本文關(guān)鍵詞：正畸牙齒移動(dòng)過(guò)程中牙周膜成纖維細(xì)胞自噬作用的初步研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：自噬（Autophagy，來(lái)自于希臘語(yǔ)：auto "self"和phagein "to eat"即“自己吃自己”）是細(xì)胞內(nèi)一種基本的分解、死亡機(jī)制。在這一過(guò)程中，細(xì)胞內(nèi)多余的或者功能失調(diào)的成分通過(guò)溶酶體被降解[1]。自噬是調(diào)節(jié)細(xì)胞新陳代謝、維持細(xì)胞生存的重要機(jī)制[2]；而在腫瘤、感染性疾病等病理?xiàng)l件下，自噬功能則表現(xiàn)出了兩方面的作用，一方面它是一種適應(yīng)性反應(yīng)，為腫瘤細(xì)胞的生存提供必需的基礎(chǔ)能量，，促進(jìn)疾病的發(fā)展；另一方面自噬的發(fā)生可以誘導(dǎo)病變細(xì)胞發(fā)生程序性死亡，起到阻礙疾病進(jìn)程的作用[3]。之前的研究結(jié)果顯示，諸如內(nèi)質(zhì)網(wǎng)受壓、免疫細(xì)胞被激活、氧化應(yīng)激、感染等許多內(nèi)源性和外源性因素，均可以誘發(fā)細(xì)胞自噬水平的變化[2]。 牙周組織的改建、完成及最后的穩(wěn)定，是正畸治療過(guò)程中牙齒移動(dòng)和治療結(jié)束后長(zhǎng)期保持的基礎(chǔ)。而在整個(gè)治療過(guò)程中，牙周膜連接牙齒和牙槽骨，在牙周組織的改建過(guò)程中起到中間橋梁作用[4]。牙周膜成纖維細(xì)胞是牙周膜中主要的細(xì)胞成分，當(dāng)正畸矯治力傳遞到牙周膜上時(shí)，這些細(xì)胞能夠合成分泌多種細(xì)胞因子，參與包括牙周膜自身、牙槽骨、牙骨質(zhì)等牙周組織的改建[5]。很多研究者認(rèn)為當(dāng)正畸矯治力施加到牙齒上后，壓力側(cè)的牙周膜出現(xiàn)壓縮、寬度變窄的情況，導(dǎo)致其中的毛細(xì)血管也隨之受到壓迫，出現(xiàn)管腔變窄甚至閉塞的現(xiàn)象，這就會(huì)導(dǎo)致壓力側(cè)牙周膜微循環(huán)受阻、局部牙周膜血供減少[6]。局部牙周膜組織中血供的減少，會(huì)直接使牙周膜成纖維細(xì)胞處于一個(gè)低氧、營(yíng)養(yǎng)缺乏的環(huán)境，在這種環(huán)境下，牙周膜成纖維細(xì)胞處于一種饑餓的環(huán)境[7]。那么，這種饑餓環(huán)境是否會(huì)誘導(dǎo)牙周膜細(xì)胞自噬作用加強(qiáng)，造成細(xì)胞數(shù)量減少呢？這個(gè)問(wèn)題與牙周組織的正畸改建、以及牙根吸收等問(wèn)題的產(chǎn)生機(jī)制直接相關(guān)。本研究通過(guò)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)觀察了正畸牙齒移動(dòng)過(guò)程中牙周膜寬度、毛細(xì)血管、細(xì)胞數(shù)量的變化，并進(jìn)一步通過(guò)體外實(shí)驗(yàn)研究了饑餓環(huán)境下人牙周膜成纖維細(xì)胞自噬水平的變化，對(duì)這個(gè)問(wèn)題進(jìn)行了初步的研究。本課題的實(shí)驗(yàn)研究?jī)?nèi)容包括下面兩個(gè)方面： 1.