本文關(guān)鍵詞：實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)變形鏈球菌耐氟菌株及其親代菌株gInR、brpA基因的表達(dá)差異，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的： 齲病是目前普遍存在的口腔慢性感染性疾病之一，其主要致齲菌是變形鏈球菌。在變形鏈球菌諸多生理特性中，粘附性、產(chǎn)酸性、耐酸性這三個(gè)致齲特性發(fā)揮著至關(guān)重要的作用。氟化物可直接與變形鏈球菌的H+-ATP酶結(jié)合從而抑制其活性，降低細(xì)胞膜的質(zhì)子通透性，提高了細(xì)菌的耐酸性，因此臨床上氟化物作為一種防齲制劑被廣泛應(yīng)用。但隨著臨床局部應(yīng)用氟制劑頻率和濃度的增高，引起變形鏈球菌耐氟菌株的選擇性生長(zhǎng)，，從而使探究耐氟菌株的耐酸機(jī)理成為新的研究方向。與變形鏈球菌一樣，耐氟菌株的致齲性也是主要依靠粘附性、產(chǎn)酸性、耐酸性這三個(gè)特性。在變形鏈球菌中，glnR、brpA為轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子，研究表明：glnR基因的表達(dá)參與變形鏈球菌氮代謝的調(diào)節(jié)和酸度的調(diào)控；brpA基因的表達(dá)參與細(xì)菌的分裂和細(xì)菌生物膜的形成，進(jìn)而與細(xì)菌耐酸性的調(diào)控息息相關(guān)。本實(shí)驗(yàn)研究運(yùn)用分子生物學(xué)技術(shù)，通過(guò)對(duì)不同時(shí)間的變形鏈球菌耐氟菌株及其親代菌株glnR、brpA基因表達(dá)的實(shí)時(shí)熒光定量檢測(cè)，比較兩菌株的基因表達(dá)差異，探討兩菌株表達(dá)差異的原因，進(jìn)一步揭示變形鏈球菌及其耐氟菌株的耐酸機(jī)制，為以后預(yù)防和治療齲病提供新的理論指導(dǎo)。 方法： 1、變形鏈球菌耐氟菌株UA159的誘導(dǎo)及鑒定將變形鏈球菌接種于以50ug/ml NaF遞加直到1000ug/ml NaF的BHI的固體培養(yǎng)基中獲得耐氟菌株，對(duì)其進(jìn)行革蘭染色及16S rRNA鑒定。 2、變形鏈球菌及其耐氟菌株生長(zhǎng)曲線的測(cè)定將變形鏈球菌及其耐氟菌株分別接種于BHI液體培養(yǎng)基培養(yǎng)48h，每隔8h測(cè)定OD600值，繪制兩菌的生長(zhǎng)曲線。 3、變形鏈球菌及其耐氟菌株glnR、brpA基因的實(shí)時(shí)熒光定量檢測(cè)分別提取培養(yǎng)24h和48h的變形鏈球菌及其耐氟菌株的總RNA，用實(shí)時(shí)熒光定量PCR方法測(cè)定基因的表達(dá)，應(yīng)用spss17.0對(duì)結(jié)果進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。 結(jié)果： 1、在BHI固體培養(yǎng)基中變形鏈球菌UA159-FR生長(zhǎng)良好；革蘭染色鏡下觀察菌落形態(tài)為短鏈球狀，形態(tài)學(xué)符合變形鏈球菌的描述；應(yīng)用16S rRNA菌種鑒定技術(shù)分析UA159-FR屬于變形鏈球菌的可能性為99%。 2、48h的耐氟菌株及其親代菌株的glnR、brpA基因表達(dá)與24h的基因表達(dá)有差異，且48h兩基因的表達(dá)多于24h基因的表達(dá)。 3、24h的耐氟菌株及其親代菌株的glnR基因表達(dá)有明顯差異，且后者優(yōu)于前者；48h的耐氟菌株及其親代菌株的glnR基因表達(dá)有差異，且前者優(yōu)于后者。 4、24h的耐氟菌株及其親代菌株的brpA基因表達(dá)無(wú)差異；48h的耐氟菌株及其親代菌株的brpA基因表達(dá)有差異，且前者優(yōu)于后者。 結(jié)論： 1、體外誘導(dǎo)變形鏈球菌耐氟菌株UA159-FR成功構(gòu)建，形態(tài)學(xué)和基因方法鑒定其仍為變形鏈球菌。 2、24h為變形鏈球菌UA159及其耐氟菌株UA159-FR的指數(shù)期；48h為變形鏈球菌UA159及其耐氟菌株UA159-FR的穩(wěn)定期。 3、在兩菌的生長(zhǎng)穩(wěn)定期，耐氟菌株glnR和brpA基因的表達(dá)量高于變形鏈球菌glnR和brpA基因的表達(dá)量，表明glnR和brpA基因與耐氟菌株的耐酸性增強(qiáng)有關(guān)。
【關(guān)鍵詞】：glnR基因 brpA基因 變形鏈球菌 耐酸性 實(shí)時(shí)定量PCR
【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R780.2
【目錄】：

