目的:本研究采用慢病毒攜帶NT-3(neurotrophin-3)基因轉(zhuǎn)染的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(Bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs),探討NT-3修飾BMSCs移植阿爾茨海默病腦內(nèi)對認(rèn)知功能和記憶力的影響,以及海馬區(qū)神經(jīng)功能修復(fù)及再生的影響。為進(jìn)一步BMSCs基因治療阿爾茨海默病提供技術(shù)和理論支持。方法:1.取SD大鼠股骨或脛骨骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞,經(jīng)密度梯度離心法分離后進(jìn)行體外培養(yǎng),倒置顯微鏡下觀察BMSCs形態(tài)及生長,通過傳代純化和擴(kuò)增。取第三代BMSCs流式細(xì)胞術(shù)鑒定骨髓MSCs表面的抗體CD44、CD90、CD34和CD45表達(dá)。2.構(gòu)建并制備大鼠NT-3過表達(dá)慢病毒及對照慢病毒,轉(zhuǎn)染BMSCs細(xì)胞,48 h后,Western Blot檢測NT-3表達(dá)情況。將NT-3過表達(dá)及干擾慢病毒轉(zhuǎn)染的BMSCs細(xì)胞與乳鼠神經(jīng)元細(xì)胞共培養(yǎng),免疫熒光檢測NSE表達(dá)情況。MTT檢測共培養(yǎng)24 h、48 h、72 h細(xì)胞增殖情況;實時熒光定量PCR檢測C/EBPβmRNA表達(dá)情況;Western Blot檢測C/EBPβ蛋白表達(dá)情況。3.采用雙側(cè)海馬注射A...

【文章頁數(shù)】：43 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
中英文縮寫詞表
第一章 前言
第二章 材料
    2.1 實驗動物
    2.2 主要實驗儀器設(shè)備
    2.3 主要試劑
第三章 實驗方法
    3.1 骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（BMSCs）的分離、培養(yǎng)及純化
    3.2 BMSCs的鑒定
    3.3 NT-3 過表達(dá)慢病毒載體、NT-3 沉默慢病毒構(gòu)建及細(xì)胞轉(zhuǎn)染
    3.4 共培養(yǎng)模擬體內(nèi)微環(huán)境誘導(dǎo)BMSCs分化為神經(jīng)元
    3.5 免疫熒光染色檢測分化為神經(jīng)元
    3.6 MTT檢測細(xì)胞活力
    3.7 Real-time PCR檢測C/EBP β mRNA表達(dá)
    3.8 Western Blot檢測
    3.9 制作注射Aβ受體阻斷劑誘導(dǎo)的大鼠癡呆模型
    3.10 雙側(cè)海馬區(qū)移植BMSCs
    3.11 移植BMSCs1個月后進(jìn)行水迷宮實驗
    3.12 Western Blot檢測海馬NT-3 和C/EBPβ表達(dá)
    3.13 免疫熒光組織化學(xué)實驗
    3.14 統(tǒng)計學(xué)分析
第四章 結(jié)果
    4.1 BMSCs的分離、傳代培養(yǎng)結(jié)鑒定結(jié)果
        4.1.1 BMSCs分離、傳代培養(yǎng)
        4.1.2 流式細(xì)胞儀鑒定結(jié)果
    4.2 慢病毒介導(dǎo)的NT-3 基因轉(zhuǎn)染后在BMSCs中的過表達(dá)
    4.3 共培養(yǎng)后免疫熒光染色結(jié)果
    4.4 MTT檢測結(jié)果
    4.5 Real-time PCR檢測C/EBP β mRNA表達(dá)變化
    4.6 Western blot檢測C/EBP β蛋白表達(dá)變化
    4.7 BMSCs移植對AD大鼠認(rèn)知功能的影響
    4.8 移植NT-3 基因修飾的BMSCs后大鼠海馬中C/EBPβ表達(dá)
    4.9 移植NT-3 基因修飾的BMSCs對海馬組織中神經(jīng)形成的影響
第五章 討論
第六章 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
致謝
附錄



本文編號：3918465