本文關(guān)鍵詞：硫酸軟骨素A促進(jìn)成骨的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

《山東大學(xué)》 2012年

硫酸軟骨素A促進(jìn)成骨的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究

任光輝  

【摘要】：目的探討及研究硫酸軟骨素A在體內(nèi)對(duì)成骨細(xì)胞生長(zhǎng)分化及新骨生成的影響,并描述硫酸軟骨素A在骨缺損修復(fù)中的組織學(xué)進(jìn)程,以及與骨粉、硫酸軟骨素粉與骨粉混合物之間在成骨作用方面的比較,為臨床應(yīng)用提供理論依據(jù) 方法建立動(dòng)物實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ?選用新西蘭大耳兔作為實(shí)驗(yàn)動(dòng)物,年齡8～12月,體重2～3kg,共18只,隨機(jī)分為三組,每組五只(標(biāo)記為A、B、C),嚴(yán)格無(wú)菌條件下在其下頜骨下緣實(shí)施手術(shù),1%戊巴比妥鈉耳緣靜脈注射,待麻藥生效后,在下頜骨下緣作長(zhǎng)約4cm的切口,分離粘膜,肌層,暴露骨面,保留骨膜,在距下頜骨下緣3mm,下頜角前緣5mm處,用球鉆制備大小約15mm×6mm×4mm的缺損,在每組五只兔子的左右側(cè)缺損中各植入A(BI組)：Bio-oss骨粉,B(CS組)：無(wú)菌的低壓凍干的硫酸軟骨素粉劑(0.936mg)、C(CS-BI組)：硫酸軟骨素與Bio-oss骨粉的混合物(其中硫酸軟骨素粉劑0.936mg),分層縫合傷口。術(shù)后給予慶大霉素肌肉注射五日以防感染。三組兔子分別飼養(yǎng)30-90d。在術(shù)后第23,53,83d分別給予鈣黃綠素(10mg/k g),茜素紅(30mg/k g)頸部皮下注射,并在術(shù)后30d,60d,90d,每次每組兩只動(dòng)物,經(jīng)耳緣靜脈空氣栓塞處死后,切取下頜骨,進(jìn)行大體觀察,鋸下手術(shù)處骨段,制作硬組織及脫鈣組織切片。 1.HE染色：觀察細(xì)胞組織形態(tài)學(xué),成骨細(xì)胞的位置、形態(tài)結(jié)構(gòu)及數(shù)量,新生骨質(zhì)的量及結(jié)構(gòu),骨小梁的位置、形態(tài)結(jié)構(gòu)及數(shù)量,顯示細(xì)胞構(gòu)成,推斷其功能狀態(tài)。 2.熒光標(biāo)記顯微法顯示新生骨部位及骨代謝活躍狀況： 結(jié)果15只兔子均無(wú)感染及死亡。組織學(xué)檢查：30d時(shí),CS組和BI組的骨缺損區(qū)存在大量纖維組織,有較多的炎性細(xì)胞浸潤(rùn),只有極少量的成骨細(xì)胞;而CS-BI組的骨缺損區(qū)則有豐富的血運(yùn),并開始有成骨細(xì)胞及少量未成熟的骨質(zhì)出現(xiàn);60d時(shí),CS組和BI組雖有少量的新生骨的生成,但仍有大部分的纖維組織包繞,有哈弗式管樣結(jié)構(gòu)出現(xiàn),有少量的材料未完全吸收:CS-BI組可見視野中開始有部分成熟骨出現(xiàn),剩余部分有鈣化跡象,成骨細(xì)胞核固縮多見,血運(yùn)豐富;90d時(shí),三組有部分成熟骨出現(xiàn),但是骨髓腔中央有壞死并且有些也有壞死跡象;CS-BI組缺損區(qū)已基本充滿成熟骨質(zhì),大量哈弗式管的出現(xiàn),成骨細(xì)胞核固縮的跡象充滿視野。HE染色的骨定量分析,CS組、BI組之間骨再生情況無(wú)顯著差異,而CS-BI組的骨再生值高于上述兩組。新生骨所占面積百分?jǐn)?shù)各組各時(shí)間點(diǎn)均數(shù)和標(biāo)準(zhǔn)差如下：30d時(shí),CS組14.43±4.42：BI組15.13±9.05：CS-BI組45.06±4.13：60d時(shí),CS組36.13±3.19：BI組37.06±4.78：CS-BI組65.72±9.29;90d時(shí),CS組64.09±9.32;BI組64.18±11.98;CS-BI組87.78±8.13。 結(jié)論1.硫酸軟骨素A能夠促進(jìn)新骨生成、縮短骨質(zhì)修復(fù)再生的期限。 2..硫酸軟骨素A與骨粉聯(lián)合應(yīng)用較CS-A或BI單獨(dú)應(yīng)用對(duì)骨缺損再生效果好。 理論意義：骨缺損在種植臨床中多見,很多患者需要單純植骨。影響骨再生的因素主要包括以下幾個(gè)方面：1.有分化增值能力的原始細(xì)胞,2.調(diào)控骨發(fā)生的多種生物活性物質(zhì),3.適合細(xì)胞生長(zhǎng)并有利于恢復(fù)原有的骨形態(tài)及骨連續(xù)性的微環(huán)境和框架結(jié)構(gòu),4.