目的：（1）探討C反應(yīng)蛋白（C reactive protein, CRP）基因（+1059G>C rs1800947,+1444C>Trs1130864）的基因多態(tài)性、單倍型與慢性牙周炎（chronic periodontitis,CP）、冠心�。╟oronary heartdisease, CHD）、慢性牙周炎伴冠心�。–P+CHD）易感性的關(guān)系；（2）探討慢性牙周炎與冠狀動(dòng)脈粥樣硬化性心臟�。ㄒ韵潞�(jiǎn)稱冠心病）發(fā)病的相關(guān)性機(jī)制。方法：（1）中重度CP患者100例、CHD患者98例、中重度CP伴CHD患者92例與125例健康對(duì)照者（CONTROL）的煩黏膜拭子,提取DNA,采用聚合酶鏈反應(yīng)-限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性法對(duì)+1059G>Crs 1800947,+1444C>Trs1130864位點(diǎn)的基因分型,及對(duì)CP伴CHD組和健康對(duì)照組測(cè)序檢測(cè)2個(gè)多態(tài)性位點(diǎn)單倍型；（2）對(duì)合并組患者隨機(jī)抽取38例收集冠狀動(dòng)脈粥樣硬化斑塊和齦下菌斑,采用Chelex-100法提取細(xì)菌DNA,以實(shí)時(shí)熒光定量檢測(cè)（RTQ-PCR）法檢測(cè)冠狀動(dòng)脈粥樣硬化斑塊和齦下菌斑中具核梭桿菌（Fn）、... 

【文章來(lái)源】：新疆醫(yī)科大學(xué)新疆維吾爾自治區(qū)

【文章頁(yè)數(shù)】：63 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

+10596>Crs1800947擴(kuò)增產(chǎn)物GG型

對(duì)照組與cP伴cHD組單倍型檢測(cè)所用PcR產(chǎn)物分析，PCR產(chǎn)物 780bp基因組DNA抽提產(chǎn)物經(jīng)質(zhì)量分?jǐn)?shù)1%瓊脂糖凝膠電泳分析證實(shí)，產(chǎn)物基本完整，無(wú)斷裂，純度較高。見(jiàn)圖3。產(chǎn)物測(cè)序結(jié)果見(jiàn)圖4，圖5。1.3四組基因多態(tài)性比較由于 rs1800947的CC基因型純合子和 rs1800947的TT基因型的純合子檢出較少，故在統(tǒng)計(jì)分析時(shí)分別將CC基因型與GC基因型合并后再與GG基因型比較，CT基因型與TT基因型合并后與再CC基因型比較。并且分別比較 rsl800947位點(diǎn)的G基因型與C基因型在對(duì)照組與其余各組差異， rs1130864位點(diǎn)C基因型和T基因型在對(duì)照組與其余各組的差異。比較分析結(jié)果::51800947和rSll30864基因多態(tài)性位點(diǎn)在4組統(tǒng)計(jì)學(xué)均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義， rsl130864多態(tài)性位點(diǎn)在CP伴CHD組與健康對(duì)照組間比較P值最小 (0.086，0.065)是否提示差異有擴(kuò)大趨勢(shì)值得進(jìn)一步研究。表4:健康對(duì)照組與合并組基因多態(tài)性比較 :rs1800947的CC+GC基因型與GG基[Xl型比較，z’=0.959，作0.320

2.2熒光定量PCR檢測(cè)具核梭桿菌(FN)福塞斯坦納菌(TF)及內(nèi)參基因標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)引物濃度、退火溫度、延伸步驟等進(jìn)行優(yōu)化，確定最佳的實(shí)時(shí)熒光定量PCR的反應(yīng)體系(25閃)為:SYBRGreenl熒光染料混合物12.5川，上游及下游引物各0.5州，重組質(zhì)粒DNAZ州，無(wú)菌去離子水9.5閃。反應(yīng)條件為:95℃2分鐘，95℃10秒鐘，60℃40秒鐘，進(jìn)行40個(gè)循環(huán)。標(biāo)準(zhǔn)品可以得到較好的擴(kuò)增曲線、標(biāo)準(zhǔn)曲線和融解曲線，標(biāo)準(zhǔn)曲線顯示線性關(guān)系良好(內(nèi)參基因總菌165v3區(qū)相關(guān)系數(shù)對(duì)二0.997，目的基因FN相關(guān)系數(shù)擴(kuò)一0.997，目的基因TF相關(guān)系數(shù)對(duì)一0.995)，可以在寬廣的范圍內(nèi)進(jìn)行準(zhǔn)確定量;擴(kuò)增效率較好(內(nèi)參基因總菌165V3區(qū):E二101%，目的基因FN:E一101%，目的基因TF:E=95%)，目的基因融解曲線峰形單一，說(shuō)明反應(yīng)特異性好。總菌165通用引物357F、518R擴(kuò)出的基因熔解曲線較亂，而且有少量標(biāo)本有雙峰，這是因?yàn)闃悠分杏懈鞣N不同菌，不同菌的165V3區(qū)基因序列有差別，造成總菌357F、518R

【參考文獻(xiàn)】：
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