT7B的 IHC驗(yàn)證
    3.3 本章小結(jié)
第四章 WNT7B敲減細(xì)胞株及WNT5A過表達(dá)細(xì)胞株構(gòu)建
    4.1 緒論
    4.2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        4.2.1 WNT7B SIRNA瞬時(shí)沉默對(duì)口腔癌細(xì)胞表型的影響
            4.2.1.1 WNT7B SIRNA瞬時(shí)沉默成功驗(yàn)證
            4.2.1.2 CCK8 增殖檢測(cè)結(jié)果
            4.2.1.3 劃痕實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        4.2.2 WNT7B穩(wěn)定敲減細(xì)胞株構(gòu)建
            4.2.2.1 慢病毒包裝
            4.2.2.2 病毒轉(zhuǎn)染
            4.2.2.3 嘌呤霉素篩選
            4.2.2.4 細(xì)胞系驗(yàn)證
        4.2.3 目的基因敲除及過表達(dá)細(xì)胞系未能成功構(gòu)建
    4.3 本章小結(jié)
第五章 WNT7B穩(wěn)定敲減在口腔癌細(xì)胞中的功能驗(yàn)證
    5.1 緒論
    5.2 CCK8 增殖檢測(cè)結(jié)果
    5.3 劃痕實(shí)驗(yàn)結(jié)果
    5.4 EMT相關(guān)蛋白檢測(cè)結(jié)果
    5.5 細(xì)胞周期檢測(cè)結(jié)果
    5.6 動(dòng)物成瘤實(shí)驗(yàn)結(jié)果
    5.7 本章小結(jié)
第六章 Wnt/β-catenin信號(hào)通路下游靶基因的變化
    6.1 緒論
    6.2 WNT/Β-CATENIN信號(hào)通路下游靶基因的蛋白表達(dá)
    6.3 本章小結(jié)
第七章 全文總結(jié)與展望
    7.1 全文總結(jié)
    7.2 后續(xù)工作展望
致謝
參考文獻(xiàn)



本文編號(hào)：3664856