本文關(guān)鍵詞：輔酶Q10對糖尿病大鼠牙周炎牙齦組織MMP-9和血清OPG、RANKL的影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

《蘇州大學》 2016年

TNF-α、GSK-3β和RANKL在糖尿病性骨質(zhì)疏松癥發(fā)生發(fā)展中的作用研究

祁俊  

【摘要】：【目的】探討TNF-α、GSK-3β及RANKL在糖尿病性骨質(zhì)疏松癥發(fā)生發(fā)展中的作用。【方法】(1)建立糖尿病骨質(zhì)疏松大鼠模型:選用雌性SD大鼠,隨機分為對照組及實驗組,實驗組:選取成年雌性大鼠,用高糖高脂飼料喂養(yǎng)8周后,禁食12小時腹腔注射鏈脲佐菌素(STZ)50mg/kg,一周后重復(fù)檢查血糖濃度7.8mmol/L表示糖尿病大鼠造模成功。1周后用10%水合氯醛3.5ml/kg腹腔注射麻醉后,摘除雙側(cè)卵巢。繼續(xù)喂養(yǎng)至12周。同時納入病程相近的假手術(shù)組大鼠作為陽性對照,所有大鼠測每周體重變化,麻醉狀態(tài)下取血清應(yīng)用酶聯(lián)免疫吸附法測定大鼠骨鈣素(OC),核因子kb受體活化因子配基(RANKL),糖原合成酶激酶-3β(GSK-3β),P38絲裂原活化蛋白酶(P38-MAPK),腫瘤壞死因子(TNF-α)等細胞因子,留取兩組大鼠L6椎體和左股骨等骨標本,進行骨密度分析,HE染色形態(tài)學分析,應(yīng)用多媒體病理圖像分析軟件進行骨組織形態(tài)計量學分析。(2)將實驗組及對照組體外培養(yǎng)成骨細胞及破骨細胞,用噻唑藍比色法(MTT)以及流式細胞儀進行成骨及破骨細胞活性、細胞周期以及凋亡的檢測;用酶標儀檢測堿性磷酸酶(ALP)活性或免疫組化檢測I型膠原表達來測定成骨細胞的分化情況,通過抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色、甲苯胺藍(TB)染色、檢測破骨細胞的分化情況。細胞培養(yǎng)基分別以陰性干預(yù)劑、GSK-3β抑制劑,TNF-α拮抗劑和RANKL拮抗劑進行處理,檢測骨細胞的增殖、凋亡的變化,用RT-PCR檢測GSK-3β、TNF-α、RANKL基因水平在各分組的表達變化。【結(jié)果】(1)成功建立糖尿病大鼠骨質(zhì)疏松模型,8和12周實驗組大鼠骨密度明顯低于對照組。成功分離培養(yǎng)成骨細胞和破骨細胞。酶聯(lián)免疫吸附實驗表明,糖尿病模型組中RANKL水平,GSK-3β,p38MAPK和TNF-α明顯升高,而骨鈣素(OC)水平和胰島素(INS)均顯著降低。(2)MTT結(jié)果顯示成骨細胞的增殖在GSK-3β抑制劑均低于對照組,成骨細胞的增殖在TNF-α拮抗劑組和RANKL拮抗劑組明顯高于對照組。破骨細胞的增殖在GSK-3β抑制劑增殖均低于對照組,破骨細胞增殖在TNF-α拮抗劑組和RANKL拮抗劑組非常接近對照組。在所有的相應(yīng)的組中,實驗組骨細胞增殖明顯強于對照組。流式細胞儀顯示在GSK-3β抑制劑組中,實驗組破骨細胞的凋亡率顯著低于對照組,在TNF-α拮抗劑組,RANKL拮抗劑組中,實驗組破骨細胞的凋亡率顯著高于對照組,在GSK-3β抑制劑組,TNF-α拮抗劑組中,實驗組成骨細胞的凋亡率顯著低于對照組;在RANKL拮抗劑組,實驗組成骨細胞的凋亡率和對照組大鼠無顯著差異。RT-PCR顯示在GSK-3β抑制劑組中,TNF-α和RANKL基因表達水平均升高,但TNF-α和RANKL基因表達水平在實驗組中均略低于對照組。GSK-3β基因表達水平在TNF-α拮抗劑和RANKL拮抗劑組降低;GSK-3β基因的表達水平在實驗組明顯低于對照組�！窘Y(jié)論】1、實驗性糖尿病大鼠卵巢切除成功建立糖尿病骨質(zhì)疏松大鼠模型。糖尿病模型組中RANKL水平,GSK-3β,p38MAPK和TNF-α明顯升高,而骨鈣素(OC)水平和胰島素(INS)均顯著降低。2、在糖尿病模型大鼠中,TNF-α,GSK-3β和RANKL水平較對照組升高;GSK-3β可以促進成骨細胞和破骨細胞的增殖,并抑制TNF-α和RANKL的表達;TNF-α和RANKL對破骨細胞的增殖影響不大,抑制成骨細胞的增殖;還能促進GSK-3β表達;三者之間的相互作用,打破了成骨細胞和破骨細胞之間的平衡,參與了骨質(zhì)疏松癥的發(fā)生發(fā)展。

【關(guān)鍵詞】：
【學位授予單位】：蘇州大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R587.2;R580
【目錄】：

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