本文關(guān)鍵詞：miRNA-146a調(diào)節(jié)P.g LPS刺激人牙周膜成纖維細(xì)胞成骨分化能力的初步研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:通過體外培養(yǎng)獲得人牙周膜成纖維細(xì)胞(Human periodontal ligament cells,HPDLCs),采用microRNA-146a(miR-146a)的模擬物轉(zhuǎn)染,并用牙齦卟啉單胞菌(Porphyromonas gingivalis,P.g)脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)對(duì)其進(jìn)行刺激,觀察炎性狀態(tài)下miRNA-146a對(duì)人牙周膜成纖維細(xì)胞(Human periodontal ligament cells,HPDLCs)成骨分化的影響,并探索其作用機(jī)制,從而為牙周炎的治療、牙槽骨的再生提供更廣闊的思路。方法:1.在天津醫(yī)科大學(xué)口腔醫(yī)院頜面外科選擇拔除的健康的雙尖牙的患者(年齡12-18歲),經(jīng)患者知情同意后,收集拔除的雙尖牙,PBS反復(fù)沖洗,刮取根中1/3牙周膜組織剪碎成1mm3小組織塊,采用I型膠原酶+組織塊法進(jìn)行HPDLCs的原代培養(yǎng),倒置相差顯微鏡下觀察其形態(tài)及生長(zhǎng)狀況。2.檢測(cè)P.g LPS對(duì)HPDLCs成骨分化能力的影響。設(shè)對(duì)照組、成骨誘導(dǎo)組和1μg/ml P.g LPS+成骨誘導(dǎo)組,7天堿性磷酸酶染色,14天后茜素紅染色及茜素紅半定量檢測(cè);3天、7天和14天后用Real-time PCR檢測(cè)成骨相關(guān)基因的表達(dá)。3.檢測(cè)miRNA-146a對(duì)HPDLCs成骨分化能力的影響。設(shè)miRNA-146a mimics轉(zhuǎn)染組、negative control組和對(duì)照組,用成骨誘導(dǎo)液進(jìn)行培養(yǎng),7天行堿性磷酸酶染色和Real-time PCR檢測(cè)成骨相關(guān)基因的表達(dá),14天茜素紅染色。4.檢測(cè)miRNA-146a與P.g LPS共同作用對(duì)HPDLCs成骨分化能力的影響。設(shè)miRNA-146a mimics+1μg/ml LPS組、negative control+1μg/ml LPS組、1μg/ml LPS組,用成骨誘導(dǎo)液進(jìn)行培養(yǎng),7天行堿性磷酸酶染和Real-time PCR檢測(cè)成骨相關(guān)基因的表達(dá),14天茜素紅染色。結(jié)果:1.倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞培養(yǎng)至第8-12天,少數(shù)長(zhǎng)梭形細(xì)胞從組織塊邊緣爬出,并圍繞組織塊呈放射狀排列,傳代后細(xì)胞生長(zhǎng)迅速。2.HPDLCs具有成骨分化的能力。3.P.g LPS刺激下HPDLCs成骨相關(guān)基因I型膠原蛋白(collagen 1,COL1)、Runt相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子(runt-related transcription factor 2,RUNX2)、堿性磷酸酶(alkaline phophatase,ALP)和骨鈣素(osteocalcin,OCN)的mRNA表達(dá)顯著降低且具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05),堿性磷酸酶染色及茜素紅染色較正常成骨誘導(dǎo)組明顯減弱。4.miRNA-146a轉(zhuǎn)染后,堿性磷酸酶及茜素紅染色較正常成骨誘導(dǎo)組明顯增強(qiáng),HPDLCs成骨相關(guān)基因COL1、RUNX2、、ALP和OCN mRNA的表達(dá)顯著升高(P0.05)。5.miRNA-146a和P.g LPS共同作用后,堿性磷酸酶染色及茜素紅染色較單純P.g LPS刺激組明顯增強(qiáng),且HPDLCs成骨相關(guān)基因COL1、RUNX2、、ALP和OCN mRNA的表達(dá)較單純P.g LPS刺激顯著升高,且具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)。結(jié)論:1.P.g LPS抑制HPDLCs成骨分化的能力。2.2.miRNA-146a轉(zhuǎn)染后HPDLCs成骨相關(guān)基因的表達(dá)顯著升高,促進(jìn)HPDLCs的成骨分化能力。3.miRNA-146a負(fù)調(diào)節(jié)P.g LPS對(duì)HPDLCs成骨分化的抑制作用,從而在一定程度上證實(shí)在炎癥狀態(tài)下,miRNA-146a的過表達(dá)可以有利于牙周組織的修復(fù)。
