目的:1、建立人牙周膜干細(xì)胞（hPDLSCs）重物靜壓力加載模型,探討hPDLSCs體外培養(yǎng)的方法及力學(xué)加載方式;2、通過檢測hPDLSCs受壓后成骨相關(guān)標(biāo)志物ALP、RUNX2和OCN表達(dá)的變化,探索靜壓力對hPDLSCs成骨分化的影響,進(jìn)一步加深對正畸牙周組織改建內(nèi)在機(jī)制的認(rèn)識。方法:1、采用組織塊培養(yǎng)法培養(yǎng)原代人牙周膜細(xì)胞（hPDLCs）,通過有限稀釋法分離提純hPDLSCs,為后續(xù)實(shí)驗(yàn)提供實(shí)驗(yàn)細(xì)胞。2、通過形態(tài)學(xué)觀察、細(xì)胞克隆形成實(shí)驗(yàn)、流式細(xì)胞術(shù)細(xì)胞表型鑒定、流式細(xì)胞術(shù)細(xì)胞周期分析、免疫熒光染色、成骨誘導(dǎo)實(shí)驗(yàn)和成脂誘導(dǎo)實(shí)驗(yàn)等方式對細(xì)胞來源進(jìn)行鑒定。3、采用不同的靜壓力（1、2、3g/cm^#）對培養(yǎng)的hPDLSCs作用不同的時(shí)間（12、24、72h）,并設(shè)立各力值各時(shí)間點(diǎn)的空白對照組,分別采用RT-qPCR法和Western blot檢測ALP、RUNX2和OCN的mRNA和蛋白表達(dá)情況。結(jié)果:1、體外成功培養(yǎng)hPDLCs,并成功分離提純hPDLSCs,取4-6代性狀穩(wěn)定的hPDLSCs用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。2、細(xì)胞克隆形成實(shí)驗(yàn)表明所培養(yǎng)的細(xì)胞具有較高的克隆形成率（... 

【文章來源】：廣西醫(yī)科大學(xué)廣西壯族自治區(qū)

【文章頁數(shù)】：82 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

牙周膜細(xì)胞和牙周膜干細(xì)胞的培養(yǎng)

圖 1-2 第 3 代 hPDLSCs 生長曲線圖Fig1-2 The growth curve of the 3 passage hPDLSC能力的檢測胞連續(xù)培養(yǎng) 10d 后，倒置顯微鏡下觀旋渦狀分布。14d 后細(xì)胞克隆團(tuán)逐漸增晶紫染色后細(xì)胞克隆團(tuán)形成肉眼可見的數(shù)細(xì)胞數(shù)大于 50 的克隆細(xì)胞團(tuán)數(shù)，率為 18%。1 2 3 5 70.00.5time(d)Opti

24C CD34 表達(dá)率圖 1-4 hPDLSCs 流式細(xì)胞術(shù)鑒定4 The identification of hPDLSCs by flow cy熒光染色察可見，經(jīng)波形絲蛋白染色后，光，表明 hPDLSCs 呈抗波形絲DLSCs 細(xì)胞核呈藍(lán)色熒光，而胞白陰性（圖 1-5 B）。提示實(shí)驗(yàn)所無外胚層來源的污染。

【參考文獻(xiàn)】：
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本文編號：2942841