本文關(guān)鍵詞：膜型基質(zhì)金屬蛋白酶1在預(yù)血管化膜片構(gòu)建中的作用，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

《蘭州大學(xué)》 2015年

預(yù)血管化的組織工程骨膜復(fù)合β-磷酸三鈣修復(fù)大鼠顱骨臨界缺損的實(shí)驗(yàn)研究

高鵬  

【摘要】：目的：探索以大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(rat bone marrow mesenchymal stem cells,rBMSC)為基礎(chǔ),利用細(xì)胞膜片技術(shù)在體外構(gòu)建具有成骨和成血管特性的仿生無支架組織工程骨膜；并進(jìn)一步將仿生骨膜與β-TCP復(fù)合,修復(fù)大鼠顱骨臨界缺損(critical-sized calvarial defects,CSD)。方法：(1)預(yù)血管化仿生骨膜的體外構(gòu)建：全骨髓貼壁法分離培養(yǎng)rBMSC,MTT法觀察細(xì)胞生長增殖周期；rBMSC在條件誘導(dǎo)液中(10μg/l血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子,VEGF;2μg/1堿性成纖維細(xì)胞生長因子,BFGF)向血管內(nèi)皮樣細(xì)胞(endothelial-like cells,ECs)誘導(dǎo)分化,于誘導(dǎo)后14天,鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)變化,流式細(xì)胞儀檢測ECs表面標(biāo)志物CD31；將rBMSC在干細(xì)胞培養(yǎng)介質(zhì)中連續(xù)培養(yǎng)14天形成未分化膜片,并將誘導(dǎo)獲得的ECs播種于未分化rBMSC膜片上,體外構(gòu)建預(yù)血管化的細(xì)胞膜片,CD31免疫組化染色觀察膜片上血管網(wǎng)絡(luò)的形成；將rBMSC在成骨誘導(dǎo)介質(zhì)中連續(xù)培養(yǎng)14天形成膜片,14天后行堿性磷酸酶(ALP)染色,誘導(dǎo)21天后行茜素紅染色檢測細(xì)胞膜片成骨分化能力；將成骨膜片包裹β-TCP后,再與預(yù)血管化膜片復(fù)合形成仿生骨膜β-TCP復(fù)合物。體外復(fù)合培養(yǎng)3天,掃描電鏡(SEM)下觀察細(xì)胞與材料復(fù)合情況；(2)仿生骨膜／β-TCP復(fù)合體修復(fù)大鼠顱骨臨界缺損：將復(fù)合物植入大鼠顱骨8mm臨界缺損區(qū),以自體骨膜β-TCP,β-TCP,空白組作為對照組；于植入后2,4,8周處死動(dòng)物,觀察缺損區(qū)修復(fù)情況。2周標(biāo)本行HE染色,CD31免疫組化染色,并計(jì)數(shù)血管密度；4,8周標(biāo)本行X線檢測；8周標(biāo)本HE染色,Van Gieson染色,使用ImageJ軟件,計(jì)算各組標(biāo)本新骨形成量。結(jié)果：(1)貼壁的原代rBMSC呈三角形,短梭形,克隆樣生長；傳代后細(xì)胞增殖快,呈典型的長梭形,MTT檢測生長曲線呈“S”型。加入內(nèi)皮細(xì)胞誘導(dǎo)液的rBMSC,14天時(shí)細(xì)胞變短,呈圓形,橢圓形,呈典型的鋪路石樣；流式細(xì)胞儀檢測ECs轉(zhuǎn)化率為35.1%；高密度體外培養(yǎng)的rBMSC 14天時(shí),皿底可見細(xì)胞呈片狀,遮光性強(qiáng),邊緣卷曲,鑷子可提起；ECs接種到單純r(jià)BMSC膜片后7天,鏡下可見細(xì)胞重新排列；CD31免疫組化染色后鏡下可見ECs遷移,聚集,形成空泡樣結(jié)構(gòu),管腔形成；成骨誘導(dǎo)形成的rBMSC膜片14天時(shí)ALP,21天時(shí)茜素紅染色呈陽性表達(dá)；仿生骨膜β-TCP支架材料體外復(fù)合培養(yǎng)3天掃描電鏡下(SEM)可見細(xì)胞向支架材料內(nèi)部生長遷移,鋪開。(2)植入物2周時(shí),CD31免疫組化染色統(tǒng)計(jì)各組新生血管數(shù)顯示：仿生骨膜/β-TCP組血管化能力顯著高于β-TCP支架組,空白組(P0.05),與自體骨膜/β-TCP組相當(dāng)(P0.05)。植入物8周時(shí)大體觀,仿生骨膜β-TCP組,自體骨膜β-TCP組材料部分吸收,β-TCP組未見明顯吸收,空白組缺損區(qū)纖維組織覆蓋；Van Gieson染色染色統(tǒng)計(jì)分析新生骨量,仿生骨膜/β-TCP組,自體骨膜β-TCP組新骨形成量無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05),兩組均大于β-TCP支架組和空白組(P0.05)。結(jié)論：(1)全骨髓貼壁法取材簡單易于掌握,細(xì)胞增殖力強(qiáng)；經(jīng)誘導(dǎo)形成的ECs播種在rBMSC膜片上共培養(yǎng)可以形成微血管網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)；rBMSC經(jīng)成骨誘導(dǎo)后可構(gòu)建成骨分化能力的細(xì)胞膜片。(2)仿生骨膜／β-TCP可以用于大鼠顱骨臨界缺損的修復(fù)。

