本文關鍵詞：CYP19A1及雌激素對阿爾茨海默病作用的研究

  更多相關文章： 阿爾茨海默病 雌激素 CYP19A1

【摘要】：目的：探究CYP19A1基因的過表達及雌激素對阿爾茨海默病細胞模型的影響,為闡述CYP19A1、雌激素與阿爾茨海默病的內在關系提供實驗依據(jù)。方法：1.取胎齡為18-19d的C57BL/6J胎鼠,分離海馬組織。采用胰酶消化法進行原代培養(yǎng),倒置相差顯微鏡下觀察細胞的生長狀態(tài),采用微管蛋白相關標志物2(MAP2)及Hoechst 33258免疫熒光染色鑒定海馬神經(jīng)元純度。2.用Aβ25-35處理海馬神經(jīng)元建立阿爾茨海默病細胞模型。設不同濃度梯度的Aβ25-35作用于海馬神經(jīng)元48h,用CCK-8法檢測細胞活性,確定Aβ25-35最佳AD模型造模濃度。3.用不同濃度的17β-雌二醇作用加入到Aβ25-35處理的阿爾茨海默病細胞模型中,48h后用CCK-8法檢測細胞活性,以及用Hoechst 33258染核檢測細胞凋亡情況。4.利用模板質粒H4134,采用聚合酶鏈反應(PCR)擴增出CYP19A1基因片段；用限制性內切酶Spe I-HF和XbaI酶酶切pLenti-CMV-EGFP-P2A-MCS-3FLAG(H138)表達載體；使用無縫克隆試劑盒將CYP19A1基因片段和線性化載體連接；運用PCR方法鑒定陽性克隆的pLenti-CMV-EGFP-P2A-CYP19A1載體。使用Obio轉染試劑進行慢病毒包裝,運用定量聚合酶鏈反應(qPCR)法行滴度檢測；并用重組慢病毒轉染人胚腎細胞(293T),觀察GFP表達并用Western Blot檢測目的質粒的表達情況。從而構建CYP19A1過表達慢病毒。5.CYP19A1過表達慢病毒轉染海馬神經(jīng)元,72h后用Aβ25-35處理造模。48h后,用CCK-8法檢測細胞活性,用Hoechst 33258染核檢測細胞凋亡情況。成果：1.本課題所采用方法培養(yǎng)的海馬神經(jīng)元生長狀態(tài)良好,且能穩(wěn)定存活至3w；神經(jīng)元的純度可達95%。2.穩(wěn)定建立了海馬神經(jīng)元阿爾茨海默病細胞模型,確立Aβ25-35的造模濃度為20uM。3.10-4 mol/L、10-5mol/L濃度17β-雌二醇可對抗Aβ25-35處理的海馬神經(jīng)元阿爾茨海默病細胞模型的活性損傷和細胞凋亡,對海馬神經(jīng)元有保護作用。4.成功獲得了陽性克隆的pLenti-CMV-EGFP-P2A-CYP19A1載體。并成功轉染了293T細胞,目的質粒在細胞中成功表達。成功構建了CYP19A1過表達慢病毒。5. CYP19A1過表達慢病毒能在海馬神經(jīng)元中成功轉染,海馬神經(jīng)元經(jīng)過CYP19A1過表達慢病毒轉染后能對抗Aβ25-35處理的海馬神經(jīng)元阿爾茨海默病細胞模型的活性損傷和細胞凋亡。結論：在阿爾茨海默病細胞模型中CYP19A1過表達及雌激素可對抗由Aβ25-35引起的活性損傷和細胞凋亡,即CYP19A1過表達及雌激素對阿爾茨海默病具有保護作用。
【關鍵詞】：阿爾茨海默病 雌激素 CYP19A1
【學位授予單位】：廣州中醫(yī)藥大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R749.16
【目錄】：