牙齒移動(dòng)過(guò)程中牙周組織組織形態(tài)學(xué)變化的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究 目的：通過(guò)建立SD大鼠正畸牙齒移動(dòng)模型，分析牙齒移動(dòng)過(guò)程中，牙周組織組織形態(tài)學(xué)的變化，研究牙周膜細(xì)胞所處的環(huán)境狀況。 方法：將SD大鼠隨機(jī)分為空白對(duì)照組、正畸加力1天組、正畸加力3天組、正畸加力7天組�？瞻讓�(duì)照組SD大鼠口內(nèi)不放置任何加力裝置；正畸加力各組中，建立SD大鼠上頜右側(cè)第一磨牙的正畸牙齒移動(dòng)模型，用螺旋鎳鈦拉簧加力30g，牽引SD大鼠上頜右側(cè)第一磨牙向近中移動(dòng)，分別加力1天、3天、7天；按實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)的加力時(shí)間，取材，制備HE切片，鏡下觀察牙周組織組織形態(tài)學(xué)的變化。 結(jié)果：大鼠正畸牙齒移動(dòng)過(guò)程中，①牙周膜寬度變化結(jié)果顯示：空白對(duì)照組近遠(yuǎn)中牙周膜寬度比值為1.012±0.124；正畸加力1天、3天、7天組中，遠(yuǎn)中牙周膜寬度/近中牙周膜寬度的比值隨著加力時(shí)間的延長(zhǎng)逐漸增大，且均明顯高于對(duì)照組（P＜0.05），在正畸加力7天組中，遠(yuǎn)中張力側(cè)與近中壓力側(cè)的牙周膜寬度差可達(dá)3倍以上（遠(yuǎn)近中牙周膜寬度比值3.342±0.246）；②壓力側(cè)牙周膜內(nèi)毛細(xì)血管變化結(jié)果顯示：空白對(duì)照組近中側(cè)牙周膜內(nèi)毛細(xì)血管數(shù)目較多，管腔呈圓形或卵圓形，隨著加力時(shí)間的延長(zhǎng)，正畸加力1天、3天組壓力側(cè)牙周膜內(nèi)毛細(xì)血管數(shù)目減少，管腔被壓縮，而正畸加力7天組壓力側(cè)牙周膜內(nèi)毛細(xì)血管數(shù)目增多，管腔增寬；③壓力側(cè)牙周膜內(nèi)細(xì)胞數(shù)目變化結(jié)果顯示：正畸加力1天、3天組開始近中壓力側(cè)牙周膜內(nèi)細(xì)胞數(shù)目相對(duì)于空白對(duì)照組明顯減少（P＜0.05），且隨著加力時(shí)間的延長(zhǎng)，這種減少的趨勢(shì)變得越來(lái)越明顯。而在正畸加力7天組則出現(xiàn)牙周膜內(nèi)細(xì)胞數(shù)目相對(duì)于空白對(duì)照組明顯增多的情況（P＜0.05）。 結(jié)論：在正畸矯治力的作用下，壓力側(cè)牙周膜內(nèi)血管數(shù)目減少，管徑減小，可使局部的牙周膜細(xì)胞處于一種缺氧、營(yíng)養(yǎng)缺乏的環(huán)境，進(jìn)而出現(xiàn)細(xì)胞數(shù)減少、消亡的情況。 2.饑餓誘導(dǎo)環(huán)境下人牙周膜成纖維細(xì)胞自噬作用發(fā)生情況的實(shí)驗(yàn)研究 目的：初步研究饑餓誘導(dǎo)環(huán)境下人牙周膜成纖維細(xì)胞自噬作用的發(fā)生情況。 方法：取體外原代培養(yǎng)的人牙周膜成纖維細(xì)胞進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，將細(xì)胞按隨機(jī)原則分為正常對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組。