【關(guān)鍵詞】：
【學(xué)位授予單位】：蘭州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R78
【目錄】：

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【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 趙琳;王栓科;董平;王軍勝;劉佳;郝俊龍;吳萌;;以小腸黏膜下層基質(zhì)為支架復(fù)合骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞構(gòu)建組織工程仿生骨膜:在兔體內(nèi)的成骨及其血管化[J];中國組織工程研究與臨床康復(fù);2009年51期

【共引文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前3條

1 拓振合;陳曉飛;趙琳;魯永婷;任廣鐵;張蒼宇;庾佳佳;孫瑞;;組織工程骨膜修復(fù)兔大段骨缺損的可行性實(shí)驗(yàn)研究[J];世界科技研究與發(fā)展;2014年02期

2 張蒼宇;汪新柱;任廣鐵;拓振合;庾佳佳;孫瑞;汪靜;趙琳;;組織工程化骨膜的構(gòu)建及其在體外的成骨活性檢測[J];中國矯形外科雜志;2014年03期

3 李非;陳陽;王占長;;異種骨材料浸提液對骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞生物學(xué)特性的影響[J];中國組織工程研究;2015年36期

【二級參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前6條

1 唐光輝;裴國獻(xiàn);王興海;陳濱;曾憲利;程文俊;任義軍;魏寬海;;墨汁灌注和血管鑄型方法檢測山羊脛骨血管應(yīng)用性能的不同[J];中國臨床康復(fù);2006年21期

2 裴國獻(xiàn),魏寬海;顯微外科與血管化組織工程組織的構(gòu)建[J];中華創(chuàng)傷骨科雜志;2004年04期

3 張曉玲;戴尅戎;湯亭亭;張超;周蕓;周光炎;;未分化骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的免疫學(xué)特性研究[J];中華實(shí)驗(yàn)外科雜志;2006年02期

4 羅靜聰,楊志明;小腸黏膜下層的制備及其特性的研究進(jìn)展[J];中國修復(fù)重建外科雜志;2003年05期

5 楊志明;組織工程骨的研究成果及存在的問題[J];中國修復(fù)重建外科雜志;2005年02期

6 趙琳;史志勇;周晟;賈有福;劉佳;王軍勝;;組織工程骨膜異體體內(nèi)成骨修復(fù)兔骨缺損的初步觀察[J];中國修復(fù)重建外科雜志;2008年02期