【關(guān)鍵詞】：牙齦卟啉單胞菌 脂多糖 牙周炎 人牙周膜成纖維細(xì)胞 microRNA-146a
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R781.4
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-10
• 縮略語(yǔ)/符號(hào)說明10-11
• 前言11-14
• 研究現(xiàn)狀、成果11-12
• 研究目的、方法12-14
• 一、牙齦卟啉單胞菌脂多糖對(duì)HPDLCs成骨分化能力的影響14-27
• 1.1 對(duì)象和方法14-19
• 1.1.1 主要設(shè)備與儀器14-15
• 1.1.2 主要試劑15
• 1.1.3 主要試劑配制15
• 1.1.4 方法15-19
• 1.2 結(jié)果19-24
• 1.2.1 HPDLCs的原代培養(yǎng)19
• 1.2.2 HPDLCs的增殖能力19-20
• 1.2.3 P.g LPS刺激后堿性磷酸酶染色的結(jié)果20
• 1.2.4 P.g LPS刺激后茜素紅染色和茜素紅半定量檢測(cè)的結(jié)果20-21
• 1.2.5 P.g LPS刺激后real-time PCR檢測(cè)成骨相關(guān)基因的表達(dá)：21-24
• 1.3 討論24-26
• 1.4 小結(jié)26-27
• 二 miRNA-146a對(duì)人牙周膜韌帶細(xì)胞成骨分化能力的影響27-35
• 2.1 對(duì)象和方法27-28
• 2.1.1 主要設(shè)備與儀器27
• 2.1.2 主要試劑27
• 2.1.3 分組27
• 2.1.4 miRNA轉(zhuǎn)染27-28
• 2.1.5 MTT法檢測(cè)microRNA-146a轉(zhuǎn)染后HPDLSCs的增殖能力28
• 2.1.6 堿性磷酸酶染色28
• 2.1.7 茜素紅染色及茜素紅半定量檢測(cè)的結(jié)果28
• 2.1.8 Real-time PCR檢測(cè)成骨相關(guān)基因的mRNA表達(dá)28
• 2.2 結(jié)果28-32
• 2.2.1 miRNA-146a對(duì)HPDLCs增殖能力的影響28-29
• 2.2.2 堿性磷酸酶染色和茜素紅染色已經(jīng)茜素紅半定量檢測(cè)29-31
• 2.2.3 miRNA-146a轉(zhuǎn)染后real-time PCR檢測(cè)成骨相關(guān)基因的表達(dá)水平31-32
• 2.3 討論32-34
• 2.4 小結(jié)34-35
• 三、miRNA-146a對(duì)P.g LPS刺激人牙周膜韌帶細(xì)胞成骨分化能力的影響35-43
• 3.1 對(duì)象和方法35-36
• 3.1.1 主要設(shè)備與儀器35
• 3.1.2 主要試劑35
• 3.1.3 分組35
• 3.1.4 microRNA轉(zhuǎn)染35
• 3.1.5 MTT法檢測(cè)miRNA-146a和P.g LPS共同作用后HPDLSCs的增殖能力35
• 3.1.6 堿性磷酸酶和茜素紅染色35
• 3.1.7 Real-time PCR檢測(cè)成骨相關(guān)基因的mRNA表達(dá)35-36
• 3.2 結(jié)果36-41
• 3.2.1 miRNA-146a和P.g LPS對(duì)HPDLCs增殖能力的影響36
• 3.2.2 堿性磷酸酶和茜素紅染色36-38
• 3.2.3 real-time PCR檢測(cè)miRNA-146a和P.g LPS共同作用后成骨相關(guān)基因的表達(dá)水平38-41
• 3.3 討論41-42
• 3.4 小結(jié)42-43
• 結(jié)論43-44
• 參考文獻(xiàn)44-48
• 發(fā)表論文和參加科研情況48-49
• 綜述 Micro RNA調(diào)節(jié)干細(xì)胞成骨及成軟骨分化的研究進(jìn)展49-59
• 綜述參考文獻(xiàn)55-59
• 致謝59

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前2條

1 王祥;張斌;關(guān)呈超;姜竹玲;姜瑛;;提高人牙周膜成纖維細(xì)胞體外培養(yǎng)成功率的方法總結(jié)[J];現(xiàn)代口腔醫(yī)學(xué)雜志;2011年06期

2 黃美香;閆福華;姚麗艷;李大蘭;鄭瑜謙;李艷芬;林敏魁;;環(huán)孢素A聯(lián)合脂多糖對(duì)牙周膜成纖維細(xì)胞增殖的影響[J];中華口腔醫(yī)學(xué)研究雜志(電子版);2011年05期

  本文關(guān)鍵詞：miRNA-146a調(diào)節(jié)P.g LPS刺激人牙周膜成纖維細(xì)胞成骨分化能力的初步研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：303278