• 中文摘要5-7
• Abstract7-12
• 英文縮略詞表12-13
• 第1章 引言13-15
• 第2章 實(shí)驗(yàn)材料15-18
• 2.1 菌株15
• 2.2 試劑盒15
• 2.3 主要化學(xué)試劑及耗材15
• 2.4 主要儀器及設(shè)備15-16
• 2.5 常用溶液的配制16-18
• 2.5.1 BHI 培養(yǎng)基16
• 2.5.2 BHI 固體培養(yǎng)基（平板生長(zhǎng)用）16
• 2.5.3 TAE 電泳緩沖液（1X）16
• 2.5.4 Agarose 凝膠（2%）16-17
• 2.5.5 DEPC 水17
• 2.5.6 溶菌酶（20mg/ml）17
• 2.5.7 裂解液 RLT（1%）17
• 2.5.8 漂洗液 RW（含無(wú)水乙醇）17-18
• 第3章 實(shí)驗(yàn)方法18-21
• 3.1 變形鏈球菌耐氟菌株的體外誘導(dǎo)及鑒定18
• 3.2 繪制變形鏈球菌耐氟菌株及其親代菌株生長(zhǎng)曲線18
• 3.3 不同時(shí)間變形鏈球菌耐氟菌株及其親代菌株的培養(yǎng)18-19
• 3.4 Real-Time PCR 鑒定19-21
• 3.4.1 引物序列設(shè)計(jì)及檢測(cè)19
• 3.4.2 總 RNA 提取19-20
• 3.4.3 Real-Time PCR 分析20-21
• 第4章 結(jié)果21-33
• 4.1 變形鏈球菌耐氟菌株的成功構(gòu)建21-22
• 4.2 繪制變形鏈球菌 UA159 及其耐氟菌株的生長(zhǎng)曲線22-23
• 4.3 Real-Time PCR 結(jié)果23-33
• 4.3.1 引物序列的鑒定23
• 4.3.2 總 RNA 的提取23-24
• 4.3.3 擴(kuò)增曲線24-25
• 4.3.4 溶解曲線25-28
• 4.3.5 應(yīng)用得出數(shù)據(jù)和相對(duì)量計(jì)算28-33
• 第5章 討論33-37
• 第6章 結(jié)論37-38
• 參考文獻(xiàn)38-43
• 導(dǎo)師簡(jiǎn)介43-44
• 作者簡(jiǎn)介及在學(xué)期間所取得的科研成果44-45
• 致謝45

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前7條

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7 樊明文,邊專;防齲疫苗主動(dòng)免疫的現(xiàn)狀與未來(lái)[J];中華口腔醫(yī)學(xué)雜志;2002年06期

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本文編號(hào)：316383