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變形鏈球菌耐酸性相關(guān)基因的研究

發(fā)布時間:2020-12-12 16:26
  目的尋找一個新的與變形鏈球菌耐酸性相關(guān)的基因方法含轉(zhuǎn)座因子 Tn917的溫度敏感型質(zhì)粒 pTV1- OK 轉(zhuǎn)化變形鏈球菌野生株 UA159,誘導(dǎo)轉(zhuǎn)座因子 Tn917發(fā)生轉(zhuǎn)座,從大量的發(fā)生轉(zhuǎn)座的轉(zhuǎn)座株庫中篩選在 pH5.0的固體培養(yǎng)基上不能生長的突變株,即為耐酸性缺陷株。以含部分 Tn917的片段的 DIG 標(biāo)記探針和 EcoR Ⅰ消化的變形鏈球菌 UA159和耐酸性缺陷株基因組進(jìn)行 Southern 雜交,以證實耐酸性缺隱株的基因組中 Tn917插入的位點數(shù)。對比二者在不同 pH 值的固體培養(yǎng)基的生長情況及在不同 pH 值的液體培養(yǎng)基中的生長曲線;對比二者的糖酵解降低曲線及糖酵解最低 pH 值;對比二者的 ATPase 活性;對比二者的致死性 pH 值。不對稱 PCR 法獲得 Tng17插入位點上下游的基因,將 PCR 產(chǎn)物純化、回收并與 pMD18—T 載體連接,轉(zhuǎn)化大腸桿菌 DH5a,挑取多個克隆,增菌,提取質(zhì)粒 DNA,測序。利用 Sequencher 軟件分析測結(jié)果。以所得序列為關(guān)鍵詞到 www.ncbi.nlm.nih 中已知的變形鏈球菌 UA159的基因組中進(jìn)行 BLAST... 

【文章來源】:FDI世界口腔醫(yī)學(xué)大會論文摘要匯編中華口腔醫(yī)學(xué)會會議論文集

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