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中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 汪群力,裴國獻(xiàn);組織工程組織血管化研究新進(jìn)展[J];中華創(chuàng)傷骨科雜志;2005年06期

2 徐天睿;李秀蘭;白人驍;;血管化的機(jī)制與其在骨缺損中的研究進(jìn)展(綜述)[J];生物醫(yī)學(xué)工程與臨床;2006年S1期

3 金行晴，邱蔚六，林國礎(chǔ);血管化和非血管化植骨骨外形和無機(jī)成分含量的比較研究[J];上海口腔醫(yī)學(xué);1994年04期

4 馬玉濤;;非血管化髂骨與血管化髂骨移植同期種植重建下頜骨節(jié)段缺損對比研究[J];安徽醫(yī)藥;2014年01期

5 吳仕和,徐迎新,李榮;肝組織器官工程血管化的研究進(jìn)展[J];中華實(shí)驗(yàn)外科雜志;2004年01期

6 孔子任;楊曉娟;田衛(wèi)東;;生長因子在脂肪組織工程血管化中的研究[J];國際口腔醫(yī)學(xué)雜志;2010年05期

7 鄭幸龍;向俊西;李建輝;呂毅;;工程組織及器官的血管化:研究現(xiàn)狀與應(yīng)用進(jìn)程[J];中國組織工程研究;2014年15期

8 孫梁;胡蘊(yùn)玉;熊卓;王萬明;潘玙;;血管化對聚酯/鈣磷鹽支架修復(fù)兔橈骨缺損及支架降解的影響[J];陜西醫(yī)學(xué)雜志;2006年07期

9 馮超;徐月敏;;尿路組織工程材料的血管化[J];中國組織工程研究與臨床康復(fù);2008年10期

10 陳俊穎;魏泓;;異種無細(xì)胞真皮組織相容性及血管化實(shí)驗(yàn)研究[J];西南國防醫(yī)藥;2009年01期

中國重要會(huì)議論文全文數(shù)據(jù)庫 前8條

1 徐天睿;李秀蘭;白人驍;;血管化的機(jī)制與其在骨缺損中的研究進(jìn)展(綜述)[A];天津市生物醫(yī)學(xué)工程學(xué)會(huì)2006年學(xué)術(shù)年會(huì)論文摘要集[C];2006年

2 韓春茂;石海飛;王新剛;毛崢偉;高長有;;復(fù)合血管生成素的人工真皮的構(gòu)建及其血管化研究[A];第六屆全國燒傷救治專題研討會(huì)論文匯編[C];2009年

3 陳欣;副島一孝;野崎斡弘;;血管內(nèi)皮細(xì)胞和/或成纖維細(xì)胞移植對人工真皮血管化的影響[A];第四屆全國燒傷救治專題研討會(huì)燒傷感染救治新進(jìn)展論文匯編[C];2006年

4 裴國獻(xiàn);魏寬海;;顯微外科與血管化組織工程組織的構(gòu)建[A];中國康復(fù)醫(yī)學(xué)會(huì)修復(fù)重建外科專業(yè)委員會(huì)第十四次全國學(xué)術(shù)交流會(huì)論文集[C];2004年

5 康曉偉;容陳;劉杰;;血管化自體頜下腺移植術(shù)中重建血液循環(huán)的手術(shù)護(hù)理配合[A];創(chuàng)建患者安全文化——中華護(hù)理學(xué)會(huì)第15屆全國手術(shù)室護(hù)理學(xué)術(shù)交流會(huì)議論文匯編（中冊）[C];2011年

6 丁學(xué)強(qiáng);楊屹強(qiáng);燕王翔;陳宇;陳丹;;血管化與非血管化髂骨瓣移植同期種植體植入整復(fù)節(jié)段性下頜骨缺損的臨床比較[A];第五次全國口腔頜面—頭頸腫瘤學(xué)術(shù)研討會(huì)論文匯編[C];2006年

