發(fā)布時(shí)間：2017-05-19 14:17

  本文關(guān)鍵詞：丹皮酚對(duì)阿爾茨海默病模型大鼠抗氧化應(yīng)激損傷機(jī)制的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:阿爾茨海默病(Alzheimer's disease,AD)是一種中樞神經(jīng)系統(tǒng)的退行性疾病,年齡是該病危險(xiǎn)因素,隨著年齡增加,發(fā)病率逐年增高,隨著病情發(fā)展,患者會(huì)逐漸出現(xiàn)記憶力、認(rèn)知功能減退及情感改變,直至生活不能自理。神經(jīng)纖維纏結(jié)(neurofibrillary tangles,NFTs)、老年斑(senile plaques,SP)及神經(jīng)元的丟失是其三大病理特征。大量證據(jù)表明Aβ作為老年斑的主要成分,在A(yíng)D的發(fā)病及發(fā)展中起到很重要的作用。另有研究證實(shí)Aβ的毒性作用與氧自由基有關(guān),Aβ可損傷細(xì)胞膜,誘導(dǎo)氧化應(yīng)激的產(chǎn)生。近年來(lái)研究發(fā)現(xiàn)氧化應(yīng)激是AD大腦內(nèi)除了上述三大病理特征外另一個(gè)比較重要的病理特征。氧化應(yīng)激出現(xiàn)在A(yíng)D患者的早期,在A(yíng)D發(fā)生及發(fā)展中起到重要作用,鑒于氧化應(yīng)激在A(yíng)D發(fā)病中的重要作用,抗氧化應(yīng)激治療亦成為AD治療的研究熱點(diǎn)。但是研究證實(shí)抗氧化應(yīng)激治療在A(yíng)D的治療當(dāng)中效果欠佳,可能與其只將對(duì)氧化應(yīng)激某一方面作為靶點(diǎn)有關(guān)系。近年來(lái)研究發(fā)現(xiàn)Nrf2[NF-E2(Nuclear factor-erythroid 2)related factor 2]是一種重要的核轉(zhuǎn)錄因子,在細(xì)胞抗氧化應(yīng)激反應(yīng)中起著很重要的作用。在生理?xiàng)l件下,Nrf2與錨定蛋白Keap-1結(jié)合存在于細(xì)胞質(zhì)中,處于惰性狀態(tài),當(dāng)機(jī)體在病理?xiàng)l件下,Nrf2被激活,與Keap1分離轉(zhuǎn)入細(xì)胞核,與抗氧化反應(yīng)元件(anti-oxidant response element,ARE)結(jié)合,從而啟動(dòng)一系列的抗氧化物質(zhì)的合成來(lái)對(duì)抗氧化應(yīng)激。其中Nrf2誘導(dǎo)產(chǎn)生的血紅素加氧酶(HO-1)具有神經(jīng)保護(hù)作用,HO-1催化血紅素生成的產(chǎn)物亦是體內(nèi)強(qiáng)有力的自由基清除劑。研究表明,在A(yíng)D患者大腦神經(jīng)元內(nèi)的Nrf2大幅減少。p38MAPK屬于絲裂原活化蛋白激酶家族,受機(jī)體內(nèi)外各種刺激而磷酸化,如氧化應(yīng)激、炎癥等,從而介導(dǎo)炎癥及凋亡等效應(yīng)。研究表明,在A(yíng)D大鼠模型的大腦中,有活性的磷酸化p38MAPK(pp38MAPK)表達(dá)增加。另有研究證實(shí),在轉(zhuǎn)基因敲除p38MAPK的小鼠中,Nrf2通路被激活,HO-1的表達(dá)增加。丹皮酚(Paeonol,Pae)是從蘿摩科植物徐長(zhǎng)卿干燥根或全草和毛莨科植物牡丹根皮中提取出來(lái)的一種有效的活性成分。丹皮酚具有抗炎、抗腫瘤、鎮(zhèn)靜、鎮(zhèn)痛、保護(hù)血管等作用。研究證實(shí),丹皮酚對(duì)Aβ誘導(dǎo)的AD大鼠模型的學(xué)習(xí)記憶能力有保護(hù)性作用,亦能減輕由Aβ誘導(dǎo)的炎性反應(yīng)。本研究旨在探索丹皮酚能否通過(guò)下調(diào)p38MAPK的表達(dá)來(lái)激活Nrf2/ARE通路,從而誘導(dǎo)HO-1的表達(dá)。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)建立AD大鼠模型,觀(guān)察大鼠行為學(xué)的改變以及p38MAPK、Nrf2、HO-1在大鼠海馬組織中的表達(dá)情況,進(jìn)一步探討AD的發(fā)病機(jī)理和丹皮酚發(fā)揮神經(jīng)保護(hù)作用可能的機(jī)制。方法:68只健康成年SD雄性大鼠,清潔級(jí),體重250±50g,按隨機(jī)數(shù)字表分為假手術(shù)組(Sham),假手術(shù)+丹皮酚組(sham+Pae 100mg/kg)AD模型組,和AD+丹皮酚組(AD+Pae 100mg/kg),每組17只。適應(yīng)性飼養(yǎng)1周后兩個(gè)給藥組按丹皮酚100mg/kg灌胃給藥3周,余兩組給予等量生理鹽水。給藥三周后應(yīng)用立體定位儀建立AD模型,方法為向雙側(cè)海馬區(qū)各注射10μg Aβ1-42。造模七天后應(yīng)用Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)測(cè)試?yán)鲜?