機(jī)體本身所提供的營(yíng)養(yǎng)和血供。超微結(jié)構(gòu)技術(shù)顯示在骨與鈦種植體界面出現(xiàn)厚為20-50nm寬的無(wú)細(xì)胞的有機(jī)層,富含蛋白多糖(proetoglycan, PG),有人認(rèn)為這種非膠原的結(jié)締組織成分,尤其是構(gòu)成蛋白多糖空間結(jié)構(gòu)的氨基多糖(glycosaminoglycan, GAG)鏈?zhǔn)菐ж?fù)極性的鈦表面氧化層與細(xì)胞相互反應(yīng)的最初的橋梁物質(zhì)。迄今為止的研究表明,蛋白多糖是最先與種植體表面發(fā)生粘附的物質(zhì)。蛋白多糖(proetoglycan, PG)是一類重要的生物大分子物質(zhì),是細(xì)胞外基質(zhì)的主要成分,由核心蛋白和氨基多糖構(gòu)成。氨基多糖由重復(fù)的二糖組成,含有大量的硫酸和羧酸基團(tuán)。由于蛋白多糖特殊的理化性質(zhì),它被認(rèn)為是細(xì)胞外基質(zhì)中具有多種功能的大分子物質(zhì)。它能與細(xì)胞外其他物質(zhì)發(fā)生粘附,調(diào)節(jié)細(xì)胞的分化、參與基質(zhì)的結(jié)合；保持細(xì)胞外基質(zhì)的水分和離子濃度等。成骨細(xì)胞的分化及骨的沉積等一系列的生物化學(xué)進(jìn)程可分為細(xì)胞增殖、細(xì)胞外基質(zhì)的聚集及礦化等不同的時(shí)期,細(xì)胞外基質(zhì)分子在骨組織生長(zhǎng)和成骨細(xì)胞分化過程中起著重要作用。在骨質(zhì)礦化過程中蛋白多糖的作用還存在爭(zhēng)論：有研究認(rèn)為它是骨質(zhì)礦化的抑制劑,蛋白多糖降解后能使骨中的羥基磷灰石沉積；另一些研究認(rèn)為蛋白多糖由于能吸附鈣離子,在局部造成高鈣離子的環(huán)境,有利于礦化的形成。體外實(shí)驗(yàn)研究表明游離于溶液中的蛋白多糖或氨基多糖能抑制亞穩(wěn)定狀態(tài)磷酸鈣溶液中羥基磷灰石的形成,而將它們固定于膠原上卻能誘導(dǎo)及加速羥基磷灰石的沉積。同樣,將蛋白多糖與膠原復(fù)合植入皮下能誘導(dǎo)異位礦化的形成。硫酸軟骨素A(chondroitin sulfate,CS-A)是動(dòng)物體內(nèi)分布最為廣泛的氨基多糖,在人牙槽骨內(nèi)占氨基多糖的90%以上,是礦化過程中必須的因素,其在骨愈合中的作用尚未明了,成為許多學(xué)者的研究方向。體外實(shí)驗(yàn)表明一定濃度的硫酸軟骨素溶液能促進(jìn)人胚成骨細(xì)胞的增值。 應(yīng)用價(jià)值：1,臨床應(yīng)用潛力巨大：骨量不足是口腔種植手術(shù)中面臨的主要問題,相當(dāng)多的患者在種植牙前已經(jīng)面臨相當(dāng)長(zhǎng)的缺牙期,需要單獨(dú)進(jìn)行植骨,因而骨增量技術(shù)是種植技術(shù)的重要組成部分,正常骨成熟期通常較長(zhǎng),約為3個(gè)月左右,因?yàn)榧s50-100個(gè)成骨細(xì)胞的成骨量才相當(dāng)于1個(gè)破骨細(xì)胞的吸收量。骨粉作為一種成熟的骨引導(dǎo)藥物已在臨床廣泛應(yīng)用多年,但單純骨粉并不能縮短骨愈合的時(shí)間,在骨增量技術(shù)相當(dāng)成熟的今天,如何能縮短成骨時(shí)間成為關(guān)注的焦點(diǎn)。種植修復(fù)時(shí)間縮短將會(huì)使得更多的患者接受種植,改善咀嚼效率及美觀效果,提高患者的生活質(zhì)量,帶來(lái)良好的社會(huì)效益及經(jīng)濟(jì)效益。 2,市場(chǎng)前景廣闊：硫酸軟骨素來(lái)源于魚骨等,原料來(lái)源廣闊,成本低廉,符合國(guó)家打造藍(lán)色經(jīng)濟(jì)的大目標(biāo)。硫酸軟骨素目前在全國(guó)有接近2000噸的產(chǎn)量,大部分用于出口,用于保健品、食品添加劑以及寵物食品等方面的應(yīng)用,用于補(bǔ)充體內(nèi)的硫酸軟骨素等氨基葡聚糖。在國(guó)內(nèi),用于藥品的硫酸軟骨素用量大概為3噸左右,主要用于降血脂、抗炎等方面,在促進(jìn)成骨方面尚未有相關(guān)應(yīng)用,如上述實(shí)驗(yàn)結(jié)果得到確認(rèn),將會(huì)為硫酸軟骨素的臨床應(yīng)用提供一定的理論依據(jù),在一定程度上指導(dǎo)臨床應(yīng)用,形成一種新的可以市場(chǎng)化的促進(jìn)骨生成的藥物,其良好的生物安全性能明確后可進(jìn)行進(jìn)一步臨床實(shí)驗(yàn),實(shí)驗(yàn)結(jié)果肯定后,可用于骨礦化及骨缺損方面的治療.且硫酸軟骨素相對(duì)于其他的骨再生材料成本要低,如在臨床推廣使用,可大大降低患者的臨床手術(shù)費(fèi)用。