7 張雷;王洋;毛馳;蔡志剛;俞光巖;;50例血管化自體頜下腺移植患者術(shù)后腺體減量臨床總結(jié)[A];第三次全國涎腺疾病學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2006年

8 張志光;焦國華;索明環(huán);匡世軍;蘇凱;;小型豬髁狀突骨軟骨組織缺損修復(fù)的血管化研究[A];第七次全國顳下頜關(guān)節(jié)病學(xué)及（牙合）學(xué)研討會(huì)暨《顳下頜關(guān)節(jié)紊亂病及口頜面疼痛的基礎(chǔ)與臨床進(jìn)展》國家級繼續(xù)教育學(xué)習(xí)班論文匯編[C];2008年

中國重要報(bào)紙全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 夏;[N];醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報(bào);2001年

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 陳元維;組織工程支架材料及其降解產(chǎn)物血管化功能的體外研究及表征方法的建立[D];四川大學(xué);2007年

2 林茂虎;組織工程化膀胱體內(nèi)血管化的實(shí)驗(yàn)研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2007年

3 劉新暉;納米級細(xì)胞型組織工程骨的構(gòu)建及其血管化的實(shí)驗(yàn)研究[D];蘇州大學(xué);2004年

4 段春光;雙基因修飾促進(jìn)組織工程化人工骨血管化的研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2009年

5 何文俊;基因修飾的胚胎干細(xì)胞作為種子細(xì)胞構(gòu)建血管化心肌組織[D];中國人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院;2010年

6 董青山;動(dòng)靜脈短路環(huán)法構(gòu)建血管化組織工程骨的實(shí)驗(yàn)研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2009年

7 鄭玉蓉;膠原/殼聚糖—明膠微球支架緩釋三七皂甙Rg1促血管化研究[D];浙江大學(xué);2014年

8 陳東;構(gòu)建組織工程化凝膠及體內(nèi)誘導(dǎo)骨壞死血管化的實(shí)驗(yàn)研究[D];華中科技大學(xué);2012年

9 王翔;應(yīng)用自體肋骨異位預(yù)構(gòu)血管化下頜骨的實(shí)驗(yàn)研究[D];武漢大學(xué);2013年

10 劉雁鳴;rhBMP-7復(fù)合rhVEGF-165肌內(nèi)誘生血管化組織工程化骨瓣的研究[D];浙江大學(xué);2009年

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 楊丹;膜型基質(zhì)金屬蛋白酶1在預(yù)血管化膜片構(gòu)建中的作用[D];蘭州大學(xué);2015年

2 高鵬;預(yù)血管化的組織工程骨膜復(fù)合β-磷酸三鈣修復(fù)大鼠顱骨臨界缺損的實(shí)驗(yàn)研究[D];蘭州大學(xué);2015年

3 馬超;可控性球形多孔β-TCP支架內(nèi)部血管化規(guī)律的研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2008年

4 石海飛;血管生成素促進(jìn)組織工程真皮支架血管化的研究[D];浙江大學(xué);2005年

5 李欣宇;預(yù)構(gòu)組織工程化頜下腺血管化的實(shí)驗(yàn)研究[D];中國醫(yī)科大學(xué);2010年

6 伍舟宏;一個(gè)血管化腫瘤化療模型的分析[D];東華大學(xué);2005年

7 桑力;多孔磷酸鈣陶瓷支架血管植入復(fù)合體的血管化與生物力學(xué)性能的研究[D];西南交通大學(xué);2013年

8 王煒;帶蒂筋膜瓣包裹組織工程骨血管化的實(shí)驗(yàn)研究[D];新疆醫(yī)科大學(xué);2011年

9 王峰亮;牛松質(zhì)骨基質(zhì)中利用動(dòng)靜脈袢誘導(dǎo)軸向血管化[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2009年

10 曲哲;血管化人工骨的體外構(gòu)建和應(yīng)用基礎(chǔ)研究[D];吉林大學(xué);2004年

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