發(fā)布時間：2017-04-20 21:24

  本文關(guān)鍵詞：口腔頜面部鱗狀細(xì)胞癌患者外周血miRNA的表達(dá)及意義，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:檢測分析口腔頜面部鱗狀細(xì)胞癌患者外周血中mi RNA表達(dá)譜,篩選出口腔頜面部鱗狀細(xì)胞癌差異性血清mi RNA,對篩選出的mi RNA進(jìn)行選擇性驗(yàn)證,尋找特異性表達(dá)的血清mi RNA,為口腔頜面部鱗狀細(xì)胞癌的早期診斷、早期治療以及預(yù)后判定提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)和理論基礎(chǔ)。方法:1按照外周血采集規(guī)范收集3例口腔頜面部鱗狀細(xì)胞癌患者的血液標(biāo)本作為實(shí)驗(yàn)組。實(shí)驗(yàn)組患者未進(jìn)行任何特殊治療,均有組織病理學(xué)診斷依據(jù),排除其它系統(tǒng)腫瘤或和口腔轉(zhuǎn)移性腫瘤。對照組采用3例正常人群的外周血。于清晨空腹抽取外周靜脈血2m L,抗凝處理,-80℃保存。血液標(biāo)本在室溫下放置時間不超過1h。2使用RNA提取試劑盒對標(biāo)本進(jìn)行總RNA的提純。3進(jìn)行RNA濃度和純度的檢測。4稀釋樣本使各其RNA濃度相等,按照試劑盒的說明書進(jìn)行RNA逆轉(zhuǎn)錄。5 96孔板選擇human serum plasma mirna pcr array試劑盒,進(jìn)行q RT-PCR反應(yīng)進(jìn)行差異性mi RNA的篩選。6選取外周血hsa-mi R-222-3p、hsa-mi R-423-5p進(jìn)行驗(yàn)證,擴(kuò)大標(biāo)本量至每組30例;提取總RNA,進(jìn)行RNA濃度和純度的檢測。7稀釋樣本使各樣本的RNA濃度相等,進(jìn)行q RT-PCR反應(yīng)。8結(jié)果判定及統(tǒng)計學(xué)分析mi RNA的表達(dá)水平差異用2-△△C T來表示,整理每個基因的CT值,再用每組自身的目的基因CT值減去自身內(nèi)參基因CT值,即為△CT,公式為△CT=CT(目的基因)-CT(內(nèi)參基因),求其均值;其中C.39作為內(nèi)參。再用本次實(shí)驗(yàn)中實(shí)驗(yàn)組的△CT減去對照組的△CT,公式為△△CT=△CT(實(shí)驗(yàn)組)-△CT(對照組)。Fold Change值為2-△△C T,求其均值。Fold Change大于2表明實(shí)驗(yàn)組中mi RNA表達(dá)水平較對照組的上調(diào)且有意義。Fold Change小于0.5表明實(shí)驗(yàn)組中mi RNA表達(dá)水平較對照組的下調(diào)且有意義。以上所有統(tǒng)計學(xué)方法均在Excel軟件上進(jìn)行。利用相對定量的方法來檢測hsa-mi R-222-3p、hsa-mi R-423-5p在口腔頜面部鱗狀細(xì)胞癌患者外周血中表達(dá)水平的差異。mi RNA的表達(dá)水平差異用RQ=2-△△C T來表示。兩種mi RNA在口腔頜面部鱗狀細(xì)胞癌與正常組外周血中的表達(dá)水平的以均值±標(biāo)準(zhǔn)差(x±SD)表示,采用完全隨機(jī)的兩獨(dú)立樣本的t檢驗(yàn)比較各組件差異,P0.05為顯著性差異。以上所有統(tǒng)計學(xué)方法均在SPSS13.0統(tǒng)計軟件上進(jìn)行。結(jié)果:1口腔頜面部鱗癌患者外周血mi RNA高于正常人外周血mi RNA且有意義的mi RNA有8個(Fold Change2)。2口腔頜面部鱗癌患者外周血mi RNA低于正常人外周血mi RNA且有意義的mi RNA有18個(Fold Change0.5)。3 30例實(shí)驗(yàn)組的hsa-mi R-222-3p表達(dá)水平平均值為5.587±0.218,30例對照組的表達(dá)水平平均值為0.972±0.177。口腔頜面部鱗狀細(xì)胞癌組的hsa-mi R-222-3p表達(dá)水平較正常組中的表達(dá)水平間差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。4 30例實(shí)驗(yàn)組的hsa-mi R-423-5p表達(dá)水平平均值為0.431±0.066,30例對照組的表達(dá)水平平均值為1.206±0.195。口腔頜面部鱗狀細(xì)胞癌組的hsa-mi R-423-5p表達(dá)水平較正常組中的表達(dá)水平間差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論:1在口腔頜面部鱗狀細(xì)胞癌患者外周血中mi RNA的表達(dá)水平較正常組存在差異,推測外周血mi RNA的表達(dá)水平與口腔頜面部鱗狀細(xì)胞癌的發(fā)生有關(guān)。2 hsa-mi R-222-3p在口腔頜面部鱗狀細(xì)胞癌患者外周血中高表達(dá);hsa-mi R-423-5p在口腔頜面部鱗狀細(xì)胞癌患者外周血中低表達(dá)。推測hsa-mi R-222-3p、hsa-mi R-423-5p有可能成為診斷口腔頜面部鱗狀細(xì)胞癌的生物標(biāo)記物。
【關(guān)鍵詞】：外周血miRNA qRT-PCR 口腔頜面部鱗狀細(xì)胞癌 miR-222 mi R-423 生物標(biāo)記物
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R739.8
【目錄】：

• 中文摘要4-7
• 英文摘要7-10
• 英文縮寫10-12
• 引言12-13
• 第一部分 篩選口腔頜面部鱗狀細(xì)胞癌患者外周血表達(dá)差異miRNA13-27
• 前言13
• 材料與方法13-17
• 結(jié)果17-18
• 附表18-20
• 討論20-23
• 小結(jié)23-24
• 參考文獻(xiàn)24-27
• 第二部分 外周血hsa-miR2223p、hsa-miR4235p在口腔頜面部鱗狀細(xì)胞癌中特異性表達(dá)的驗(yàn)證27-37
• 前言27
• 材料與方法27-29
• 結(jié)果29-30
• 附圖30-31
• 附表31-34
• 討論34-35
• 小結(jié)35-36
• 參考文獻(xiàn)36-37
• 結(jié)論37-38
• 綜述 miRNA的研究進(jìn)展及其與口腔頜面部鱗狀細(xì)胞癌的關(guān)系38-54
• 參考文獻(xiàn)46-54
• 致謝54-55
• 個人簡歷55

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6 楊振群,王賢O，

本文編號：319541