絕經(jīng)后婦女骨質(zhì)疏松發(fā)展迅速,與機(jī)體雌激素缺乏有關(guān)。研究表明雌激素在骨吸收與改建中發(fā)揮了極其重要的作用,雌激素缺乏可以引起全身骨質(zhì)疏松。牙槽骨是機(jī)體骨質(zhì)密度較低的骨組織,最容易出現(xiàn)骨質(zhì)疏松,臨床上主要表現(xiàn)為牙槽骨吸收,導(dǎo)致牙齒松動(dòng)與脫落,直接影響患者牙齒與牙周組織健康與口腔治療,但至今對(duì)牙槽骨吸收與改建的機(jī)理并不十分明確。牙槽骨骨質(zhì)疏松及吸收是否受雌激素缺乏的影響,目前的報(bào)道尚有爭(zhēng)論,使得研究骨質(zhì)疏松狀況下牙周組織的生理、病理特點(diǎn)成為涉及牙周病學(xué)、牙槽外科、牙齒種植、口腔修復(fù)及正畸治療等口腔多學(xué)科的臨床問(wèn)題,也是本研究所關(guān)注的問(wèn)題。 人牙周膜中的成纖維細(xì)胞( Human Periodontal Ligament Fibroblast,HPLF)是最主要的細(xì)胞成分,牙周膜成纖維細(xì)胞通過(guò)增殖、分化、分泌基質(zhì)參與到牙周組織的改建中,在維持牙周組織完整性以及行使牙周改建的功能中發(fā)揮重要的作用,而雌激素在其中發(fā)揮的作用是我們關(guān)心的問(wèn)題。國(guó)內(nèi)外學(xué)者的研究提供了雌激素對(duì)HPLF增殖、分化影響的一些線(xiàn)索,如雌激素作用下牙周膜成纖維細(xì)胞可以表現(xiàn)出一定的成骨特性,例如分泌骨相關(guān)蛋白,以及形成礦化結(jié)節(jié)等,但其作用途徑尚未闡明。 雌激素受體(estrogen receptor,ER)是雌激素的細(xì)胞內(nèi)結(jié)合位點(diǎn),是雌激素發(fā)揮作用的關(guān)鍵所在。在機(jī)體其他組織和器官,雌激素通常是通過(guò)與其特異性受體結(jié)合發(fā)揮調(diào)控細(xì)胞生長(zhǎng)、增殖和分化的。ER的兩種亞型ERα和ERβ已經(jīng)成功分離出來(lái),在不同的組織中有不同的表達(dá)型。目前國(guó)內(nèi)外關(guān)于ER與牙周組織關(guān)系方面的研究較少。 雌激素可能能夠影響牙周膜成纖維細(xì)胞的一些生物學(xué)特性,例如蛋白合成和細(xì)胞生長(zhǎng),也可能對(duì)成纖維細(xì)胞成骨分化有一定影響,通過(guò)本研究我們希望進(jìn)一步探討雌激素對(duì)牙周改建的生理作用,為臨床正畸治療和牙周病的治療提供一定的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 我們通過(guò)(1)切除SD大鼠兩側(cè)卵巢(OVX),建立人工模擬絕經(jīng)后的動(dòng)物模型,觀察大鼠牙槽骨高度(臨床附著喪失)和血清雌激素水平的關(guān)系;(2)取大鼠下頜磨牙區(qū)組織,制備冰凍切片后,用免疫組織化學(xué)SABC法進(jìn)行牙周組織ERα、ERβ染色,計(jì)數(shù)隨機(jī)區(qū)域中陽(yáng)性細(xì)胞個(gè)數(shù)并進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。(3)取因正畸原因拔除的第一前磨牙牙周膜組織,用組織塊結(jié)合酶消化法培養(yǎng)牙周膜成纖維細(xì)胞,制作細(xì)胞爬片,免疫細(xì)胞化學(xué)進(jìn)行ERα、ERβ染色,逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(RT-PCR)法檢測(cè)ER的mRNA的表達(dá),Western blot法分析ER蛋白的表達(dá);(4)對(duì)體外培養(yǎng)的牙周膜成纖維細(xì)胞給與不同生理濃度的雌激素刺激,以3H-胸腺嘧啶和3H-脯氨酸參入實(shí)驗(yàn)確定細(xì)胞DNA和膠原合成產(chǎn)物的變化,明確雌激素對(duì)細(xì)胞增殖的影響;(5)在不同生理濃度的雌激素刺激下,測(cè)定細(xì)胞堿性磷酸酶活性(ALP)和骨鈣素(OCN)含量,明確雌激素對(duì)細(xì)胞骨分化能力的影響。 研究結(jié)果發(fā)現(xiàn): (1)去勢(shì)組大鼠下頜第二磨牙區(qū)可見(jiàn)牙槽骨皮質(zhì)變薄,骨小梁變稀疏,排列紊亂,骨髓腔隙增大,骨小梁表面成骨細(xì)胞及破骨細(xì)胞均有增加。