本文關(guān)鍵詞：HEMA對(duì)人牙髓細(xì)胞、成牙本質(zhì)樣細(xì)胞中MMPs表達(dá)的影響與調(diào)控，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

《河北醫(yī)科大學(xué)》 2015年

STAT3在CTGF調(diào)控人牙髓細(xì)胞分化中作用的研究

劉從娜  

【摘要】：炎癥、外傷等造成的牙髓損傷逐年增多,而現(xiàn)有的臨床治療方法還不能完全再造牙髓或代替牙髓組織的功能。牙髓細(xì)胞(Human Dental Plup Cells,h DPCs)是一種具有一定的自我增殖和分化潛力的細(xì)胞。以往研究已證實(shí)體外培養(yǎng)的牙髓細(xì)胞有形成鈣化組織的能力,這種能力依賴(lài)于有多種生物學(xué)效應(yīng)的細(xì)胞因子的調(diào)控,即細(xì)胞因子能夠不同程度的刺激受損的牙髓細(xì)胞再生。結(jié)締組織生長(zhǎng)因子(Connective tissue growth factor,CTGF)具有強(qiáng)烈促纖維化的作用,它可以增強(qiáng)牙髓細(xì)胞的礦化能力,但不能刺激牙髓細(xì)胞增殖,其中作用的分子機(jī)制尚不清楚。近年來(lái)發(fā)現(xiàn)酪氨酸蛋白激酶-信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)子和轉(zhuǎn)錄激活子(Janus protein tyrosine kinase-Signal transducer and activator of transcription,JAK-STAT)通路與炎癥反應(yīng)、細(xì)胞增殖、分化等相關(guān)。本研究即探討STAT3是否在CTGF刺激牙髓細(xì)胞增殖分化過(guò)程中起重要作用。第一部分CTGF在人牙髓細(xì)胞增殖、分化過(guò)程中的作用目的:體外培養(yǎng)h DPCs,觀察CTGF對(duì)h DPCs增殖、分化的影響。方法:選取由于正畸或阻生拔除的健康、完整的第三磨牙(均經(jīng)患者知情同意),在無(wú)菌條件下取出牙髓組織,采用組織酶消化法原代培養(yǎng)h DPCs并鑒定來(lái)源。采用不同濃度(0ng/ml、10ng/ml、20ng/ml、50ng/ml)的CTGF作用于h DPCs,作用不同時(shí)間后,通過(guò)甲基噻唑基四唑(Methyl Thiazolyl Tetrazolium,MTT)檢測(cè)CTGF對(duì)h DPCs增殖的影響;茜素紅染色觀察礦化結(jié)節(jié)的形成。結(jié)果:1組織塊酶解法能成功培養(yǎng)出成纖維樣細(xì)胞,倒置顯微鏡下可見(jiàn)細(xì)胞形態(tài)均一,為典型的梭形,胞體豐滿(mǎn),胞漿豐富,細(xì)胞核呈圓形或卵圓形位于細(xì)胞中央,核仁清晰可見(jiàn)。免疫細(xì)胞化學(xué)染色結(jié)果示波形絲蛋白染色陽(yáng)性,角蛋白染色陰性。2 MTT結(jié)果顯示CTGF三個(gè)濃度(10ng/ml、20ng/ml、50ng/ml)均對(duì)細(xì)胞無(wú)毒性作用,能促進(jìn)h DPCs增殖,且隨著時(shí)間延長(zhǎng)作用效果增強(qiáng),第1天,實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),從第3天開(kāi)始,實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);茜素紅結(jié)果顯示CTGF組的礦化結(jié)節(jié)明顯高于對(duì)照組。結(jié)論組織塊酶解法能成功分離和培養(yǎng)出h DPCs;一定濃度的CTGF能夠促進(jìn)牙髓細(xì)胞增殖和分化。第二部分CTGF對(duì)人牙髓細(xì)胞中STAT3蛋白表達(dá)的影響目的:觀察CTGF作用h DPCs后,細(xì)胞中STAT3蛋白的表達(dá)情況。