目的:牙周組織具有改建和再生的能力,正畸牙移動(dòng)的過程需要牙周組織骨吸收和骨生成平衡。大量研究表明牙周膜細(xì)胞（PDLCs）在牙周組織的自我更新及牙周炎疾病組織的修復(fù)與再生過程中發(fā)揮了重要的調(diào)控作用,它是牙周缺損修復(fù)的細(xì)胞學(xué)基礎(chǔ)。所以明確PDLCs骨向分化的調(diào)控機(jī)制,將有助于進(jìn)一步優(yōu)化牙周組織再生的治療方法,為實(shí)現(xiàn)從基礎(chǔ)研究到臨床運(yùn)用的轉(zhuǎn)變提供依據(jù)。miRNAs參與生命活動(dòng)過程中一系列的重要進(jìn)程。許多研究表明,miRNAs能通過調(diào)控成骨信號(hào)通路上關(guān)鍵的轉(zhuǎn)錄因子和成骨標(biāo)志性基因來促進(jìn)或者抑制骨前體細(xì)胞和成骨細(xì)胞的分化。因此,研究牙周膜細(xì)胞成骨分化過程中重要的轉(zhuǎn)錄后調(diào)控分子miRNAs的變化情況,探明其中可能的調(diào)控機(jī)制,為尋找可能的miRNAs治療方法提供理論依據(jù),能為提高牙周膜細(xì)胞修復(fù)組織缺損的臨床應(yīng)用提供研究基礎(chǔ)。miR-125b是最早發(fā)現(xiàn)的miRNA之一,在調(diào)控細(xì)胞增殖和分化過程中具有十分重要的作用。研究發(fā)現(xiàn),miR-125b可抑制人骨髓MSCs成骨分化過程中Samd4表達(dá)水平,從而影響MSCs成骨分化過程,下調(diào)MSCs細(xì)胞miR-125b的表達(dá)可促進(jìn)MSCs的成骨分化。在牙周膜干細(xì)胞成... 

【文章頁數(shù)】：86 頁

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
英文縮略語
第一部分:miRNA-125b在hPDLCs成骨分化過程中的生物學(xué)功能
    1 前言
    2 材料與方法
        2.1 材料與試劑
            2.1.1 實(shí)驗(yàn)主要試劑
            2.1.2 儀器設(shè)備、材料
        2.2 實(shí)驗(yàn)方法
            2.2.1 牙周膜細(xì)胞的分離和培養(yǎng)
            2.2.2 牙周膜細(xì)胞的鑒定
            2.2.3 CCK-8法細(xì)胞增殖分析
            2.2.4 牙周膜細(xì)胞成骨誘導(dǎo)分化
            2.2.5 牙周膜細(xì)胞成骨分化能力鑒定
            2.2.6 RT-qPCR檢測(cè)miRNA-125b的表達(dá)
            2.2.7 細(xì)胞轉(zhuǎn)染
            2.2.8 RT-qPCR檢測(cè)轉(zhuǎn)染后miR-125b的表達(dá)量
            2.2.9 miRNA-125b轉(zhuǎn)染后hPDLCs成骨分化能力鑒定
            2.2.10 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
    3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3.1 牙周膜細(xì)胞的培養(yǎng)及鑒定
        3.2 牙周膜細(xì)胞增殖檢測(cè)
        3.3 牙周膜細(xì)胞成骨分化能力
            3.3.1 茜素紅染色和ALP染色
            3.3.2 ALP活性及鈣離子沉積量檢測(cè)
            3.3.3 RT-qPCR檢測(cè)成骨基因表達(dá)
        3.4 miRNA-125b在牙周膜細(xì)胞成骨分化過程中的表達(dá)變化
        3.5 轉(zhuǎn)染后miRNA-125b表達(dá)量檢測(cè)
        3.6 miRNA-125b抑制hPDLCs體外成骨分化
    4 討論
    5 結(jié)論
第二部分:NKIRAS2在hPDLCs成骨分化過程中的生物學(xué)功能
    1 前言
    2 材料與方法
        2.1 材料與試劑
            2.1.1 實(shí)驗(yàn)主要試劑
            2.2.2 主要儀器
        2.2 實(shí)驗(yàn)方法
            2.2.1 細(xì)胞轉(zhuǎn)染
            2.2.2 RT-qPCR檢測(cè)轉(zhuǎn)染后NKIRAS2的表達(dá)量
            2.2.3 shRNA-NKIRAS2轉(zhuǎn)染后hPDLCs成骨分化能力鑒定
            2.2.4 NF-κB信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路蛋白檢測(cè)
            2.2.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
    3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3.1 轉(zhuǎn)染后NKIRAS2表達(dá)量檢測(cè)
        3.2 沉默NKIRAS2基因抑制hPDLCs成骨分化能力
        3.3 NKIRAS2基因抑制NF-κB通路
    4 討論
    5 結(jié)論
第三部分:miRNA-125b靶向調(diào)控NKIRAS2基因影響hPDLCs成骨分化
    1 前言
    2 材料與方法
        2.1 材料與試劑
            2.1.1 主要試劑
            2.1.2 主要儀器
        2.2 實(shí)驗(yàn)方法
            2.2.1 靶基因NKIRAS2的表達(dá)檢測(cè)
            2.2.2 miRNA-125b與sh-NKIRAS2共轉(zhuǎn)染后hPDLCs成骨功能檢測(cè)
            2.2.3 NF-κB信號(hào)通路相關(guān)蛋白檢測(cè)
            2.2.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
    3 結(jié)果
        3.1 靶基因NKIRAS2檢測(cè)結(jié)果
        3.2 miRNA-125b通過NKIRAS2負(fù)向調(diào)控hPDLCs成骨分化
        3.3 miRNA-125b通過NF-κB通路負(fù)向調(diào)控hPDLCs成骨分化
    4 討論
    5 結(jié)論
本研究創(chuàng)新型的自我評(píng)價(jià)
參考文獻(xiàn)
綜述
    參考文獻(xiàn)
攻讀學(xué)位期間取得的研究成果
致謝
個(gè)人簡(jiǎn)歷


【參考文獻(xiàn)】：
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博士論文
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本文編號(hào)：3651557