[目的]檢測(cè)難治性根尖周炎根尖生物膜內(nèi)的糞腸球菌,分析糞腸球菌的檢出率與臨床表現(xiàn)的關(guān)系。觀(guān)察糞腸球菌單菌種生物膜的動(dòng)態(tài)形成過(guò)程,研究生物膜形成過(guò)程中群體感應(yīng)相關(guān)基因的表達(dá)情況,探討其與生物膜形成的相關(guān)性。探究光動(dòng)力療法和二極管激光對(duì)體外培養(yǎng)的糞腸球菌生物膜的殺菌作用,并分析激光治療的可行性。[方法]1.按納入標(biāo)準(zhǔn)收集需要進(jìn)行根尖外科手術(shù)的單根管患牙42顆,記錄癥狀和體征,采集根尖生物膜樣本,各樣本均采用生化鑒定和聚合酶鏈反應(yīng)（polymerase chain reaction,PCR）兩種方法檢測(cè)糞腸球菌。統(tǒng)計(jì)學(xué)分析兩種方法對(duì)糞腸球菌的檢出率差異及其與患者癥狀體征之間的關(guān)系。2.糞腸球菌在蓋玻片上培養(yǎng)形成6、12、24、48h單菌種生物膜模型,采用熒光技術(shù)標(biāo)記活細(xì)菌和死細(xì)菌,激光共聚焦顯微鏡觀(guān)察生物膜結(jié)構(gòu)及細(xì)菌的分布；結(jié)晶紫染色酶標(biāo)儀觀(guān)測(cè)各時(shí)期形成生物膜的量。3.提取6、12、24、48h糞腸球菌生物膜細(xì)菌樣本,通過(guò)Real-time QuantitativePCR（RT-qPCR）對(duì)糞腸球菌生物膜形成過(guò)程中群體感應(yīng)相關(guān)基因fsrB、gelE和sprE的表達(dá)進(jìn)行檢測(cè)。4.建立體外培養(yǎng)2... 

【文章來(lái)源】：濱州醫(yī)學(xué)院山東省

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【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

糞腸球菌菌落形態(tài)

明、表面光滑、邊緣完整、中央突起的直徑0.5?1mm大小的圓形菌落（見(jiàn)圖IX在BHI培養(yǎng)基上挑取的可疑菌落進(jìn)行涂片革蘭氏染色（見(jiàn)圖2),光學(xué)顯微鏡下觀(guān)察。類(lèi)腸球菌為球形或卵圓形，大多數(shù)成對(duì)或呈鏈狀排列的革蘭陽(yáng)性球菌，無(wú)芽胞，無(wú)鞭毛，通常不運(yùn)動(dòng)，直徑0.5?1.0 um。2.1.2微量生化鑒定管糞腸球菌的生化特征：接觸酶陰性，能在6.5%的NaCl肉湯、40%膽汁肉湯以及0.1%美蘭牛乳中生長(zhǎng)，并能在ICrC或45°CpH值9.6肉湯培養(yǎng)基中生長(zhǎng)，可耐65°C 30分鐘，發(fā)酵乳糖、山梨醇和甘露醇，可利用精氨酸，不發(fā)酵阿拉伯糖(圖 3—7)。2.1.3 PCR檢測(cè)結(jié)果相對(duì)于陽(yáng)性對(duì)照組，在1082bp出現(xiàn)特異性條帶為陽(yáng)性

圖7精氨酸雙水膽 M:DMA 5?、子示準(zhǔn)5 1:1?性對(duì)10-陰性對(duì)照組；2.4.6.7.8:襄腸球菌檢出陽(yáng)性；3.5.9：糞腸球菌檢出陰性。圖8難治性根尖周炎根尖生物膜糞腸球菌PCR擴(kuò)增產(chǎn)物的電泳結(jié)果2.1.4生化鑒定與PCR檢測(cè)結(jié)果比較檢測(cè)發(fā)現(xiàn)42例難治性根尖周炎根尖生物膜樣本類(lèi)腸球菌通過(guò)生化鑒定方法檢出22例，采用PCR技術(shù)糞腸球菌檢出30例，生化鑒定和PCR技術(shù)檢出率分別為52.4%和71.4% (見(jiàn)表1)，X2檢驗(yàn)統(tǒng)計(jì)分析比較兩種檢測(cè)方法在類(lèi)腸球菌檢出率差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(x2=4.08, /'<0.05), PCR的檢出率更高。15


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