• 摘要3-5
• Abstract5-10
• 引言10-12
• 第一章 文獻研究12-17
• 1.1 阿爾茨海默病12-13
• 1.1.1 概述12
• 1.1.2 流行病學12
• 1.1.3 病理特征及發(fā)病機制12-13
• 1.1.4 遺傳因素13
• 1.2 雌激素與阿爾茨海默病13-15
• 1.2.1 阿爾茨海默病患病率的性別差異13-14
• 1.2.2 雌激素對阿爾茨海默病的作用14
• 1.2.3 雌激素對阿爾茨海默病的作用機制14-15
• 1.3 CYP19A1與阿爾茨海默病15-17
• 1.3.0 CYP的簡介15
• 1.3.1 CYP19A1的簡介15
• 1.3.2 CYP19A1與阿爾茨海默病的研究進展15-17
• 第二章 海馬神經(jīng)元的培養(yǎng)與鑒定17-23
• 2.1 實驗材料17-18
• 2.1.1 實驗動物17
• 2.1.2 主要耗材17
• 2.1.3 主要實驗試劑17
• 2.1.4 主要儀器設備17-18
• 2.1.5 主要溶液配制18
• 2.2 實驗方法18-20
• 2.2.1 原代海馬神經(jīng)元的培養(yǎng)18-19
• 2.2.2 免疫熒光鑒定海馬神經(jīng)元19-20
• 2.3 實驗結果20-21
• 2.3.1 原代海馬神經(jīng)元20-21
• 2.3.2 海馬神經(jīng)元免疫熒光鑒定21
• 2.4 討論21-23
• 第三章 雌激素對Aβ_(25-35)誘導的阿爾茨海默病細胞模型的作用23-30
• 3.1 實驗材料23-24
• 3.1.1 實驗動物23
• 3.1.2 主要耗材23
• 3.1.3 主要實驗試劑23
• 3.1.4 主要儀器設備23
• 3.1.5 主要溶液配制23-24
• 3.2 實驗方法24-25
• 3.2.1 原代海馬神經(jīng)元的培養(yǎng)24
• 3.2.2 藥物處理24
• 3.2.3 細胞活力檢測24-25
• 3.2.4 海馬神經(jīng)元凋亡的檢測25
• 3.3 統(tǒng)計學分析25-26
• 3.4 實驗結果26-29
• 3.4.1 Aβ_(25-35)最佳造模濃度26
• 3.4.2 DMSO溶媒稀釋比的選擇26-27
• 3.4.3 17β-雌二醇對Aβ_(25-35)損傷的阿爾茨海默病細胞模型的作用27-29
• 3.5 討論29-30
• 第四章 CYP19A1過表達慢病毒的構建及鑒定30-45
• 4.1 實驗材料30-31
• 4.1.1 質粒、菌株與細胞30
• 4.1.2 主要耗材30
• 4.1.3 主要酶與試劑30
• 4.1.4 主要儀器設備30-31
• 4.1.5 1主要溶液配制31
• 4.2 實驗方法31-41
• 4.2.1 CYP19A1熒光表達載體的構建31-36
• 4.2.2 過表達CYP19A1的慢病毒包裝及純化36-41
• 4.3 實驗結果41-44
• 4.3.1 CYP19A1序列的PCR擴增41-42
• 4.3.2 CYP19A1載體酶切測序結果42-43
• 4.3.3 慢病毒滴度的測定43
• 4.3.4 目的質粒的表達情況的檢測43-44
• 4.4 討論44-45
• 第五章 CYP19A1過表達對阿爾茨海默病細胞模型的作用研究45-52
• 5.1 實驗材料45
• 5.1.1 實驗動物45
• 5.1.2 主要耗材45
• 5.1.3 主要實驗試劑45
• 5.1.4 主要儀器設備45
• 5.1.5 主要溶液配制45
• 5.2 實驗方法45-47
• 5.2.1 慢病毒感染海馬神經(jīng)元的最適感染復數(shù)的確定45-46
• 5.2.2 CCK-8檢測慢病毒轉染對AD細胞模型活性影響46
• 5.2.3 Hoechst 33258檢測慢病毒轉染對AD細胞模型凋亡的影響46-47
• 5.3 統(tǒng)計學分析47
• 5.4 實驗結果47-50
• 5.4.1 最適感染復數(shù)的確定47-49
• 5.4.2 CYP19A1過表達對Aβ_(25-35)引起的海馬神經(jīng)元活性損傷的影響49
• 5.4.3 CYP19A1過表達對Aβ_(25-35)引起的海馬神經(jīng)元凋亡的影響49-50
• 5.5 討論50-52
• 結語52-53
• 參考文獻53-57
• 附錄57-58
• 在校期間發(fā)表論文情況58-59
• 致謝59-60
• 統(tǒng)計學審核證明60

