[目的]檢測難治性根尖周炎根尖生物膜內(nèi)的糞腸球菌,分析糞腸球菌的檢出率與臨床表現(xiàn)的關系。觀察糞腸球菌單菌種生物膜的動態(tài)形成過程,研究生物膜形成過程中群體感應相關基因的表達情況,探討其與生物膜形成的相關性。探究光動力療法和二極管激光對體外培養(yǎng)的糞腸球菌生物膜的殺菌作用,并分析激光治療的可行性。[方法]1.按納入標準收集需要進行根尖外科手術的單根管患牙42顆,記錄癥狀和體征,采集根尖生物膜樣本,各樣本均采用生化鑒定和聚合酶鏈反應（polymerase chain reaction,PCR）兩種方法檢測糞腸球菌。統(tǒng)計學分析兩種方法對糞腸球菌的檢出率差異及其與患者癥狀體征之間的關系。2.糞腸球菌在蓋玻片上培養(yǎng)形成6、12、24、48h單菌種生物膜模型,采用熒光技術標記活細菌和死細菌,激光共聚焦顯微鏡觀察生物膜結構及細菌的分布；結晶紫染色酶標儀觀測各時期形成生物膜的量。3.提取6、12、24、48h糞腸球菌生物膜細菌樣本,通過Real-time QuantitativePCR（RT-qPCR）對糞腸球菌生物膜形成過程中群體感應相關基因fsrB、gelE和sprE的表達進行檢測。4.建立體外培養(yǎng)2... 

【文章來源】：濱州醫(yī)學院山東省

【文章頁數(shù)】：46 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

糞腸球菌菌落形態(tài)

明、表面光滑、邊緣完整、中央突起的直徑0.5?1mm大小的圓形菌落（見圖IX在BHI培養(yǎng)基上挑取的可疑菌落進行涂片革蘭氏染色（見圖2),光學顯微鏡下觀察。類腸球菌為球形或卵圓形，大多數(shù)成對或呈鏈狀排列的革蘭陽性球菌，無芽胞，無鞭毛，通常不運動，直徑0.5?1.0 um。2.1.2微量生化鑒定管糞腸球菌的生化特征：接觸酶陰性，能在6.5%的NaCl肉湯、40%膽汁肉湯以及0.1%美蘭牛乳中生長，并能在ICrC或45°CpH值9.6肉湯培養(yǎng)基中生長，可耐65°C 30分鐘，發(fā)酵乳糖、山梨醇和甘露醇，可利用精氨酸，不發(fā)酵阿拉伯糖(圖 3—7)。2.1.3 PCR檢測結果相對于陽性對照組，在1082bp出現(xiàn)特異性條帶為陽性

圖7精氨酸雙水膽 M:DMA 5?、子示準5 1:1?性對10-陰性對照組；2.4.6.7.8:襄腸球菌檢出陽性；3.5.9：糞腸球菌檢出陰性。圖8難治性根尖周炎根尖生物膜糞腸球菌PCR擴增產(chǎn)物的電泳結果2.1.4生化鑒定與PCR檢測結果比較檢測發(fā)現(xiàn)42例難治性根尖周炎根尖生物膜樣本類腸球菌通過生化鑒定方法檢出22例，采用PCR技術糞腸球菌檢出30例，生化鑒定和PCR技術檢出率分別為52.4%和71.4% (見表1)，X2檢驗統(tǒng)計分析比較兩種檢測方法在類腸球菌檢出率差異具有統(tǒng)計學意義(x2=4.08, /'<0.05), PCR的檢出率更高。15


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