發(fā)布時間：2022-01-03 15:40

　　研究背景及目的本實驗旨在探討表沒食子兒茶素沒食子酸酯（epigallocatechin gallate,EGCG）對口腔舌鱗狀細(xì)胞癌（tongue squamous cell carcinoma,TSCC）細(xì)胞的抑癌作用,包括對細(xì)胞增殖、凋亡、遷移和侵襲生物學(xué)表型的影響;探討EGCG對TSCC細(xì)胞的抑制作用是否由TAZ進行介導(dǎo)及其上游可能的調(diào)控機制。通過探究TSCC細(xì)胞中EGCG與TAZ因子之間的聯(lián)系,從而豐富EGCG抗口腔癌的分子機制,并嘗試找到合適的作用靶點,為EGCG作為TSCC的新型化療藥物提供分子理論基礎(chǔ),也為TSCC的藥物治療提供更多的選擇及可能。方法1.檢測EGCG對舌鱗狀細(xì)胞癌CAL27與SCC15細(xì)胞增殖的影響。采用CCK-8實驗檢測不同濃度藥物作用24 h后,CAL27細(xì)胞與SCC15細(xì)胞增殖的變化;不同濃度藥物連續(xù)作用4-5天,觀察CAL27細(xì)胞與SCC15細(xì)胞生長曲線的變化。并檢測增殖相關(guān)蛋白Erk、p-Erk、Akt、p-Akt的改變。2.檢測EGCG對舌鱗狀細(xì)胞癌CAL27與SCC15細(xì)胞凋亡的影響。采用流式細(xì)胞術(shù)檢測不同濃度藥物作用24 h后,CAL27細(xì)... 

【文章來源】：山東大學(xué)山東省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：54 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖１：ＥＧＣＧ抑制了?ＣＡＬ２７細(xì)胞和ＳＣＣ１５細(xì)胞的增殖，并呈劑量和時間依賴性

?下象限）和晚期凋亡率（右上象限）均呈現(xiàn)上升趨勢，ＳＣＣ１５細(xì)胞總凋亡率（右??上＋右下象限）的差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（Ｐ＜０．００１）（圖２Ｄ）。??我們采用Ｗｅｓｔｅｒｎ?ｂｌｏｔｔｉｎｇ驗證不同濃度ＥＧＣＧ是ｍ會引起調(diào)亡相關(guān)蛋白的??改變。發(fā)現(xiàn)隨ＥＧＣＧ濃度的升高，抗凋亡基因Ｂｃｌ－２蛋白水平減低，促凋亡基因??Ｂａｘ蛋白水平升高，ＤＮＡ修復(fù)酶ＰＡＲＰ減少，其被激活狀態(tài)Ｃｌｅａｖｅｄ?ＰＡＲＰ蛋白水??平升高（圖２Ｅ）。??ＣＡＬ２７細(xì)胞??Ａ?．，產(chǎn)?Ｔ７?Ｂ?〇?ｅａｒｌｙ?ａｐｏｐｔｏｓｉｓ??Ｉ??０?８０ｐＭ?１６０ｐＭ?〇?。?？〇?，＜０??ＳＣＣ１５細(xì)胞??１００ｐＭ?１５０ｐＭ?２００ｐＭ??０?１００?１６０?２００?ｐＭ??Ｅ?？一讀?Ｂａｘ??？?＿?？?？?Ｂｃｌ－２??ｍｍｍｒｎ?—＊?—?＂Ｈ?ＰＡＲＰ??－Ｃｌｅａｖｅｄ?ＰＡＲＰ??ｍｍ?ｍｍ?ｇａｐｄｈ??￣￣０?８０?１６０?ｍＭ??圖２：?ＥＧＣＧ促進了?ＣＡＬ２７細(xì)胞和ＳＣＣ１５細(xì)胞的凋亡，并呈劑量依賴性。??（Ａ）不同濃度ＥＧＣＧ?（０、８０、１６０＾Ｍ）作用于ＣＡＬ２７細(xì)胞２４ｈ后，流式細(xì)胞??術(shù)檢測細(xì)胞凋亡。（Ｂ）對ＣＡＬ２７細(xì)胞的凋亡率進行統(tǒng)計學(xué)分析。（Ｃ）不同濃度??ＥＧＣＧ?（０、１００、１５０、２０〇ｎＭ）作用于ＳＣＣ１５細(xì)胞２４ｈ后，流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)??胞凋亡。（Ｄ）對ＳＣＣ１５細(xì)胞的凋亡率進行統(tǒng)計學(xué)分析。（Ｅ）?Ｗｅｓｔｅｒｎ?ｂｌｏｔｔｉｎｇ實??驗檢測不同濃度ＥＧＣＧ?（０、８０、１６０?ｐＭ）作用于ＣＡＬ２７細(xì)胞２４?ｈ后

劃痕實驗結(jié)果顯示，藥物作用于ＣＡＬ２７細(xì)胞２４?ｈ后，不加藥組（對照組）??的遷移率為?６５．００±６．０８％，８０?ｍＭ?ＥＧＣＧ?的遷移率為?１８．６７±３．５２％，１６０?ｐＭ?ＥＧＣＧ??的遷移率為５．００±１．７３％?（圖３Ａ）。加藥組與不加藥組的遷移率相比，差異均具有??統(tǒng)計學(xué)意義（Ｐ＜０．００１）（圖３Ｂ）。藥物作用４８?ｈ后，不加藥組（對照組）的遷??移率為?８１．３３±３．５３％，８０?ｎＭ?ＥＧＣＧ?的遷移率為?２４．６７±２．９１％，?１６０?ｍＭ?ＥＧＣＧ?的遷??移率為８．００±１．１６％?（圖３Ａ）。加藥組與不加藥組的遷移率相比，差異均具有統(tǒng)計??學(xué)意義（Ｐ＜０．００１）（圖３Ｂ）。ＥＧＣＧ的作用時間越長，濃度越高，ＣＡＬ２７細(xì)胞遷??移的距離越少，細(xì)胞的遷移能力越弱。??藥物作用于ＳＣＣ１５細(xì)胞２４ｈ后，不加藥組（對照組）的遷移率為３９．６７±４．４１％，??１００?ＥＧＣＧ?的遷移率為?２１．３３±１．７６％，１５０?ｎＭ?ＥＧＣＧ?的遷移率為?１２．６７±２．６７％，??２００?＾￡０００的遷移率為５．００±１．７３％（圖３〇。加藥組與不加藥組的遷移率相??比


本文編號：3566533