牙周炎是由牙菌斑生物膜等因素引起的牙周組織慢性感染性疾病,可導(dǎo)致牙槽骨吸收,進(jìn)而引起牙齒脫落,影響咀嚼功能甚至影響生活質(zhì)量。目前,我們通過牙周基礎(chǔ)治療控制疾病炎癥發(fā)展,但難以完全有效地恢復(fù)已喪失的牙槽骨組織,針對(duì)這一臨床問題,促進(jìn)牙周組織再生受到關(guān)注,通過植入生長(zhǎng)因子、支架材料及種子細(xì)胞實(shí)現(xiàn)牙槽骨重塑促進(jìn)牙周組織修復(fù),已成為牙周臨床發(fā)展的關(guān)鍵。近年研究發(fā)現(xiàn)寡核苷酸（ODN）參與細(xì)胞免疫和骨改建過程,具有研究意義。前期實(shí)驗(yàn)中,免疫抑制型ODN MT01可促進(jìn)感染狀態(tài)下的人骨肉瘤細(xì)胞MG63細(xì)胞成骨向分化。本實(shí)驗(yàn)將12條不同的ODN序列刺激培養(yǎng)人牙周膜細(xì)胞（hPDLCs）,篩選出促進(jìn)增殖和增強(qiáng)堿性磷酸酶（ALP）活性的ODN,并應(yīng)用篩選出的ODN刺激健康和感染狀態(tài)下的hPDLCs,檢測(cè)細(xì)胞周期、細(xì)胞凋亡情況和細(xì)胞內(nèi)炎性細(xì)胞因子的表達(dá)情況進(jìn)行比較分析。方法:1.體外提取培養(yǎng)hPDLCs;培養(yǎng)牙齦卟啉單胞菌。2.采用MTT法檢測(cè)12條不同序列ODN刺激下hPDLCs的增殖活性。3.采用磷酸苯二鈉微板法檢測(cè)12條不同序列ODN刺激下hPDLCs中堿性磷酸酶活性。4.采用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)篩選出的特定... 

【文章頁(yè)數(shù)】：46 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
Abstract
第1章 引言
第2章 文獻(xiàn)綜述
    2.1 ODN概述
    2.2 ODN在牙周方向的相關(guān)研究
    2.3 ODN的體內(nèi)代謝
第3章 實(shí)驗(yàn)研究
    3.1 實(shí)驗(yàn)材料與儀器
        3.1.1 主要材料與試劑
        3.1.2 主要儀器與設(shè)備
        3.1.3 試劑配制
    3.2 實(shí)驗(yàn)方法
        3.2.1 hPDLCs原代培養(yǎng)
        3.2.2 MTT法檢測(cè)細(xì)胞增殖活性
        3.2.3 磷酸苯二鈉微板法檢測(cè)細(xì)胞ALP活性
        3.2.4 牙齦卟啉單胞菌培養(yǎng)
        3.2.5 流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞凋亡
        3.2.6 流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞周期
        3.2.7 RT-PCR檢測(cè)細(xì)胞炎性因子表達(dá)
            3.2.7.1 引物設(shè)計(jì)和合成
            3.2.7.2 細(xì)胞總RNA提取
            3.2.7.3 細(xì)胞cDNA合成
            3.2.7.4 RT-PCR反應(yīng)
        3.2.8 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
第4章 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
    4.1 培養(yǎng)hPDLCs的形態(tài)表現(xiàn)
    4.2 ODN對(duì)hPDLCs的細(xì)胞毒性影響
    4.3 ODN對(duì)hPDLCs內(nèi)ALP活性影響
    4.4 牙齦卟啉單胞菌的形態(tài)表現(xiàn)
    4.5 ODN對(duì)健康和感染狀態(tài)hPDLCs細(xì)胞凋亡率影響
    4.6 ODN對(duì)健康和感染狀態(tài)hPDLCs細(xì)胞周期百分比影響
    4.7 ODN對(duì)健康和感染狀態(tài)hPDLCs炎性因子mRNA表達(dá)影響
第5章 討論
    5.1 ODN促進(jìn)hPDLCs的細(xì)胞增殖活性
    5.2 ODN促進(jìn)hPDLCs的ALP活性
    5.3 ODN縮短健康和感染狀態(tài)下hPDLCs G1期并促進(jìn)細(xì)胞進(jìn)入S期
    5.4 ODN抑制健康和感染狀態(tài)下hPDLCs凋亡
    5.5 ODN調(diào)控健康和感染狀態(tài)下hPDLCs炎癥因子表達(dá)
第6章 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
作者簡(jiǎn)介及在學(xué)期間所取得的科研成果
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]含CpG-ODN基序重組抑制素質(zhì)粒的構(gòu)建及其對(duì)小鼠顆粒細(xì)胞相關(guān)凋亡基因表達(dá)的影響[J]. 陽(yáng)美霞,張虹亮,李藍(lán)祁,張羽芳,楊利國(guó),王水蓮.  畜牧獸醫(yī)學(xué)報(bào). 2018(08)
[2]MT01對(duì)實(shí)驗(yàn)性牙移動(dòng)大鼠牙周組織中TLR9、TRAF6和IL-6表達(dá)水平的影響[J]. 楊竹君,侯旭,于文雯,閆闊,申玉芹,孫新華.  吉林大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版). 2017(04)
[3]MT01對(duì)感染狀態(tài)人成骨樣細(xì)胞內(nèi)ALP活性及mRNA表達(dá)的影響[J]. 高涵,申玉芹,劉引,胡天琦,費(fèi)鴻博,顧中一,李洋洋,林崇韜.  口腔醫(yī)學(xué)研究. 2016(06)
[4]MT01對(duì)Pg感染的成骨細(xì)胞MG63特異性成骨相關(guān)因子表達(dá)的影響[J]. 周岳,申玉芹,高涵,劉引,于海蛟,林崇韜.  口腔醫(yī)學(xué)研究. 2016 (01)
[5]特定序列寡核苷酸MT01對(duì)牙齦卟啉單胞菌感染的成骨細(xì)胞的增殖、細(xì)胞周期及凋亡的影響[J]. 于海蛟,申玉芹,劉引,高涵,周岳,胡天琦,林崇韜.  華西口腔醫(yī)學(xué)雜志. 2015(06)
[6]牙齦卟啉單胞菌感染MG63細(xì)胞對(duì)細(xì)胞周期的影響[J]. 潘春玲,趙海礁,譚麗思,潘亞萍,鐘鳴.  口腔醫(yī)學(xué)研究. 2015(09)
[7]MTT比色法研究應(yīng)用進(jìn)展[J]. 李上標(biāo),裴淑艷,蔣超,馬玉,郭忠.  西北民族大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版). 2013(03)
[8]牙齦卟啉單胞菌誘導(dǎo)骨細(xì)胞凋亡的實(shí)驗(yàn)研究[J]. 唐保柱,任曉斌,陳玉華,和紅兵.  中國(guó)實(shí)用口腔科雜志. 2010(10)

碩士論文
[1]Cy5標(biāo)記寡脫氧核苷酸MT01在大鼠重要臟器組織中的分布[D]. 張超.吉林大學(xué) 2014



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