【關(guān)鍵詞】：
【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2012
【分類號(hào)】：R782
【目錄】：

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【參考文獻(xiàn)】

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7 許屏;王淑蘭;葉耐永;;軟骨細(xì)胞分化的螢光顯微鏡觀察[J];吉林大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);1964年01期

8 吳德誠(chéng);潘文桃;詹德良;;硫酸軟骨素A肌肉注射加倍劑量治療冠心病的療效觀察[J];新醫(yī)藥通訊;1979年03期

9 沈渤江;張?zhí)烀?畢見福;馬淑濤;;硫酸軟骨素含量測(cè)定方法的探討[J];中國(guó)生化藥物雜志;1990年04期

10 ;動(dòng)物實(shí)驗(yàn)性肝纖維化中硫酸軟骨素的定位研究[J];第二軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào);1995年05期

中國(guó)重要會(huì)議論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 張?zhí)烀?凌沛學(xué);;硫酸軟骨素的過去、現(xiàn)在和將來(lái)[A];2010年中國(guó)藥學(xué)大會(huì)暨第十屆中國(guó)藥師周論文集[C];2010年

2 張?zhí)烀?凌沛學(xué);邊玲;;硫酸軟骨素生產(chǎn)工藝研究進(jìn)展[A];2010年中國(guó)藥學(xué)大會(huì)暨第十屆中國(guó)藥師周論文集[C];2010年

3 張青;凌沛學(xué);;硫酸軟骨素在眼科中的應(yīng)用[A];2010年中國(guó)藥學(xué)大會(huì)暨第十屆中國(guó)藥師周論文集[C];2010年

4 陳磊;凌沛學(xué);;硫酸軟骨素在骨科中的應(yīng)用[A];2010年中國(guó)藥學(xué)大會(huì)暨第十屆中國(guó)藥師周論文集[C];2010年

5 張秀娟;張麗娟;季宇彬;;硫酸軟骨素的生物活性及應(yīng)用研究進(jìn)展[A];全國(guó)生物多樣性保護(hù)及外來(lái)有害物種防治交流研討會(huì)論文集[C];2008年

6 高華;;硫酸軟骨素及蛋白質(zhì)的清潔化生產(chǎn)新工藝研究[A];2008年度山東省藥學(xué)會(huì)藥物化學(xué)與抗生素專業(yè)委員會(huì)年會(huì)會(huì)議論文及大會(huì)報(bào)告摘要[C];2008年

7 徐慶陽(yáng);王振聲;陳寧;王福榮;;硫酸軟骨素提取純化新工藝[A];第一屆全國(guó)化學(xué)工程與生物化工年會(huì)論文摘要集(下)[C];2004年

8 張?zhí)烀?凌沛學(xué);;硫酸軟骨素的過去、現(xiàn)在和將來(lái)[A];2009年中國(guó)藥學(xué)大會(huì)暨第九屆中國(guó)藥師周論文集[C];2009年