【相似文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 逢迎春　,王壽先,宋保華;早年生活危險因素與阿爾茨海默病的發(fā)生[J];國外醫(yī)學(兒科學分冊);2000年06期

2 ;阿爾茨海默病患者常有額葉損害[J];河南醫(yī)學研究;2000年03期

3 柴延豐,陳哲宇;阿爾茨海默病研究又有新進展[J];中國神經(jīng)科學雜志;2000年04期

4 菲琳;;可緩解阿爾茨海默病病情的新藥[J];國外醫(yī)學情報;2000年02期

5 汪義朋,王建枝;早老素-1對阿爾茨海默病相關蛋白調節(jié)的可能途徑[J];中華神經(jīng)科雜志;2001年01期

6 邵千里;15例阿爾茨海默病的診治[J];貴陽醫(yī)學院學報;2001年03期

7 ;工業(yè)化社區(qū)阿爾茨海默病發(fā)病率較高[J];河南醫(yī)學研究;2001年03期

8 邵梅,湯薈冬;阿爾茨海默病天冬氨酸特異性半胱氨酸蛋白酶研究進展[J];上海第二醫(yī)科大學學報;2001年05期

9 ;腦器質性精神障礙[J];國外科技資料目錄.醫(yī)藥衛(wèi)生;2001年04期

10 吳傳深 ,周東豐 ,Peter Como ,張林 ,Karl Kieburtz ,范金虎 ,喬友林;河南林縣阿爾茨海默病患病率的調查[J];中華精神科雜志;2002年04期

中國重要會議論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 陳梅芳;;阿爾茨海默病的行為和精神癥狀及相關因素分析[A];2009年浙江省醫(yī)學會精神病學學術年會暨浙江省醫(yī)師協(xié)會精神科醫(yī)師分會第二屆年會論文匯編[C];2009年

2 杜麗華;;阿爾茨海默病治療[A];中華醫(yī)學會第七次全國神經(jīng)病學學術會議論文匯編[C];2004年

3 成林平;黃紹寬;李玉梅;王延平;鄧曉瑩;;維生素干預治療對阿爾茨海默病患者血漿同型半胱氨酸水平的影響[A];中華醫(yī)學會第八次全國老年醫(yī)學學術會議論文匯編[C];2007年

4 唐微韻;;阿爾茨海默病患者照料工作中的心理慰藉問題探討[A];第10次全國精神病學術交流會暨《中國民康醫(yī)學》創(chuàng)刊20周年慶典論文匯編[C];2008年

5 周東升;徐銀兒;連國民;于暢;陳中鳴;;老年人生活方式與阿爾茨海默病相關性研究[A];2013浙江省醫(yī)學會精神病學分會學術年會暨浙江省醫(yī)師協(xié)會精神科醫(yī)師分會第六屆年會論文匯編[C];2013年

6 于恩彥;;對阿爾茨海默病認識的進展[A];2013年浙江省醫(yī)學會精神病學分會老年精神障礙學組學術會議論文匯編[C];2013年

7 郭忠偉;陳煒;;~1H-MRS在阿爾茨海默病早期診治中的應用[A];2013年浙江省醫(yī)學會精神病學分會老年精神障礙學組學術會議論文匯編[C];2013年

8 于恩彥;朱俊鵬;王玨;王欣慰;譚云飛;廖崢孌;仇雅菊;汪宏;;阿爾茨海默病的“早期-全面-系統(tǒng)-長期”預防[A];第七屆全國心理衛(wèi)生學術大會論文匯編[C];2014年

9 崔德華;;腦衰老因素在阿爾茨海默病的發(fā)病中的所起的作用及防治[A];2009全國抗衰老與老年癡呆學術會議論文匯編[C];2009年

10 陳生弟;楊紅旗;孫治坤;崔佩菁;王紅梅;;阿爾茨海默病的若干發(fā)病機制及治療新靶點研究[A];2009全國抗衰老與老年癡呆學術會議論文匯編[C];2009年

中國重要報紙全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 編譯 姚立新;阿爾茨海默病防治:缺乏靈丹妙藥[N];醫(yī)藥經(jīng)濟報;2010年