方法:取第四代h DPCs制成細(xì)胞懸液,爬片后隨機(jī)分為對(duì)照組、CTGF處理組、Stattic(STAT3特異性抑制劑)+CTGF處理組,分別培養(yǎng)30min后采用免疫組化SABC法檢測(cè)中STAT3活性蛋白(磷酸化蛋白,Phos-STAT3)的表達(dá)情況。結(jié)果:h DPCs培養(yǎng)30 min后,CTGF處理組可見(jiàn)棕色顆粒主要分布在細(xì)胞核中,即Phos-STAT3主要在細(xì)胞核中表達(dá);對(duì)照組相反,棕色顆粒主要分布在細(xì)胞質(zhì)中,Phos-STAT3在胞質(zhì)中表達(dá),細(xì)胞核中無(wú)表達(dá);Stattic+CTGF處理組細(xì)胞質(zhì)中棕色顆粒比對(duì)照組明顯減少,細(xì)胞核中無(wú)棕色顆粒,Phos-STAT3在細(xì)胞質(zhì)中表達(dá),但表達(dá)量比對(duì)照組降低。結(jié)論:CTGF能明顯促進(jìn)STAT3磷酸蛋白的表達(dá),并誘導(dǎo)Phos-STAT3轉(zhuǎn)移細(xì)胞核中表達(dá);Stattic能抑制STAT3蛋白磷酸化。第三部分STAT3在CTGF誘導(dǎo)牙髓細(xì)胞分化中的作用目的:Stattic與CTGF聯(lián)合作用h DPCs后,觀察礦化結(jié)節(jié)以及ALP、OCN、OPN和DMP-1 m RNA表達(dá)水平。方法:取第4代人牙髓細(xì)胞制成細(xì)胞懸液,以104個(gè)/ml的濃度接種在6孔板和50 ml培養(yǎng)瓶中,細(xì)胞匯合后,將h DPCs隨機(jī)分為空白對(duì)照組、陽(yáng)性對(duì)照組(20ng/ml的CTGF)和實(shí)驗(yàn)組(STAT3抑制劑Stattic作用半小時(shí)后加入20ng/ml的CTGF),作用7 d、14 d、28 d后,采用茜素紅染色觀察礦化結(jié)節(jié)的形成,Real-time PCR法檢ALP、OCN、OPN和DMP-1的m RNA表達(dá)水平。結(jié)果:茜素紅結(jié)果:與陽(yáng)性對(duì)照組相比,加入Stattic后,礦化結(jié)節(jié)形成明顯減少。PCR結(jié)果顯示:7天時(shí),加入Stattic后,ALP、OCN、OPN和DMP-1的m RNA表達(dá)下降,CTGF組表達(dá)增高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);14天時(shí),加入Stattic后,ALP m RNA表達(dá)下降,CTGF組表達(dá)增高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);Stattic組與對(duì)照組OCN m RNA表達(dá)無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),CTGF組的OCN m RNA表達(dá)增高,與其他兩組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);Stattic組與對(duì)照組OPN m RNA表達(dá)無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),CTGF組的OPN m RNA表達(dá)降低,較其他兩組有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);DMP-1m RNA表達(dá)各組比對(duì)照組表達(dá)都降低,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論:STAT3在CTGF誘導(dǎo)牙髓細(xì)胞分化中起重要作用。綜上所述,CTGF能促進(jìn)h DPCs增殖和分化,并且能夠激活STAT3通路,使h DPCS中STAT3磷酸化蛋白表達(dá)增高,并促進(jìn)Phos-STAT3轉(zhuǎn)移到細(xì)胞核中。這一研究為揭示CTGF促進(jìn)h DPCs分化的機(jī)制以及為臨床開(kāi)展新的牙髓炎癥治療方案提供了實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

