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牙齦卟啉單胞菌菌毛蛋白誘導(dǎo)內(nèi)皮細(xì)胞炎癥反應(yīng)的信號通路研究

發(fā)布時(shí)間:2022-01-01 09:28
  目的比較分析不同fimA型P.gingivalis菌毛蛋白誘導(dǎo)人臍靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞炎癥反應(yīng)的相關(guān)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)。方法 1.厭氧培養(yǎng)并鑒定ⅡfimA型(WCSP115)和ⅣfimA型(W83)P.gingivalis,收集菌液提取細(xì)菌DNA,克隆ⅡfimA型和ⅣfimA型P.gingivalis fimA序列,構(gòu)建fimA的原核表達(dá)系統(tǒng)pET-30a-FimABL21DE3,IPTG誘導(dǎo)表達(dá)重組菌毛蛋白rFimA;2.體外培養(yǎng)HUVECs(CRL-2480),待HUVECs單層融合后,與不同終濃度的P.gingivalis-rFimA(0.5μg/ml、5μg/ml、10μg/m1)共同孵育2h、6h、24h,提取HUVECs總RNA,Real Time-PCR檢測CD14、TLR2、TLR4和MyD88的mRNA表達(dá)水平,流式細(xì)胞術(shù)檢測HUVECs膜表面CD14、跨膜受體TLR2和TLR4蛋白表達(dá)量。結(jié)果 1.Ⅱ型或Ⅳ型rFimA蛋白刺激HUVECs,CD14 mRNA表達(dá)量增加,且在2h時(shí),Ⅳ型rFimA蛋白誘導(dǎo)HUVECs表達(dá)CD14 mRNA的水平高于Ⅱ型rFimA蛋白(P<0.... 

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