2 記者 劉正午;阿爾茨海默病成歐美第二大憂患[N];醫(yī)藥經(jīng)濟報;2011年

3 長沙市第一醫(yī)院神經(jīng)醫(yī)學中心主任、主任醫(yī)師 王愛民;您了解阿爾茨海默病嗎？[N];大眾衛(wèi)生報;2012年

4 長沙市第一醫(yī)院神經(jīng)醫(yī)學中心主任、主任醫(yī)師 王愛民;門診可排查阿爾茨海默病[N];大眾衛(wèi)生報;2012年

5 本報記者 李穎;為阿爾茨海默病正名[N];科技日報;2012年

6 上海市中醫(yī)老年醫(yī)學研究所教授 林水淼;阿爾茨海默病權變治療可延緩病情進展[N];健康報;2013年

7 吳志 李淼;警惕盯上老年人的“殺手”阿爾茨海默病[N];科技日報;2013年

8 孫琳 本報記者 李穎;你是否關注阿爾茨海默��？[N];科技日報;2014年

9 本報記者 李蘊明;阿爾茨海默病困局待解[N];醫(yī)藥經(jīng)濟報;2014年

10 櫻子 整理;為何阿爾茨海默病患者常迷路[N];醫(yī)藥經(jīng)濟報;2014年

中國博士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 呂英茹;阿爾茨海默病的MRI結構與功能研究[D];復旦大學;2014年

2 楊平;中國南方人群阿爾茨海默病易感基因篩查及可能機制[D];復旦大學;2014年

3 李毅;FDG和PiB PET顯像在Alzheimer's Disease早期診斷及臨床分型中的應用研究[D];山東大學;2015年

4 矯樹生;依達拉奉對阿爾茨海默病的防治作用及其機制研究[D];第三軍醫(yī)大學;2015年

5 李工博;殺蟲劑DDT和hnRNPA1基因在阿爾茨海默病中的作用及分子機制研究[D];第三軍醫(yī)大學;2015年

6 鄧青山;DISC1改善阿爾茨海默病APPswe/PS1dE9雙轉基因模型鼠認知功能的實驗研究[D];南方醫(yī)科大學;2015年

7 朱小群;磁共振波譜在輕度認知功能損害和阿爾茨海默病中的應用[D];安徽醫(yī)科大學;2015年

8 姜紅燕;云南漢族早發(fā)阿爾茨海默病家系的遺傳學研究[D];云南大學;2015年

9 徐志鵬;糖原合成酶激酶-3β在阿爾茨海默病及2型糖尿病發(fā)病中的作用[D];華中科技大學;2015年

10 李楠;人源性阿爾茨海默病噬菌體抗體庫的構建及Aβ單鏈抗體的篩選與初步效價研究[D];鄭州大學;2016年

中國碩士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 蔣剛;蟻群算法在求解阿爾茨海默病最優(yōu)微陣列上的應用[D];四川師范大學;2011年

2 周江霖;應用點著色聚類方法識別阿爾茨海默病致病基因[D];四川師范大學;2012年

3 付成燕;護士對阿爾茨海默病的認知及其影響因素的研究[D];泰山醫(yī)學院;2014年

4 婁艷芳;非藥物療法干預阿爾茨海默病的臨床療效研究[D];河北醫(yī)科大學;2015年

5 馬杭琨;中藥對照多奈哌齊治療阿爾茨海默病的Meta分析[D];北京中醫(yī)藥大學;2016年

6 劉一川;天芪益智方對阿爾茨海默病大鼠突觸功能的影響[D];北京中醫(yī)藥大學;2016年

7 馬洪明;田金洲教授學術思想與臨床經(jīng)驗總結及其治療阿爾茨海默病用藥規(guī)律研究[D];北京中醫(yī)藥大學;2016年

8 張佳佳;天芪益智顆粒對阿爾茨海默病模型大鼠炎癥反應的保護作用[D];北京中醫(yī)藥大學;2016年

9 殷凱林;CART通過調節(jié)MAPK和AKT通路抑制β淀粉樣蛋白沉積改善阿爾茨海默病認知功能的相關研究[D];南京大學;2014年

10 姜榮;V11抗阿爾茨海默病作用[D];南京大學;2014年

，

本文編號：594503