發(fā)布時(shí)間：2021-01-02 21:48

　　目的研究Fas基因轉(zhuǎn)染對(duì)舌鱗癌Tca8113細(xì)胞的體外抑制作用,構(gòu)建Fas基因真核表達(dá)質(zhì)粒pBK-Fas并將其轉(zhuǎn)導(dǎo)入舌鱗癌Tca8113細(xì)胞,為舌鱗癌的Fas基因治療提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。方法采用RT-PCR反轉(zhuǎn)錄成cDNA擴(kuò)增Fas基因全長(zhǎng),亞克隆到真核表達(dá)載體pBK-CMV內(nèi),構(gòu)建出重組真核表達(dá)質(zhì)粒pBK-Fas,酶切鑒定并測(cè)序。脂質(zhì)體法將pBK-Fas轉(zhuǎn)染入Tca8113細(xì)胞,RT-PCR檢測(cè)FasmRNA表達(dá)及半定量分析,瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)Fas轉(zhuǎn)染細(xì)胞凋亡,流式細(xì)胞儀檢測(cè)Fas蛋白表達(dá)。通過(guò)細(xì)胞生長(zhǎng)曲線描記和軟瓊脂集落形成實(shí)驗(yàn)研究Fas基因的體外抑瘤效應(yīng)。結(jié)果PCR擴(kuò)增后的產(chǎn)物在約1008bp處出現(xiàn)明顯的特異性條帶,重組質(zhì)粒pBK-Fas經(jīng)酶切和測(cè)序鑒定,表明均含有大小正確的Fas基因片段。經(jīng)檢測(cè)Fas基因轉(zhuǎn)染能提高FasmRNA表達(dá)水平、Fas蛋白表達(dá)強(qiáng)度,以及細(xì)胞凋亡指數(shù)。Fas基因轉(zhuǎn)染能提高Fas蛋白的表達(dá)強(qiáng)度,由轉(zhuǎn)染前的34.01±4.76上升到轉(zhuǎn)染后的55.72±7.33,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）。Fas轉(zhuǎn)染細(xì)胞株在Fas抗體作用下能夠有效啟動(dòng)Fas介導(dǎo)的細(xì)胞... 

【文章來(lái)源】：安徽醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào). 2009年04期 北大核心

【文章頁(yè)數(shù)】：6 頁(yè)

【部分圖文】：

PCR產(chǎn)物電泳圖

癌細(xì)胞Tca8113均有Fas表達(dá)。轉(zhuǎn)染前和空質(zhì)粒對(duì)照組的FasmRNA表達(dá)水平較低,轉(zhuǎn)染后表達(dá)明顯升高,見(jiàn)圖2。檢測(cè)12組未轉(zhuǎn)染和重組質(zhì)粒PBK-Fas轉(zhuǎn)染組及空質(zhì)粒對(duì)照組細(xì)胞RT-PCR電泳圖譜的灰度值,未轉(zhuǎn)染組、空質(zhì)粒對(duì)照組及轉(zhuǎn)重組質(zhì)粒PBK-Fas轉(zhuǎn)染組的Fas表達(dá)量(Fas、p-actin條帶灰度值比值)分別為0·286±0·003、0·291±0·004和·439·安徽醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)　Acta UniversitatisMedicinalisAnhui　2009 Aug;44(4)

2.5.1　細(xì)胞生長(zhǎng)曲線的描記　轉(zhuǎn)染組Tca8113細(xì)胞與未轉(zhuǎn)染組細(xì)胞接種培養(yǎng)后通過(guò)直接記數(shù)法描計(jì)Fas轉(zhuǎn)染前后細(xì)胞的生長(zhǎng)曲線如圖4所示。未轉(zhuǎn)染的Tca8113細(xì)胞群體倍增時(shí)間為0·8 d,對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期在3~7 d。而轉(zhuǎn)染的Tca8113細(xì)胞群體倍增時(shí)間為2 d,對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期在4~8 d,最大細(xì)胞數(shù)為2·6×105,明顯低于非轉(zhuǎn)染組細(xì)胞,說(shuō)明Tca8113細(xì)胞的生長(zhǎng)速率低于對(duì)照組未轉(zhuǎn)染Tca8113細(xì)胞。表1　轉(zhuǎn)染前后Fas蛋白質(zhì)表達(dá)的流式細(xì)胞檢測(cè)(n=12,-x±s)組　別Fas蛋白陽(yáng)性率(% ) Fas蛋白陽(yáng)性強(qiáng)度空質(zhì)粒對(duì)照90. 87±5. 76 34. 05±5. 26未轉(zhuǎn)染組Tca8113 92. 02±5. 47 34. 01±4. 76PBK-Fas轉(zhuǎn)染組Tca8113 95. 08±7. 86 55. 72±7. 33圖4　轉(zhuǎn)染前后Tca8113細(xì)胞生長(zhǎng)曲線2.5.2　MTT法檢測(cè)細(xì)胞增殖抑制率　在MTT法定量檢測(cè)中,對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的未轉(zhuǎn)染和轉(zhuǎn)染Tca8l13細(xì)胞48 h經(jīng)檢測(cè)與對(duì)照組相比具有不同程度的差異性

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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