目的:牙周組織具有改建和再生的能力,正畸牙移動的過程需要牙周組織骨吸收和骨生成平衡。大量研究表明牙周膜細胞（PDLCs）在牙周組織的自我更新及牙周炎疾病組織的修復與再生過程中發(fā)揮了重要的調(diào)控作用,它是牙周缺損修復的細胞學基礎。所以明確PDLCs骨向分化的調(diào)控機制,將有助于進一步優(yōu)化牙周組織再生的治療方法,為實現(xiàn)從基礎研究到臨床運用的轉(zhuǎn)變提供依據(jù)。miRNAs參與生命活動過程中一系列的重要進程。許多研究表明,miRNAs能通過調(diào)控成骨信號通路上關鍵的轉(zhuǎn)錄因子和成骨標志性基因來促進或者抑制骨前體細胞和成骨細胞的分化。因此,研究牙周膜細胞成骨分化過程中重要的轉(zhuǎn)錄后調(diào)控分子miRNAs的變化情況,探明其中可能的調(diào)控機制,為尋找可能的miRNAs治療方法提供理論依據(jù),能為提高牙周膜細胞修復組織缺損的臨床應用提供研究基礎。miR-125b是最早發(fā)現(xiàn)的miRNA之一,在調(diào)控細胞增殖和分化過程中具有十分重要的作用。研究發(fā)現(xiàn),miR-125b可抑制人骨髓MSCs成骨分化過程中Samd4表達水平,從而影響MSCs成骨分化過程,下調(diào)MSCs細胞miR-125b的表達可促進MSCs的成骨分化。在牙周膜干細胞成... 

【文章頁數(shù)】：86 頁

【學位級別】：博士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
英文縮略語
第一部分:miRNA-125b在hPDLCs成骨分化過程中的生物學功能
    1 前言
    2 材料與方法
        2.1 材料與試劑
            2.1.1 實驗主要試劑
            2.1.2 儀器設備、材料
        2.2 實驗方法
            2.2.1 牙周膜細胞的分離和培養(yǎng)
            2.2.2 牙周膜細胞的鑒定
            2.2.3 CCK-8法細胞增殖分析
            2.2.4 牙周膜細胞成骨誘導分化
            2.2.5 牙周膜細胞成骨分化能力鑒定
            2.2.6 RT-qPCR檢測miRNA-125b的表達
            2.2.7 細胞轉(zhuǎn)染
            2.2.8 RT-qPCR檢測轉(zhuǎn)染后miR-125b的表達量
            2.2.9 miRNA-125b轉(zhuǎn)染后hPDLCs成骨分化能力鑒定
            2.2.10 統(tǒng)計學分析
    3 實驗結果
        3.1 牙周膜細胞的培養(yǎng)及鑒定
        3.2 牙周膜細胞增殖檢測
        3.3 牙周膜細胞成骨分化能力
            3.3.1 茜素紅染色和ALP染色
            3.3.2 ALP活性及鈣離子沉積量檢測
            3.3.3 RT-qPCR檢測成骨基因表達
        3.4 miRNA-125b在牙周膜細胞成骨分化過程中的表達變化
        3.5 轉(zhuǎn)染后miRNA-125b表達量檢測
        3.6 miRNA-125b抑制hPDLCs體外成骨分化
    4 討論
    5 結論
第二部分:NKIRAS2在hPDLCs成骨分化過程中的生物學功能
    1 前言
    2 材料與方法
        2.1 材料與試劑
            2.1.1 實驗主要試劑
            2.2.2 主要儀器
        2.2 實驗方法
            2.2.1 細胞轉(zhuǎn)染
            2.2.2 RT-qPCR檢測轉(zhuǎn)染后NKIRAS2的表達量
            2.2.3 shRNA-NKIRAS2轉(zhuǎn)染后hPDLCs成骨分化能力鑒定
            2.2.4 NF-κB信號轉(zhuǎn)導通路蛋白檢測
            2.2.5 統(tǒng)計學分析
    3 實驗結果
        3.1 轉(zhuǎn)染后NKIRAS2表達量檢測
        3.2 沉默NKIRAS2基因抑制hPDLCs成骨分化能力
        3.3 NKIRAS2基因抑制NF-κB通路
    4 討論
    5 結論
第三部分:miRNA-125b靶向調(diào)控NKIRAS2基因影響hPDLCs成骨分化
    1 前言
    2 材料與方法
        2.1 材料與試劑
            2.1.1 主要試劑
            2.1.2 主要儀器
        2.2 實驗方法
            2.2.1 靶基因NKIRAS2的表達檢測
            2.2.2 miRNA-125b與sh-NKIRAS2共轉(zhuǎn)染后hPDLCs成骨功能檢測
            2.2.3 NF-κB信號通路相關蛋白檢測
            2.2.4 統(tǒng)計學分析
    3 結果
        3.1 靶基因NKIRAS2檢測結果
        3.2 miRNA-125b通過NKIRAS2負向調(diào)控hPDLCs成骨分化
        3.3 miRNA-125b通過NF-κB通路負向調(diào)控hPDLCs成骨分化
    4 討論
    5 結論
本研究創(chuàng)新型的自我評價
參考文獻
綜述
    參考文獻
攻讀學位期間取得的研究成果
致謝
個人簡歷