觀(guān)察丹皮酚對(duì)大鼠空間學(xué)習(xí)記憶的影響,并檢測(cè)四組大鼠海馬區(qū)SOD活力及MDA含量,通過(guò)HE染色觀(guān)察大鼠海馬CA1區(qū)錐體細(xì)胞的形態(tài)學(xué)變化,采用Western Blot法測(cè)定p38MAPK,Nrf2及HO-1的在大鼠海馬區(qū)的含量。結(jié)果:1 Morris水迷宮實(shí)驗(yàn):4組大鼠的逃避潛伏期不同(F=91.36,P0.05),穿越平臺(tái)次數(shù)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=26.30,P0.05)。與AD組相比,余3組逃避潛伏期明顯減少(P0.05),穿越平臺(tái)次數(shù)明顯增多(P0.05)。2 HE染色:Sham組及Sham+Pae組海馬CA1區(qū)神經(jīng)元排列規(guī)整,形態(tài)正常,分布均勻,結(jié)構(gòu)致密;AD組海馬CA1區(qū)神經(jīng)元細(xì)胞排列稀疏,結(jié)構(gòu)紊亂,且數(shù)量較Sham組明顯減少;AD+Pae組與AD模型組相比,大鼠海馬區(qū)錐體細(xì)胞數(shù)量,形態(tài)和結(jié)構(gòu)均有不同程度的恢復(fù),神經(jīng)元數(shù)量增多,排列較整齊,分布較均勻。3免疫組織化學(xué)結(jié)果免疫組化結(jié)果示:Nrf2表達(dá)于錐體細(xì)胞的胞質(zhì)與胞核內(nèi),AD組與其余三組相比,Nrf2表達(dá)水平下降。HO-1在四組大鼠海馬組織錐體細(xì)胞均主要表達(dá)于胞質(zhì)內(nèi),AD組與其余三組相比,HO-1表達(dá)水平下降,pp38MAPK在四組大鼠海馬組織錐體細(xì)胞均主要表達(dá)于胞核內(nèi),AD組與其余三組相比,pp38MAPK表達(dá)水平升高。4 SOD及MDA含量測(cè)定:四組大鼠的海馬組織SOD活力不同(F=238.28 P0.05),Sham組較AD組大鼠海馬組織SOD活力處于較高水平(P0.05),AD+Pae組大鼠海馬組織SOD活力較AD組的水平高(P0.05)。四組大鼠海馬組織MDA含量不同(F=68.89 P0.05),Sham組大鼠海馬組織MDA含量較AD組少(P0.05),AD+Pae組較AD組大鼠海馬組織MDA含量降低(P0.05)。5丹皮酚對(duì)pp38MAPK,Nrf2及HO-1表達(dá)水平的影響:在A(yíng)D模型組,pp38MAPK的蛋白表達(dá)水平較Sham組明顯增多(P0.05),Nrf2及HO-1的蛋白表達(dá)水平較Sham組明顯降低(P0.05);AD+Pae組的pp38MAPK蛋白表達(dá)水平明顯下降,Nrf2及HO-1的蛋白表達(dá)水平較Sham組明顯增高,與AD模型組相比結(jié)果有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論:1采用雙側(cè)海馬區(qū)注射凝聚態(tài)Aβ1-42建立AD模型,大鼠出現(xiàn)了學(xué)習(xí)記憶能力減退及相應(yīng)病理改變,證明AD大鼠模型制作是成功且有效的。2 AD模型組大鼠海馬區(qū)SOD活力降低,MDA含量升高,說(shuō)明AD模型鼠大腦中存在氧化應(yīng)激。3丹皮酚可以改善AD大鼠的學(xué)習(xí)記憶能力,減少AD大鼠腦內(nèi)氧化應(yīng)激反應(yīng),說(shuō)明其對(duì)AD有神經(jīng)保護(hù)作用。4丹皮酚在一定程度上下調(diào)了p38MAPK的表達(dá),上調(diào)了Nrf2及HO-1的表達(dá),從而激活了體內(nèi)的抗氧化應(yīng)激系統(tǒng),丹皮酚通過(guò)抑制p38MAPK從而激活Nrf2-HO-1通路可能是其神經(jīng)保護(hù)的機(jī)制之一。
【關(guān)鍵詞】：丹皮酚 阿爾茨海默病 氧化應(yīng)激 Aβ1-42 p38MAPK Nrf2 HO-1
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類(lèi)號(hào)】：R749.16;R-332
【目錄】：

• 中文摘要4-7
• 英文摘要7-11
• 英文縮寫(xiě)11-12
• 前言12-13
• 材料與方法13-23
• 結(jié)果23-25
• 附圖25-37
• 附表37-38
• 討論38-41
• 結(jié)論41-42
• 參考文獻(xiàn)42-46
• 綜述 氧化應(yīng)激和Nrf2/ARE通路在阿爾茨海默病的研究進(jìn)展46-54
• 參考文獻(xiàn)50-54
• 致謝54-55
• 個(gè)人簡(jiǎn)歷55

【引證文獻(xiàn)】

中國(guó)博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

1 姜婧;基于“通督啟神”法探討不同針刺干預(yù)對(duì)AD模型動(dòng)物的作用差異與機(jī)制[D];北京中醫(yī)藥大學(xué);2016年

  本文關(guān)鍵詞：丹皮酚對(duì)阿爾茨海默病模型大鼠抗氧化應(yīng)激損傷機(jī)制的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

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本文編號(hào)：378928