發(fā)布時間：2017-03-17 18:01

  本文關(guān)鍵詞：甘肅東鄉(xiāng)及裕固族牙周炎微生物群落結(jié)構(gòu)研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的：以甘肅東鄉(xiāng)及裕固族慢性牙周炎患者為研究對象,通過構(gòu)建16S rRNA克隆文庫,從不同的分類學水平,對比兩組人群唾液微生物群落結(jié)構(gòu)差異。探尋兩個民族的主要牙周炎致病菌,為進一步研究微生物的致病機制提供理論支持。并從病因?qū)W角度入手,積極采取相應(yīng)措施進行早期預防,降低牙周炎發(fā)病率,促進牙周組織健康。方法：按照WHO的采樣標準,采集兩個民族牙周炎患者唾液樣本各20例,標記為：DP(東鄉(xiāng)族牙周炎樣本),YP(裕固族牙周炎樣本)。提取細菌基因組DNA,通過PCR擴增獲得目的片段,并轉(zhuǎn)化至E.coli DH5a,構(gòu)建16SrRNA克隆文庫。進行16S rRNA測序,剔除不合格序列后,應(yīng)用MOTHUR、RDP、NCBI、MEGA等軟件和數(shù)據(jù)庫進行相關(guān)分析,并獲得微生物分類學信息。結(jié)果：(1)兩組唾液樣本共檢測到129個OTU,歸屬于7個門及37個屬；(2)7個細菌門：厚壁菌門(Firmicute)、變形菌門(Proteobacteria)、放線菌門(Actinobacteria)、擬桿菌門(Bacteroidetes)、梭桿菌門(Fusobacteria)、互養(yǎng)菌門(Synergistetes)以及TM7菌門,對菌門豐度進行秩和檢驗,發(fā)現(xiàn)7個菌門在兩組之間的差異均無統(tǒng)計學意義(P0.05)。(3)兩組樣本中優(yōu)勢菌的檢出情況存在差異：DP組中為鏈球菌屬(Streptococcus,36.81%)、奈瑟菌屬(Neisseria,10.44%)、普氏菌屬(Prevotella,4.95%)、韋榮氏球菌屬(Veillonella,3.85%)、伴放線放線桿菌屬(Actinobacillus,3.30%)、卟啉單胞菌屬(Porphyromonas,2.75%)、梭桿菌屬(Fusobacterium,2.20%)、嗜血桿菌屬(Haemophilus,2.20%)、顆粒鏈菌屬(Granulicatella,1.10%)、纖毛菌屬(Leptotrichial,10%)、消化鏈球菌屬(Peptostreptococcus,1.10%)及TM7菌屬(TM7,1.10%)。YP組中的優(yōu)勢屬為：鏈球菌屬(Streptococcus,43.70%)、 Methyloversatilis(7.10%)及假單胞菌屬(Pseudomonas,5.20%)、不動桿菌屬(Acinetobacter,4.40%)、 Schlegelella菌屬(Schlegelella,4.00%)、奈瑟菌屬(Neisseria,3.60%)、孿生球菌屬(Gemella,3.60%)、普氏菌屬(Prevotella,3.20%)、嗜血桿菌屬(Haemophilus,1.60%)、真細菌屬(Eubacterium,1.60%)及梭桿菌屬(Fusobacterium,1.20%);(4)鏈球菌屬存在于所有20例樣本中,為兩組人群牙周炎患者唾液中的核心微生物。除目前已能分類的菌屬之外,還有11個菌屬不能準確分類,這些菌屬在牙周炎的發(fā)生、發(fā)展中的作用需進一步探索研究；(5) Aggregatibacter菌屬(DP組：0.00%,YP組：3.30%)、奈瑟菌屬(Neisseria)(DP組：10.40%,YP組：3.60%)及韋永球菌屬(Veillonella,DP組：0.40%,YP組：3.85%)在兩組樣本中的分布具有明顯的差異(P0.05)。結(jié)論：構(gòu)建16S rRNA基因克隆文庫法可用于牙周炎患者的口腔微生物群落結(jié)構(gòu)研究,甘肅東鄉(xiāng)及裕固族牙周炎口腔微生物群落結(jié)構(gòu)存在一定的差異性。Aggregatibacter菌屬、奈瑟菌屬及韋永球菌屬在兩個民族牙周炎患者之間的差異性需要深入研究,并且鏈球菌屬、普氏菌屬、梭桿菌屬及嗜血桿菌屬等常見的牙周致病菌在牙周炎患者口腔中的作用值得進一步研究。
【關(guān)鍵詞】：牙周炎 唾液 口腔微生物 優(yōu)勢菌屬 16s rRNA克隆文庫
【學位授予單位】：蘭州大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R781.4
【目錄】：

• 中文摘要3-5
• Abstract5-7
• 英文縮略詞7-10
• 第一章 前言10-13
• 第二章 實驗材料和方法13-24
• 2.1 實驗材料13-14
• 2.1.1 主要試劑13-14
• 2.1.2 主要材料和儀器14
• 2.2 實驗方法14-24
• 2.2.1 研究對象14-15
• 2.2.2 樣本的收集15
• 2.2.3 總DNA的提取和含量測定15-16
• 2.2.4 總DNA的檢測16
• 2.2.5 PCR擴增16-17
• 2.2.6 PCR擴增產(chǎn)物的純化17-18
• 2.2.7 PCR產(chǎn)物的連接18-20
• 2.2.8 CaCl2法Ecoli DH5α感受態(tài)細胞的制備及轉(zhuǎn)化20-21
• 2.2.9 陽性克隆的篩選及克隆文庫的構(gòu)建21-22
• 2.2.10 生物信息學分析22-24
• 2.2.10.1 序列的處理22
• 2.2.10.2 樣本多樣性評估22-23
• 2.2.10.3 物種豐度分析23
• 2.2.10.4 系統(tǒng)發(fā)育樹分析23
• 2.2.10.5 細菌群落主成分分析23
• 2.2.10.6 統(tǒng)計分析23-24
• 第三章 實驗結(jié)果與分析24-36
• 3.1 樣本采集情況24
• 3.2 唾液總DNA提取24-25
• 3.3 唾液微生物多樣性25-33
• 3.3.1 稀釋曲線評估25-26
• 3.3.2 多樣性指數(shù)分析26
• 3.3.3 唾液微生物豐度分析26-27
• 3.3.4 唾液微生物檢出率27-28
• 3.3.5 菌門水平上物種豐度28-31
• 3.3.6 菌屬水平上物種豐度31-33
• 3.4 唾液微生物群落主成分分析33-34
• 3.5 系統(tǒng)發(fā)育樹分析34-36
• 第四章 討論36-40
• 第五章 結(jié)論40-41
• 參考文獻41-46
• 在學期間的研究成果46-47
• 致謝47

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本文編號：253218