發(fā)布時間：2017-04-17 09:03

  本文關鍵詞：流體剪切力對SD大鼠髁突與脛骨軟骨下骨成骨細胞作用的比較研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：[目的]比較研究流體剪切力作用下顳下頜關節(jié)髁突軟骨下骨、膝關節(jié)脛骨軟骨下骨來源成骨細胞的增殖與成骨能力。[方法]1、分別取SD大鼠乳鼠顳下頜關節(jié)髁突軟骨下骨組織、膝關節(jié)脛骨軟骨下骨組織進行成骨細胞的培養(yǎng),兩種不同來源成骨細胞均采用改良Ⅰ型膠原酶消化法進行原代培養(yǎng)、“差速貼壁法”進行純化及傳代培養(yǎng),并在倒置顯微鏡下連續(xù)觀察二者的生長狀況、形態(tài)學和生物學特性；2、通過HE染色、ALP染色和鈣結節(jié)茜素紅S染色,鑒定兩種不同來源的第四代成骨細胞；3、對鑒定后的第四代成骨細胞施加1h、12dynes/cm2的流體剪切力,之后進行細胞計數(shù)、CCK-8吸光度值及流式細胞周期的測定來比較兩種不同來源成骨細胞的增殖能力；4、加力結束后,通過Real time PCR測OPGmRNA表達量,比較兩種不同來源成骨細胞的成骨能力。[結果]1、兩種不同組織來源細胞培養(yǎng)形態(tài)無明顯差異,培養(yǎng)約24h后即可貼壁、伸展,貼壁時細胞體積均較小,呈星形、三角形及短梭形,胞核不明顯,隨著細胞生長分化,細胞表面有突觸并相互之間連結,彼此間融合后向多層生長。傳代生長至第四代時,細胞胞體增大,形態(tài)以多角形、長梭形為主,胞核明顯增大,同時細胞外基質分泌增多,并包裹細胞,逐漸形成細胞團塊,透光性降低,最終形成鈣化結節(jié),符合成骨細胞的生長特性；2、兩種不同組織來源細胞經(jīng)HE染色、ALP染色、鈣結節(jié)茜素紅S染色均呈現(xiàn)強陽性反應,鑒定全為成骨細胞；3、細胞計數(shù)顯示,加力后顳下頜關節(jié)來源的成骨細胞數(shù)量顯著低于膝關節(jié)來源的成骨細胞數(shù)量,差異有統(tǒng)計學意義(p0.05);CCK-8結果顯示,加力后顳下頜關節(jié)髁突軟骨下骨成骨細在接種后第1-2d數(shù)目較少,為細胞的潛伏期,第3-7d生長曲線基本為線性曲線,表明細胞進入快速增殖期,第8d達到峰值,此后增殖減慢,進入平臺期及衰減期。膝關節(jié)脛骨軟骨下骨成骨細胞在接種后第1d數(shù)目較少,為細胞的潛伏期,第2-7d生長曲線基本為線性曲線,表明細胞逐漸進入快速增殖期,第8d達到峰值,此后增殖逐漸減慢,進入平臺期及衰亡期；流式細胞增殖周期結果顯示,顳下頜關節(jié)來源的成骨細胞G0/G1期比例為58.662.85%,膝關節(jié)來源的成骨細胞G0/G1期比例為49.10±4.46%,差異有統(tǒng)計學意義(p0.05)；顳下頜關節(jié)來源的成骨細胞G2/S/M期比例為33.10±2.35%,膝關節(jié)來源的成骨細胞G2/S/M期比例為42.99±3.24%,差異有統(tǒng)計學意義(p0.05)；4、加力前同一時間,顳下頜關節(jié)髁突軟骨下骨成骨細胞OPGmRNA的表達量較膝關節(jié)脛骨軟骨下骨成骨細胞低,差異有統(tǒng)計學意義(p0.05)；加力后同一時間,顳下頜關節(jié)髁突軟骨下骨成骨細胞OPGmRNA的表達量較膝關節(jié)脛骨軟骨下骨成骨細胞低,差異有統(tǒng)計學意義(p0.05)；OPGmRNA表達量,無論是顳下頜關節(jié)髁突軟骨下骨成骨細胞還是膝關節(jié)脛骨軟骨下骨成骨細胞,加力后均比加力前增高,差異有統(tǒng)計學意義(p0.05)。[結論]1、來源于SD大鼠乳鼠顳下頜關節(jié)髁突軟骨下骨、膝關節(jié)脛骨軟骨下骨的原代細胞,經(jīng)體外傳代培養(yǎng)后均可得到均一性較好、具有典型成骨細胞形態(tài)特征的成骨細胞,經(jīng)鑒定均為成骨細胞；2、本實驗加力后細胞計數(shù)、CCK-8吸光度法及流式細胞周期結果顯示：顳下頜關節(jié)髁突軟骨下骨成骨細胞增殖能力低于膝關節(jié)脛骨軟骨下骨成骨細胞；3、本實驗加力前后OPGmRNA定量檢測結果提示,顳下頜關節(jié)髁突軟骨下骨成骨細胞OPGmRNA的表達較膝關節(jié)脛骨軟骨下骨成骨細胞弱；4、一定的流體剪切力可以促進顳下頜關節(jié)髁突軟骨下骨成骨細胞和膝關節(jié)脛骨軟骨下骨成骨細胞OPGmRNA的表達。
【關鍵詞】：流體剪切力 成骨細胞 髁突 脛骨 軟骨下骨
【學位授予單位】：昆明醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R782
【目錄】：

• 中英文縮略詞表5-6
• 中文摘要6-8
• Abstract8-11
• 引言11-14
• 第一部分 SD大鼠顳下頜關節(jié)髁突軟骨下骨及膝關節(jié)脛骨軟骨下骨成骨細胞的培養(yǎng)與鑒定14-28
• 1 材料15-16
• 2 方法16-18
• 3 兩種不同組織來源成骨細胞的生物學特性分析與鑒定18-24
• 4 討論24-27
• 5 結論27-28
• 第二部分 流體剪切力對SD大鼠髁突和脛骨軟骨下骨成骨細胞增殖及成骨能力的比較28-46
• 1 材料28-30
• 2 方法30-34
• 3 數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析34-35
• 4 實驗結果35-40
• 5 討論40-45
• 6 結論45-46
• 全文總結46-47
• 問題及展望47-48
• 參考文獻48-51
• 綜述51-62
• 參考文獻59-62
• 攻讀碩士期間發(fā)表的文章62-63
• 致謝63

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前5條

1 唐林;林珠;李永明;王華;;不同大小機械牽張力對成骨細胞增殖及堿性磷酸酶的影響[J];解放軍醫(yī)學雜志;2006年06期

2 唐林;邵s

本文編號：312859