9 張青;凌沛學(xué);;硫酸軟骨素在眼科中的應(yīng)用[A];2009年中國(guó)藥學(xué)大會(huì)暨第九屆中國(guó)藥師周論文集[C];2009年

10 陳磊;凌沛學(xué);;硫酸軟骨素在骨科中的應(yīng)用[A];2009年中國(guó)藥學(xué)大會(huì)暨第九屆中國(guó)藥師周論文集[C];2009年

中國(guó)重要報(bào)紙全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 記者 楊俊堅(jiān);[N];醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報(bào);2011年

2 中國(guó)醫(yī)保商會(huì) 榮嫡;[N];中國(guó)醫(yī)藥報(bào);2010年

3 張倫;[N];醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報(bào);2006年

4 ;[N];中國(guó)畜牧獸醫(yī)報(bào);2007年

5 王樂民;[N];健康報(bào);2008年

6 綜合;[N];醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報(bào);2008年

7 馬文蕊;[N];河北經(jīng)濟(jì)日?qǐng)?bào);2006年

8 呂諾;[N];新華每日電訊;2008年

9 本報(bào)記者 賈芳 常素莉;[N];河北經(jīng)濟(jì)日?qǐng)?bào);2006年

10 李雪墨;[N];中國(guó)醫(yī)藥報(bào);2008年

中國(guó)博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 閻繼紅;組織工程化人工軟骨的實(shí)驗(yàn)研究[D];中國(guó)協(xié)和醫(yī)科大學(xué);2005年

2 徐海星;用于神經(jīng)修復(fù)的自組裝材料及導(dǎo)電材料的研究[D];武漢理工大學(xué);2007年

3 張水華;金屬蛋白酶在大鼠視神經(jīng)擠壓傷的表達(dá)及意義[D];中國(guó)人民解放軍軍醫(yī)進(jìn)修學(xué)院;2003年

4 何忠野;硫酸軟骨素減輕實(shí)驗(yàn)性急性壞死性胰腺炎胰腺腺泡細(xì)胞損傷機(jī)制的研究[D];中國(guó)醫(yī)科大學(xué);2007年

5 楊洪義;膠原基組織工程支架材料的研究[D];中國(guó)協(xié)和醫(yī)科大學(xué);2001年

6 陳士國(guó);幾種海洋動(dòng)物酸性多糖的結(jié)構(gòu)和活性研究[D];中國(guó)海洋大學(xué);2010年

7 姜雅秋;高同型半胱氨酸血癥致動(dòng)脈粥樣硬化的機(jī)制及藥物干預(yù)的實(shí)驗(yàn)研究[D];吉林大學(xué);2008年

8 呂惠中;原發(fā)性肝癌組織中糖胺聚糖組成與結(jié)構(gòu)的變化[D];中國(guó)海洋大學(xué);2007年

9 范宏斌;體內(nèi)誘導(dǎo)骨髓基質(zhì)干細(xì)胞修復(fù)兔關(guān)節(jié)軟骨缺損及其相關(guān)研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2006年

10 范文霞;牛角膜內(nèi)皮細(xì)胞玻璃化冷凍保護(hù)劑及組織低溫?cái)嗔严椒ǖ难芯縖D];大連理工大學(xué);2009年

中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 陳亞;硫酸軟骨素生產(chǎn)工藝的優(yōu)化研究[D];華東理工大學(xué);2010年

2 謝果凰;鯊魚硫酸軟骨素的分離提純及其抗氧化功能的研究[D];寧波大學(xué);2010年

3 努爾尼都司·阿依提哈孜;基于蛋白酶催化位點(diǎn)分離硫酸軟骨素與膠原蛋白[D];北京化工大學(xué);2013年

4 徐瑞聰;羊軟骨硫酸軟骨素的提取分離及抗氧化活性研究[D];北京林業(yè)大學(xué);2011年

5 呂惠中;硫酸軟骨素的分離純化及其抗凝血作用的研究[D];青島大學(xué);2003年

6 張蓮;硫酸軟骨素寡糖的制備及其體外抗氧化活性研究[D];江南大學(xué);2012年

7 任光輝;硫酸軟骨素A促進(jìn)成骨的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究[D];山東大學(xué);2012年

8 張世磊;硫酸軟骨素滴眼液抑菌劑的選擇研究[D];山東大學(xué);2011年

9 李連;硫酸軟骨素關(guān)鍵質(zhì)量環(huán)節(jié)近紅外光譜分析技術(shù)的應(yīng)用研究[D];山東大學(xué);2012年

10 孫豐梅;硫酸軟骨素的提取及其降血脂、抗氧化保健功能的研究[D];河北農(nóng)業(yè)大學(xué);2003年

  本文關(guān)鍵詞：硫酸軟骨素A促進(jìn)成骨的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：183932