正常對(duì)照組細(xì)胞用含10%胎牛血清的DMEM培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)；實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞用饑餓誘導(dǎo)方法，分別用厄爾氏平衡鹽溶液（Earle，s Balanced SaltSolution，EBSS）培養(yǎng)1h、2h、3h、4h、6h；應(yīng)用透射電子顯微鏡觀察各組間人牙周膜成纖維細(xì)胞中自噬體數(shù)目的變化，采用細(xì)胞免疫熒光染色和Western blot方法檢測(cè)人牙周膜成纖維細(xì)胞中自噬相關(guān)蛋白LC3的表達(dá)。 結(jié)果：饑餓誘導(dǎo)人牙周膜成纖維細(xì)胞后，①透射電鏡觀察結(jié)果顯示： EBSS饑餓誘導(dǎo)組人牙周膜成纖維細(xì)胞胞漿中自噬體數(shù)目增多，其中2h、3h、4h最多；②免疫熒光染色法定性分析結(jié)果顯示，對(duì)照組LC3蛋白表達(dá)呈陰性，EBSS饑餓誘導(dǎo)各組人牙周膜成纖維細(xì)胞胞漿LC3蛋白表達(dá)呈陽(yáng)性，其中1h、6h組呈弱陽(yáng)性表達(dá)，2h、3h、4h組呈強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)；③Western blot定量分析結(jié)果顯示：與對(duì)照組比較EBSS饑餓誘導(dǎo)各組LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值增大（P＜0.05），EBSS饑餓誘導(dǎo)1h后LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值開始升高，4h組LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值到達(dá)頂峰，6h組LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值開始下降。 結(jié)論：饑餓誘導(dǎo)環(huán)境下可誘導(dǎo)人牙周膜成纖維細(xì)胞自噬水平升高。 上述研究結(jié)果顯示，牙齒在正畸力的作用下，壓力側(cè)牙周膜內(nèi)血管數(shù)目減少，管徑減小，可使局部的牙周膜細(xì)胞處于一種缺氧、營(yíng)養(yǎng)缺乏的環(huán)境，進(jìn)而出現(xiàn)細(xì)胞減少、消亡的情況。而體外細(xì)胞學(xué)試驗(yàn)顯示，在饑餓環(huán)境下，出現(xiàn)人牙周膜成纖維細(xì)胞胞漿中自噬體數(shù)目增多，LC3蛋白表達(dá)增高等自噬水平升高的表現(xiàn)，提示這可能是壓力側(cè)牙周組織改建過(guò)程中牙周膜細(xì)胞對(duì)矯治力作用的一種適應(yīng)性表現(xiàn)，同時(shí)也可能是壓力側(cè)組織細(xì)胞減少、消亡的機(jī)制之一。
【關(guān)鍵詞】：正畸 人牙周膜成纖維細(xì)胞 血管 牙周膜 自噬 饑餓
【學(xué)位授予單位】：第四軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R783.5
【目錄】：