【關(guān)鍵詞】：
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類(lèi)號(hào)】：R781.3
【目錄】：

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【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前2條

1 盧婧;唐榮銀;李彥;;人牙髓細(xì)胞原代培養(yǎng)方法的比較研究[J];牙體牙髓牙周病學(xué)雜志;2006年06期

2 ;Osteogenic differentiation of mesenchymal stem cells promoted by overexpression of connective tissue growth factor[J];Journal of Zhejiang University(Science B:An International Biomedicine & Biotechnology Journal);2009年05期

【共引文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 張政;房清敏;;結(jié)締組織生長(zhǎng)因子的研究進(jìn)展[J];濱州醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);2015年01期

2 黃娟;彭依群;;結(jié)締組織生長(zhǎng)因子與血管鈣化[J];中國(guó)動(dòng)脈硬化雜志;2012年07期

3 劉鳳玲;鄧旭亮;吳悅梅;唐麗琴;;HPC和L929細(xì)胞在修復(fù)粘結(jié)劑體外毒性評(píng)價(jià)中靈敏度的比較研究[J];口腔頜面修復(fù)學(xué)雜志;2010年05期

4 鄧力山;毛小波;軒東英;;鎖骨顱骨發(fā)育不良患者牙髓細(xì)胞的生物學(xué)特性及超微結(jié)構(gòu)分析[J];解放軍醫(yī)藥雜志;2014年10期

5 鄧云貞;李玨丹;魏虹;石建峰;李昂;茍建重;;BMP-2促進(jìn)人炎癥牙髓干細(xì)胞骨向誘導(dǎo)分化的體外研究[J];口腔生物醫(yī)學(xué);2015年02期

6 陸家瑜;華麗;張秀麗;鄒德榮;;山羊乳牙牙髓細(xì)胞體外培養(yǎng)和綠色熒光轉(zhuǎn)染的研究[J];上�？谇会t(yī)學(xué);2010年05期

7 沈晴昳;;不同原代培養(yǎng)方法培養(yǎng)人牙髓細(xì)胞的研究[J];天津醫(yī)藥;2011年02期

8 江龍;朱亞琴;;改良組織塊法體外培養(yǎng)人牙周膜細(xì)胞和牙髓細(xì)胞[J];牙體牙髓牙周病學(xué)雜志;2008年04期

9 ;Osteoinduction by Ca-P biomaterials implanted into the muscles of mice[J];Journal of Zhejiang University-Science B(Biomedicine & Biotechnology);2011年07期

10 王萍;王亞平;周玥;楊明聰;;人牙髓細(xì)胞的體外培養(yǎng)及生物學(xué)特性研究[J];重慶醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào);2011年02期

中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 閆雪萍;殼聚糖/磷酸三鈣復(fù)合組織工程支架材料的制備及其性能研究[D];蘭州大學(xué);2011年

2 劉鳳玲;電容耦合電刺激對(duì)體外人牙髓細(xì)胞增殖影響的研究[D];佳木斯大學(xué);2008年

3 賈謙;堿性成纖維細(xì)胞因子對(duì)牙髓干細(xì)胞礦化能力影響及機(jī)制研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2012年

4 田秀芬;轉(zhuǎn)錄共調(diào)節(jié)因子FHL2對(duì)人牙髓細(xì)胞分化及礦化的調(diào)控作用研究[D];山東大學(xué);2013年

5 程?hào)|梅;17β-雌二醇對(duì)體外培養(yǎng)人牙髓細(xì)胞的生物學(xué)特性影響的實(shí)驗(yàn)研究[D];河北醫(yī)科大學(xué);2013年

6 張曉;IL-8及其受體在人牙髓干細(xì)胞的表達(dá)及其調(diào)控的初步研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2013年

7 王志華;LPS對(duì)人牙髓干細(xì)胞增殖定向分化能力的影響及其相關(guān)機(jī)制的研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2013年

8 崔力;抑制瞬時(shí)受體電位M7通道表達(dá)對(duì)人牙髓干細(xì)胞增殖、遷移及成骨/成牙向分化的影響[D];南方醫(yī)科大學(xué);2013年

9 張獻(xiàn)麗;血管緊張素Ⅱ?qū)w外培養(yǎng)人牙髓細(xì)胞生物學(xué)特性影響的實(shí)驗(yàn)研究[D];河北醫(yī)科大學(xué);2014年

10 田麗華;P物質(zhì)對(duì)體外培養(yǎng)人牙髓細(xì)胞生物學(xué)特性的影響[D];河北醫(yī)科大學(xué);2014年

【二級(jí)參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前2條

1 吳軍正,司徒鎮(zhèn)強(qiáng),陳建元,王為,劉斌;體外培養(yǎng)的人牙齦牙周膜牙髓纖維細(xì)胞生長(zhǎng)及形態(tài)特點(diǎn)[J];實(shí)用口腔醫(yī)學(xué)雜志;1993年04期