【參考文獻】：
期刊論文
[1]應用基因芯片分析牙周膜干細胞向成骨細胞分化過程中miRNA表達譜的差異[J]. 呂紅兵.  中國醫(yī)學工程. 2014(05)
[2]miR-125b通過靶向抑制Smad4調(diào)控骨髓間充質(zhì)干細胞成骨分化[J]. 陸細紅,鄧敏,賀洪輝,曾德輝,張衛(wèi).  中南大學學報(醫(yī)學版). 2013(04)
[3]miR-125b調(diào)節(jié)C3H10T1/2間充質(zhì)干細胞中Cbfβ的表達[J]. 周維,謝肇,許建中.  第三軍醫(yī)大學學報. 2012(11)
[4]hsa-miR-654-5p通過抑制骨形態(tài)發(fā)生蛋白2調(diào)控人骨髓基質(zhì)干細胞成骨分化[J]. 魏均強,陳華,鄭曉飛,張伯勛,王巖,唐佩福,佘飛,宋青,黎檀實.  南方醫(yī)科大學學報. 2012(03)
[5]miR-125b對人骨髓間充質(zhì)干細胞成骨潛能的影響[J]. 馬張穩(wěn),杜勝利,田紅英,劉宗克,馮陽陽.  齊齊哈爾醫(yī)學院學報. 2011(04)
[6]三種方法原代培養(yǎng)人牙周膜細胞[J]. 蔣俊強,王忠朝,黎春暉,蔡煒.  中國組織工程研究與臨床康復. 2010(23)
[7]骨碎補柚皮苷對人牙周膜細胞增殖、堿性磷酸酶活性影響的實驗研究[J]. 蔣俊強,丁一,李小玉,蔡煒,王忠朝.  華西口腔醫(yī)學雜志. 2009(05)
[8]人牙周膜細胞原代培養(yǎng)及鑒定[J]. 李雋,胥春,郝軼,張富強.  上海交通大學學報(醫(yī)學版). 2008(11)
[9]體外培養(yǎng)人牙周膜細胞方法的探討[J]. 張麗,王永,張軍梅,侯豫,吳承龍,王文秀.  貴陽醫(yī)學院學報. 2008(05)
[10]狗牙周膜細胞三維立體培養(yǎng)的體外實驗研究[J]. 魯紅,吳織芬,田宇,陳書軍.  實用口腔醫(yī)學雜志. 2003(04)

博士論文
[1]miR-125b調(diào)控人骨髓間充質(zhì)干細胞成骨機制的研究[D]. 汪華清.第三軍醫(yī)大學 2015



本文編號：3651557