• 縮略語(yǔ)表6-7
• 中文摘要7-10
• Abstract10-14
• 前言14-16
• 文獻(xiàn)回顧16-27
• 第一部分 正畸治療過(guò)程中的牙周組織改建16-20
• 1.1 牙周組織的改建16-17
• 1.2 牙周膜的改建17-18
• 1.3 牙周膜成纖維細(xì)胞18-19
• 1.4 牙周膜血管微循環(huán)的變化19
• 1.5 正畸牙齒移動(dòng)過(guò)程中壓力側(cè)牙周膜細(xì)胞消亡機(jī)制19-20
• 第二部分 自噬的研究進(jìn)展20-27
• 2.1 自噬的基本概念和特征20
• 2.2 自噬的形式20-21
• 2.3 自噬發(fā)生的分子機(jī)制21-23
• 2.4 LC3 蛋白與自噬的關(guān)系23
• 2.5 自噬在生理病理狀態(tài)下的作用23-25
• 2.6 自噬性細(xì)胞死亡25-27
• 實(shí)驗(yàn)一 牙齒移動(dòng)過(guò)程中牙周組織組織形態(tài)學(xué)變化的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究27-40
• 1 材料27-28
• 1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物27-28
• 1.2 主要試劑及設(shè)備28
• 2 實(shí)驗(yàn)方法28-32
• 2.1 SD 大鼠正畸牙齒移動(dòng)模型28-29
• 2.2 實(shí)驗(yàn)分組29
• 2.3 組織取材、固定29-30
• 2.4 SD 大鼠正畸牙齒移動(dòng)過(guò)程中牙周組織組織形態(tài)學(xué)觀察30-31
• 2.5 SD 大鼠正畸牙齒移動(dòng)過(guò)程中牙周膜間隙寬度變化的研究31-32
• 2.6 SD 大鼠正畸牙齒移動(dòng)過(guò)程中壓力側(cè)牙周膜中細(xì)胞數(shù)量的計(jì)數(shù)方法32
• 2.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析32
• 3 結(jié)果32-36
• 3.1 大鼠正畸牙齒移動(dòng)模型32-33
• 3.2 大鼠正畸牙齒移動(dòng)過(guò)程中牙周組織組織形態(tài) HE 染色觀察結(jié)果33-36
• 4 討論36-40
• 4.1 關(guān)于本研究中正畸牙齒移動(dòng)動(dòng)物模型的建立36-37
• 4.2 關(guān)于大鼠正畸牙齒移動(dòng)過(guò)程中牙周膜間隙寬度的變化37-38
• 4.3 關(guān)于大鼠正畸牙齒移動(dòng)過(guò)程中壓力側(cè)牙周膜內(nèi)毛細(xì)血管的變化38
• 4.4 關(guān)于大鼠正畸牙齒移動(dòng)過(guò)程中壓力側(cè)牙周膜內(nèi)細(xì)胞數(shù)量的變化38-39
• 4.5 小結(jié)39-40
• 實(shí)驗(yàn)二 饑餓誘導(dǎo)環(huán)境下人牙周膜成纖維細(xì)胞自噬作用發(fā)生情況的實(shí)驗(yàn)研究40-53
• 1 材料41-42
• 1.1 主要儀器及設(shè)備41
• 1.2 主要試劑41-42
• 2 方法42-47
• 2.1 人牙周膜成纖維細(xì)胞的體外原代培養(yǎng)42
• 2.2 抗角蛋白和抗波形蛋白染色法鑒定人牙周膜成纖維細(xì)胞的來(lái)源42-43
• 2.3 實(shí)驗(yàn)分組43
• 2.4 透射電子顯微鏡觀察饑餓誘導(dǎo)人牙周膜成纖維細(xì)胞胞漿中自噬體的變化43-44
• 2.5 免疫熒光染色法檢測(cè)饑餓誘導(dǎo)人牙周膜成纖維細(xì)胞中 LC3 的表達(dá)44-45
• 2.6 Western blot 檢測(cè)饑餓誘導(dǎo)人牙周膜成纖維細(xì)胞中 LC3 的表達(dá)45-47
• 2.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析47
• 3 結(jié)果47-50
• 3.1 人牙周膜成纖維細(xì)胞的原代培養(yǎng)及鑒定47-48
• 3.2 透射電鏡觀察饑餓誘導(dǎo)人牙周膜成纖維細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)結(jié)果48-49
• 3.3 免疫熒光染色結(jié)果49
• 3.4 Western blot 檢測(cè)結(jié)果49-50
• 4 討論50-53
• 4.1 關(guān)于饑餓誘導(dǎo)條件的選擇50
• 4.2 關(guān)于透射電子顯微鏡觀察饑餓誘導(dǎo)人牙周膜成纖維細(xì)胞胞漿中自噬體的變化50-51
• 4.3 關(guān)于饑餓誘導(dǎo)人牙周膜成纖維細(xì)胞內(nèi) LC3 蛋白表達(dá)的變化51
• 4.4 小結(jié)51-53
• 小結(jié)53-55
• 參考文獻(xiàn)55-63
• 個(gè)人簡(jiǎn)歷和研究成果63-64
• 致謝64-65
• 臨床病例報(bào)告65-80

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前4條

1 李國(guó)東;吳德全;李本義;;細(xì)胞自噬在腫瘤中作用的研究進(jìn)展[J];癌癥;2009年04期

2 王海杰;譚玉珍;;細(xì)胞自噬研究技術(shù)進(jìn)展及其應(yīng)用[J];中國(guó)細(xì)胞生物學(xué)學(xué)報(bào);2011年07期

3 李小彤,張丁,傅民魁,楊雁琪;機(jī)械牽張力對(duì)人牙周膜細(xì)胞成骨樣細(xì)胞功能的影響[J];中華口腔醫(yī)學(xué)雜志;2002年02期

4 呂雷;林康;高偉陽(yáng);何智靈;高自勉;李浙峰;李俊杰;;饑餓誘導(dǎo)增生性瘢痕成纖維細(xì)胞自噬發(fā)生[J];中國(guó)病理生理雜志;2013年02期

  本文關(guān)鍵詞：正畸牙齒移動(dòng)過(guò)程中牙周膜成纖維細(xì)胞自噬作用的初步研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：292704