本文關(guān)鍵詞：抗牙齦卟啉單胞菌卵黃免疫球蛋白的制備、純化和生物學(xué)功能鑒定，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

《安徽醫(yī)科大學(xué)》 2015年

抗牙齦卟啉單胞菌卵黃免疫球蛋白的制備、純化和生物學(xué)功能鑒定

董瑤  

【摘要】：目的制備特異性抗牙齦卟啉單胞菌(Porphyromonas gingivalis,P.g i n g i v a l s)的雞卵黃免疫球蛋白(I m m u n o g l o b u l i n o f Yo l k,I g Y),用兩步硫銨沉淀法純化總Ig Y,并鑒定和檢測該卵黃抗體的生物學(xué)性能。方法厭氧培養(yǎng)P.gingivals,將甲醛滅活的P.gingivals經(jīng)翅膀下淺層肌肉免疫150天齡羅曼母雞3次,每次間隔10d。取雞蛋用兩步硫酸銨沉淀法提取Ig Y,BCA法測定蛋白質(zhì)含量,酶聯(lián)免疫吸附(enzyme-linked i m m u n o s o r b e n t a s s a y,E L L S A)檢測純化后I g Y特異性和抗體效價變化,并進(jìn)行十二烷基磺酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)和蛋白質(zhì)印跡(Westernblotting)分析。觀察抗Pg-Ig Y抑制紅細(xì)胞凝集。結(jié)果經(jīng)3次免疫后,Pg-Ig Y抗體滴度最高可達(dá)25600,純化后每個雞蛋可得約70mg總Ig Y,經(jīng)SDS-PAGE分析,純化的Ig Y有1條主要蛋白帶,相對分子質(zhì)量(Mr)為180KDa,純度為65%,Western blotting分析發(fā)現(xiàn)該Ig Y抗體可以識別抗原P.gingivals。1mg/ml Pg-Ig Y可以有效抑制P.g i n g i v a l s生長。每孔3.1 2 5 u g P g-I g Y可以有效抑制P.g i n g i v a l s的紅細(xì)胞凝集活性。結(jié)論本研究得到的Ig Y產(chǎn)量和純度高,特異性強(qiáng),在體外能夠特異性地結(jié)合P.gingivals,能夠有效抑制P.gingivals的紅細(xì)胞凝集活性。

【關(guān)鍵詞】：
【學(xué)位授予單位】：安徽醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R780.2
【目錄】：

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