背景與目的 阿爾茨海默病是一種退行性腦病,也是癡呆癥的最常見病因。在阿爾茨海默病中,執(zhí)行認(rèn)知功能的神經(jīng)元的損傷導(dǎo)致癡呆癥的發(fā)生;在晚期執(zhí)行基本身體功能的神經(jīng)元也會損傷,從而導(dǎo)致患者臥床不起,最終死于各種并發(fā)癥。CXCL1是一種重要的趨化因子。在患有早期與非常早期阿爾茨海默病的患者的腦脊液中,CXCL1升高并且被認(rèn)為是早期聯(lián)合診斷阿爾茨海默病的指標(biāo)之一。APP/PS1小鼠表達(dá)突變型人類早老素和突變型人淀粉樣蛋白前體,是阿爾茨海默病經(jīng)典的動物模型。在APP/PS1小鼠的腦脊液,CXCL1是否如在人類患者中一樣出現(xiàn)異常改變?該問題尚無明確報(bào)導(dǎo)。在外周組織中,CXCL1主要由血管內(nèi)皮細(xì)胞、活化的巨噬細(xì)胞和成纖維細(xì)胞表達(dá)和分泌。在腦組織中,CXCL1可以被神經(jīng)元,小膠質(zhì)細(xì)胞、少突膠質(zhì)細(xì)胞和活化的星形膠質(zhì)細(xì)胞表達(dá)和分泌。我們的前期研究發(fā)現(xiàn)高表達(dá)CXCL1的單核細(xì)胞參與APP/PS1小鼠血腦屏障的破壞,提示CXCL1可能參與阿爾茨海默病的發(fā)病,因此有必要闡明CXCL1的腦中來源。在本研究中,我們通過體內(nèi)的免疫熒光共定位分析與體外的炎癥細(xì)胞活化實(shí)驗(yàn)分析了在阿爾茨海默病中腦組織細(xì)胞分泌CXCL1的情況。神...

【文章頁數(shù)】：86 頁

【學(xué)位級別】：博士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
英文縮略語
第一部分 :AD模型小鼠腦脊液CXCL1 變化與細(xì)胞來源分析
    1 前言
    2 材料與方法
        2.1 主要試劑和儀器
            2.1.1 實(shí)驗(yàn)動物與細(xì)胞
            2.1.2 實(shí)驗(yàn)試劑
            2.1.3 實(shí)驗(yàn)儀器
            2.1.4 實(shí)驗(yàn)工作液
        2.2 實(shí)驗(yàn)方法
            2.2.1 APP/PS1 小鼠的基因型鑒定
            2.2.2 小鼠腦脊液的收集
            2.2.3 免疫熒光雙染法檢測APP/PS1 小鼠腦內(nèi)CXCL1 來源
            2.2.4 細(xì)胞培養(yǎng)與處理
            2.2.5 小鼠CXCL1mRNA表達(dá)分析
            2.2.6 小鼠CXCL1 蛋白表達(dá)分析
            2.2.7 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)
    3 結(jié)果
        3.1 APP/PS1 小鼠基因型鑒定結(jié)果
        3.2 CXCL1在12 月齡APP/PS1 小鼠腦脊液中升高
        3.3 CXCL1在12 月齡APP/PS1 小鼠腦中共定位于MAP2與F4/80
        3.4 RAW264.7 細(xì)胞被活化后合成與分泌CXCL1 增加
        3.5 BV2 細(xì)胞被活化后合成與分泌CXCL1 沒有變化
    4 討論
    5 結(jié)論
第二部分 :趨化因子CXCL1對神經(jīng)干細(xì)胞增殖與分化的影響
    1 前言
    2 材料與方法
        2.1 主要儀器和試劑
            2.1.1 實(shí)驗(yàn)動物與細(xì)胞
            2.1.2 實(shí)驗(yàn)試劑
            2.1.3 實(shí)驗(yàn)儀器
            2.1.4 實(shí)驗(yàn)工作液
        2.2 實(shí)驗(yàn)方法
            2.2.1 神經(jīng)干細(xì)胞的培養(yǎng)
            2.2.2 神經(jīng)干細(xì)胞活力測定
            2.2.3 神經(jīng)干細(xì)胞BrdU摻入實(shí)驗(yàn)及免疫熒光檢測
            2.2.4 體內(nèi)神經(jīng)干細(xì)胞增殖檢測
            2.2.5 神經(jīng)干細(xì)胞體外分化實(shí)驗(yàn)及免疫熒光檢測
            2.2.6 免疫印跡實(shí)驗(yàn)檢測神經(jīng)干細(xì)胞分化相關(guān)分子標(biāo)記表達(dá)
            2.2.7 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)
    3 結(jié)果
        3.1 CXCL1 促進(jìn)體外神經(jīng)干細(xì)胞的增殖
        3.2 CXCL1 促進(jìn)室管膜下區(qū)細(xì)胞的增殖
        3.3 CXCL1 抑制體外神經(jīng)干細(xì)胞向星形膠質(zhì)細(xì)胞分化
    4 討論
    5 結(jié)論
第三部分 :趨化因子CXCL1對神經(jīng)干細(xì)胞活性氧生成及相關(guān)下游信號通路的影響
    1 前言
    2 材料與方法
        2.1 主要試劑和儀器
            2.1.1 實(shí)驗(yàn)動物與細(xì)胞
            2.1.2 實(shí)驗(yàn)試劑
            2.1.3 實(shí)驗(yàn)儀器
            2.1.4 實(shí)驗(yàn)工作液
        2.2 實(shí)驗(yàn)方法
            2.2.1 神經(jīng)干細(xì)胞的培養(yǎng)與傳代
            2.2.2 細(xì)胞內(nèi)活性氧(ROS)檢測
            2.2.3 免疫印跡實(shí)驗(yàn)檢測信號通路相關(guān)蛋白的表達(dá)與修飾
            2.2.4 體內(nèi)回復(fù)(rescue)實(shí)驗(yàn)
            2.2.5 線粒體膜電位檢測
            2.2.6 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)
    3 結(jié)果
        3.1 CXCL1 通過增加NOX2/gp91phox表達(dá)促進(jìn)神經(jīng)干細(xì)胞活性氧生成
        3.2 CXCL1 導(dǎo)致神經(jīng)干細(xì)胞Akt磷酸化水平升高
        3.3 CXCL1 對神經(jīng)干細(xì)胞Stat3 磷酸化沒有影響
        3.4 抑制活性氧生成能夠阻斷CXCL1 促進(jìn)神經(jīng)干細(xì)胞增殖的作用
        3.5 CXCL1 對神經(jīng)干細(xì)胞的線粒體膜電位沒有影響
    4 討論
    5 結(jié)論
    本研究創(chuàng)新性的自我評價(jià)
參考文獻(xiàn)
綜述
    參考文獻(xiàn)
攻讀學(xué)位期間取得的研究成果
致謝
個人簡歷



本文編號：4036552