目的:比較腺樣囊性癌細胞系與舌鱗狀細胞癌細胞分泌的外泌體的差異。探討人唾液腺腺樣囊性癌（Salivary adenoid cystic carcinoma,Sacc）不同細胞系分泌的外泌體（exosomes,EXO）對Sacc細胞增殖、遷移及侵襲的影響。方法:使用ExoEasy Maxi Kit試劑盒提取外泌體,通過透射電鏡觀察外泌體形態(tài)及直徑,納米粒子跟蹤分析（NTA）鑒定外泌體的粒徑及檢測外泌體濃度,Western Blotting檢測外泌體標志性蛋白的表達及半定量分析其在Sacc-83、Sacc-lm、Tscc-25、Tscca不同細胞系間的表達水平。采用CCK-8法、平板克隆形成實驗、細胞劃痕及Transwell實驗檢測外泌體對Sacc細胞增殖、遷移及侵襲能力。結(jié)果:透射電鏡及NTA檢測顯示:提取的外泌體直徑在30-210nm之間,且形態(tài)及粒徑大小略有差異;Western Blotting檢測到不同細胞系分泌的外泌體特異性標志蛋白CD9,CD63及TSG101呈陽性表達,且具有明顯差異（P<0.01）。NTA濃度分析顯示腺樣囊性癌及舌鱗狀細胞癌四種細胞系外泌體分泌量具有明... 

【文章來源】：新疆醫(yī)科大學(xué)新疆維吾爾自治區(qū)

【文章頁數(shù)】：41 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

透射電鏡觀察到四種細胞系來源的外泌體形態(tài)及直徑(A-D;50000×，80kv)：圖A為Sacc-83

新疆醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文121.1.3WesternBlotting分析：四種細胞系培養(yǎng)上清中提取的外泌體中均可檢測到外泌體特異性標志蛋白CD9,CD63及TSG101表達（圖2A）。圖2Westernblot法檢測四種細胞系來源外泌體中特異性蛋白CD9,CD63andTSG101的表達:圖A為Sacc-83,Sacc-lm,Tscc-25,Tscca四種細胞系來源的外泌體特異性蛋白CD9,CD63,TSG101表達水平。圖B為不同腫瘤細胞Sacc-83與Tscca來源的外泌體特異性蛋白CD9,CD63,TSG101表達差異（CD9,CD63,p<0.01）。圖C為腺樣囊腺癌兩種不同細胞系Sacc-83與Sacc-lm來源的外泌體特異性蛋白CD9,CD63,TSG101表達差異(CD9,CD63,P<0.01;TSG101,P<005)。Fig.2WesternblotanalysiswasusedtodetecttheexpressionofspecificproteinsCD9,CD63andTSG101inexosomesderivedfromfourcelllines.1.2SACC及SCC來源的外泌體對比分析1.2.1WesternBlotting(WB)分析4種細胞系外泌體特異性蛋白表達情況顯示，舌鱗狀細胞癌Tscc-25細胞系外泌體特異性蛋白CD9,CD63表達明顯高于腺樣囊性癌Sacc-83細胞系表達，差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01)(圖2B)。同時，腺樣囊性癌不同細胞系之間，高轉(zhuǎn)移株Sacc-lm細胞系外泌體中特異性蛋白CD9,CD63明顯高于Sacc-83細胞系外泌體特異性蛋白表達，差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01)(圖2C)。1.2.2NTA分析儀檢測4種細胞系提取的外泌體濃度顯示,舌鱗狀細胞癌Tscc-25,Tscca細胞外泌體的分泌量明顯高于腺樣囊性癌Sacc-83細胞系，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01)。同時，腺樣囊性癌不同細胞系Sacc-lm(高轉(zhuǎn)移株)外泌體的分泌量明顯高于Sacc-83細胞系，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01)(圖3)。圖3NTA分析4種細胞系分泌的外泌體濃度:腺樣囊腺癌兩種細胞系Sacc-83,Sacc-lm來源的外泌體濃度檢測具有明顯的統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.01）;兩

Sacc-83細胞系表達，差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01)(圖2B)。同時，腺樣囊性癌不同細胞系之間，高轉(zhuǎn)移株Sacc-lm細胞系外泌體中特異性蛋白CD9,CD63明顯高于Sacc-83細胞系外泌體特異性蛋白表達，差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01)(圖2C)。1.2.2NTA分析儀檢測4種細胞系提取的外泌體濃度顯示,舌鱗狀細胞癌Tscc-25,Tscca細胞外泌體的分泌量明顯高于腺樣囊性癌Sacc-83細胞系，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01)。同時，腺樣囊性癌不同細胞系Sacc-lm(高轉(zhuǎn)移株)外泌體的分泌量明顯高于Sacc-83細胞系，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01)(圖3)。圖3NTA分析4種細胞系分泌的外泌體濃度:腺樣囊腺癌兩種細胞系Sacc-83,Sacc-lm來源的外泌體濃度檢測具有明顯的統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.01）;兩種不同腫瘤細胞Sacc-83與Tscc-25來源的外泌體濃度檢測同樣具有明顯的統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.01）。Fig.3NTAanalyzedtheconcentrationsofexosomesecretedbythefourcelllines.

【參考文獻】：
期刊論文
[1]腫瘤外泌體的提取與鑒定[J]. 葉冬熳,于韜.  現(xiàn)代腫瘤醫(yī)學(xué). 2018(20)
[2]TGF-β1在涎腺腺樣囊性癌發(fā)生發(fā)展中的研究進展[J]. 王新宦,宮惠敏,王曉峰.  現(xiàn)代腫瘤醫(yī)學(xué). 2017(18)



本文編號：3612182