2 張郁,蔭俊,史俊南,肖明振,陳建元,吳軍正;人牙髓成纖維細(xì)胞等的體外培養(yǎng)、生長(zhǎng)特性和鑒定[J];牙體牙髓牙周病學(xué)雜志;1991年02期

【相似文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 王學(xué)俠;氟對(duì)離體培養(yǎng)的人牙髓細(xì)胞的毒性作用[J];國(guó)外醫(yī)學(xué).口腔醫(yī)學(xué)分冊(cè);2002年01期

2 楊雪超,樊明文;體外持續(xù)培養(yǎng)對(duì)人牙髓細(xì)胞分化能力的影響[J];牙體牙髓牙周病學(xué)雜志;2003年02期

3 楊春瑜,劉泓,呂行,金曉明,靳占峰,陳鶴;體外培養(yǎng)人牙髓細(xì)胞的初步實(shí)驗(yàn)觀察[J];哈爾濱醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào);2004年04期

4 董文波,吳補(bǔ)領(lǐng);蟾酥制劑對(duì)人牙髓細(xì)胞的細(xì)胞毒性研究[J];牙體牙髓牙周病學(xué)雜志;2004年09期

5 段建民;菊地寬高;汪維健;片山直;;血小板血漿對(duì)人牙髓細(xì)胞增殖的影響[J];牙體牙髓牙周病學(xué)雜志;2006年04期

6 段建民;汪維健;菊地寬高;;低濃度洗滌血小板促進(jìn)人牙髓細(xì)胞增殖的作用機(jī)制探討[J];實(shí)用口腔醫(yī)學(xué)雜志;2006年05期

7 高潔;劉冬娟;劉月華;;大鼠牙髓細(xì)胞的分離培養(yǎng)及超微結(jié)構(gòu)觀察[J];解剖科學(xué)進(jìn)展;2007年01期

8 張穎麗;姜新朋;張影杰;歐陽(yáng)紅生;;堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子對(duì)人體外培養(yǎng)牙髓細(xì)胞增殖的影響[J];現(xiàn)代口腔醫(yī)學(xué)雜志;2008年02期

9 李政權(quán);李俊;王敏;張紅梅;;體外培養(yǎng)的人牙髓細(xì)胞表型分析[J];臨床口腔醫(yī)學(xué)雜志;2009年03期

10 于清華;高玫梅;韓彥玲;周少云;;酶消化組織塊法培養(yǎng)人牙髓細(xì)胞[J];哈爾濱醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào);2009年02期

中國(guó)重要會(huì)議論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 邵美瑛;楊惠;程然;程立;胡濤;;內(nèi)毒素誘導(dǎo)牙髓細(xì)胞凋亡及其機(jī)制的初步研究[A];全國(guó)第三次牙體牙髓病學(xué)臨床技術(shù)研討會(huì)論文匯編[C];2009年

2 王倩;盧煜;李小玉;周學(xué)東;黃定明;;牙髓細(xì)胞類(lèi)型識(shí)別受體及炎癥體表達(dá)的初步探討[A];全國(guó)第八次牙體牙髓病學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2011年

3 莊姮;鄒曉英;高學(xué)軍;岳林;;人牙髓細(xì)胞體外培養(yǎng)傳代過(guò)程中的老化表現(xiàn)[A];全國(guó)第八次牙體牙髓病學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2011年

4 張穎麗;姜新朋;;堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子對(duì)人體外培養(yǎng)牙髓細(xì)胞增殖的影響[A];2007年第七次全國(guó)牙體牙髓病學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文集[C];2007年

5 于清華;;內(nèi)皮素-1對(duì)人牙髓細(xì)胞分化的影響[A];全國(guó)第八次牙體牙髓病學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2011年

6 劉斐;吳補(bǔ)領(lǐng);高杰;;辛伐他汀對(duì)人牙髓細(xì)胞的增殖和分化的影響[A];全國(guó)第八次牙體牙髓病學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2011年