牙周膜水腫、疏松,排列不規(guī)則,血管擴(kuò)張充血,牙骨質(zhì)密度也有減低,較假手術(shù)組明顯呈退行性變,臨床附著水平也與假手術(shù)組有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.01),而雌激素治療組可改善這一病理變化。這與動(dòng)物血清雌激素濃度有明顯的相關(guān)性。 (2)大鼠牙周膜組織切片中,可見(jiàn)ER陽(yáng)性染色的棕黃色顆粒,PBS空白對(duì)照組則無(wú)棕黃色染色,陽(yáng)性對(duì)照可見(jiàn)強(qiáng)陽(yáng)性染色。觀察發(fā)現(xiàn)ERα、ERβ在SD大鼠牙周組織中比較廣泛的表達(dá),ER在細(xì)胞胞核和胞漿均有表達(dá),ERβ的陽(yáng)性率明顯高于ERα。 (3)體外培養(yǎng)人牙周膜成纖維細(xì)胞制備細(xì)胞爬片,通過(guò)免疫細(xì)胞化學(xué)方法可觀測(cè)到ERα、ERβ在胞核中表達(dá)。 (4)通過(guò)RT-PCR檢測(cè)ERmRNA,各組細(xì)胞用雌激素受體的特異性引物均獲得了目的PCR產(chǎn)物,分別對(duì)應(yīng)ERα、ERβ的特異條帶 (5)同株細(xì)胞經(jīng)Western blot檢測(cè)結(jié)果,各組細(xì)胞可見(jiàn)正確分子量的蛋白印跡條帶,其中ERβ的條帶較ERα對(duì)應(yīng)的蛋白條帶濃。 (6)以10-7, 10-8和10-9mol/L濃度的E2作用于細(xì)胞,與陰性對(duì)照和空白對(duì)照組相比,各種濃度的雌激素均未增加細(xì)胞DNA的合成量和膠原合成(P0.05) (7)體外培養(yǎng)牙周膜成纖維細(xì)胞用濃度為10-7、10-8、10-9mol/L的E2分別處理,與空白對(duì)照組相比,E2濃度依賴(lài)地增加細(xì)胞內(nèi)ALP活性和OCN的含量,受體特異性阻斷劑ICI182780可以阻斷這一效應(yīng)。 根據(jù)以上研究結(jié)果,得出以下結(jié)論: (1)雌激素缺乏時(shí)動(dòng)物牙槽嵴高度降低,骨量減少,附著喪失增加,而給予去勢(shì)后大鼠補(bǔ)充雌激素,牙槽骨的骨密度增加,附著喪失減輕,表明雌激素對(duì)于改善骨質(zhì)疏松具有一定作用。 (2)大鼠牙周膜中,可觀察到ER免疫組化陽(yáng)性的細(xì)胞,結(jié)合細(xì)胞分布特點(diǎn),可以得出成纖維細(xì)胞中有雌激素受體表達(dá)的結(jié)論。說(shuō)明牙周組織對(duì)雌激素有直接應(yīng)答反應(yīng)。ERα和ERβ陽(yáng)性率分別為20%和40%左右,二者間有顯著性差異(P0.05),說(shuō)明在大鼠的牙周膜以ERβ的表達(dá)為主。 (3)體外培養(yǎng)的人牙周膜成纖維細(xì)胞中也可觀察到ER兩種亞型的表達(dá)。RT-PCR法和Western blot法分別從mRNA水平和蛋白水平證實(shí)了ERα、ERβ在HPLF上均有表達(dá)。提示雌激素在HPLF的增殖、分化中發(fā)揮作用很可能是通過(guò)配體—受體途徑實(shí)現(xiàn)的 (4)生理濃度的雌激素對(duì)牙周膜成纖維細(xì)胞的膠原和DNA合成沒(méi)有影響,說(shuō)明雌激素-受體復(fù)合體作用的基因可能與細(xì)胞的增殖和膠原合成無(wú)關(guān)。 (5)生理濃度的雌激素能促進(jìn)牙周膜成纖維細(xì)胞合成和釋放細(xì)胞成骨分化的指標(biāo)ALP和OCN,說(shuō)明雌激素能夠促進(jìn)牙周膜成纖維細(xì)胞向成骨方向分化,這對(duì)于維持牙周組織正常的改建和損傷后的修復(fù)有重要的意義。
【學(xué)位單位】：第四軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位年份】：2007
【中圖分類(lèi)】：R781.4;R580
【部分圖文】：

aERα染色結(jié)果（×200倍）

bERβ染色結(jié)果（×200倍）

睪丸切片陽(yáng)性對(duì)照染色結(jié)果（×200倍）
【引證文獻(xiàn)】

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前1條

1 蔡川;雌激素受體相關(guān)受體α在牙周膜細(xì)胞中的表達(dá)及調(diào)控的初步研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2010年

本文編號(hào)：2883546