目的 :分析沉默信息調(diào)控因子6 （silent information regulator 6,Sirt6）在大鼠骨髓間充質(zhì)干細胞（bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs）中的表達情況,以及炎癥微環(huán)境對其表達水平的影響,為研究Sirt6在牙周炎癥條件下骨形成中的作用提供理論依據(jù)。方法:根據(jù)實驗分為脂多糖（lipopolysaccharide,LPS）誘導(dǎo)組、對照組和LPS過表達Sirt6組。經(jīng)10μg/mL LPS刺激6、12、24、48、72 h,建立細胞的炎癥微環(huán)境;CCK-8法檢測細胞的增殖水平;酶聯(lián)免疫吸附試驗（enzyme linked immunosorbent assay,ELISA）檢測炎性因子腫瘤壞死因子-α（tumor necrosis factor-α,TNF-α）、白細胞介素-1β（interleukin-1β,IL-1β）、白細胞介素-6（interleukin-6,IL-6）的表達;免疫熒光技術(shù)檢測Sirt6的分布情況;通過反轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)（RT-PCR）技術(shù)、蛋白質(zhì)印跡法（western blot）檢測Sirt... 

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【文章目錄】：
1 材料和方法
    1.1 實驗動物
    1.2 實驗試劑及儀器
    1.3 實驗方法
        1.3.1 SD大鼠BMSCs體外分離培養(yǎng)與鑒定
        1.3.2 CCK-8法檢測炎癥微環(huán)境下大鼠BMSCs的增殖能力
        1.3.3 BMSCs體外多向分化能力的測定
        1.3.4 免疫熒光技術(shù)檢測Sirt6蛋白的分布
        1.3.5 ELISA檢測炎性因子TNF-α、IL-1β、IL-6的表達
        1.3.6 RT-PCR檢測Sirt6的mRNA表達水平
        1.3.7 Western blot技術(shù)檢測BMSCs細胞中Sirt6的表達
    1.4 數(shù)據(jù)分析
2 結(jié)果
    2.1 流式細胞儀檢測BMSCs中CD34、CD40、CD90、CD29的表達
    2.2 CCK-8檢測不同條件下BMSCs的增殖情況
    2.3 茜素紅和油紅O染色測定
    2.4 免疫熒光染色顯示Sirt6的表達
    2.5 ELISA檢測BMSCs培養(yǎng)基中炎性因子TNF-α、IL-1β、IL-6的表達
    2.6 RT-PCR檢測Sirt6的mRNA水平
    2.7 Western blot技術(shù)檢測BMSCs細胞中Sirt6的表達
3 結(jié)論


【參考文獻】：
期刊論文
[1]大鼠骨髓間充質(zhì)干細胞分離培養(yǎng)及鑒定[J]. 姚燦,郟舜杰,陳海嘯,洪盾,朱敏,范厲龍,呂海燕.  醫(yī)學(xué)研究雜志. 2013(05)



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