7 李黎;劉娜;劉魯川;;脈沖Nd:YAG激光照射牙髓斷面后對(duì)牙髓細(xì)胞的影響[A];全國(guó)第三次牙體牙髓病學(xué)臨床技術(shù)研討會(huì)論文匯編[C];2009年

8 劉路;韋曦;凌均棨;吳莉萍;;干細(xì)胞相關(guān)基因在體外培養(yǎng)牙髓細(xì)胞的表達(dá)[A];全國(guó)第八次牙體牙髓病學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2011年

9 李志勇;田衛(wèi)東;陳希哲;閆征斌;;定向誘導(dǎo)人牙髓細(xì)胞向牙本質(zhì)細(xì)胞分化的實(shí)驗(yàn)研究[A];2004年中國(guó)口腔頜面修復(fù)重建外科學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2004年

10 龔啟梅;凌均棨;蔣宏偉;王勁茗;;促紅細(xì)胞生成素對(duì)牙髓細(xì)胞抗炎作用的研究[A];全國(guó)第八次牙體牙髓病學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2011年

中國(guó)博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前6條

1 祁勝財(cái);高遷移率族蛋白B1對(duì)人牙髓細(xì)胞增殖、遷移和分化的影響[D];華中科技大學(xué);2013年

2 汪平;纖維粘連蛋白與牙髓細(xì)胞分化、牙髓組織修復(fù)關(guān)系的研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);1995年

3 許波;抗菌/抗內(nèi)毒素多肽葛佬素的表達(dá)、純化及其生物活性的初步研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2004年

4 趙書(shū)芳;內(nèi)毒素介導(dǎo)的人牙髓細(xì)胞損傷及TGF-β、bcl-2調(diào)控作用的實(shí)驗(yàn)研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);1999年

5 王忠東;人牙髓細(xì)胞中差異表達(dá)基因的克隆及DPDP-2和DPDP-3基因序列分析[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2000年

6 王鳳明;TGF-β對(duì)人牙髓細(xì)胞的作用及p38MAPK信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的研究[D];四川大學(xué);2006年

中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 王雪;IGF-1通過(guò)JAK-STAT通路促進(jìn)牙髓細(xì)胞增殖和分化的體外研究[D];河北醫(yī)科大學(xué);2015年

2 劉從娜;STAT3在CTGF調(diào)控人牙髓細(xì)胞分化中作用的研究[D];河北醫(yī)科大學(xué);2015年

3 孫素;HEMA對(duì)人牙髓細(xì)胞、成牙本質(zhì)樣細(xì)胞中MMPs表達(dá)的影響與調(diào)控[D];昆明醫(yī)科大學(xué);2015年

4 湯俊嶺;過(guò)氧化氫對(duì)人牙髓細(xì)胞氧化還原狀態(tài)的影響[D];鄭州大學(xué);2010年

5 張獻(xiàn)麗;血管緊張素Ⅱ?qū)w外培養(yǎng)人牙髓細(xì)胞生物學(xué)特性影響的實(shí)驗(yàn)研究[D];河北醫(yī)科大學(xué);2014年

6 陳婉;腺病毒介導(dǎo)的鈣粘蛋白11基因轉(zhuǎn)染大鼠牙髓細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)研究[D];廣西醫(yī)科大學(xué);2015年

7 于淼;內(nèi)毒素誘導(dǎo)的人牙髓細(xì)胞損傷及黃芩苷保護(hù)作用的研究[D];暨南大學(xué);2009年

8 陳雅瑜;辛伐他汀對(duì)人牙髓細(xì)胞的體外作用及機(jī)制研究[D];福建醫(yī)科大學(xué);2013年

9 劉鳳玲;電容耦合電刺激對(duì)體外人牙髓細(xì)胞增殖影響的研究[D];佳木斯大學(xué);2008年

10 程?hào)|梅;17β-雌二醇對(duì)體外培養(yǎng)人牙髓細(xì)胞的生物學(xué)特性影響的實(shí)驗(yàn)研究[D];河北醫(yī)科大學(xué);2013年

  本文關(guān)鍵詞：HEMA對(duì)人牙髓細(xì)胞、成牙本質(zhì)樣細(xì)胞中MMPs表達(dá)的影響與調(diào)控，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：247661