本文關(guān)鍵詞：血管性癡呆小鼠海馬組織病理學(xué)變化及Akt-GSK3β細(xì)胞信號(hào)通路表達(dá)變化，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的：近年來(lái)，血管性癡呆(vascular dementia, VD)的發(fā)病率逐年增高，已成為嚴(yán)重威脅老年人身心健康的原因之一，并給社會(huì)和家庭帶來(lái)了沉重負(fù)擔(dān)。因此，深入探討VD的發(fā)病機(jī)制是當(dāng)前醫(yī)學(xué)界的研究熱點(diǎn)。 研究表明腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子（brain derived neurotrophic factor,BDNF）作為神經(jīng)生長(zhǎng)因子的一種，在腦缺血時(shí)表達(dá)增高。其可通過(guò)與細(xì)胞膜表面的酪氨酸激酶受體B(receptor tyrosine kinases B, TrkB)結(jié)合而激活下游的PI3K-Akt信號(hào)通路。活化的Akt與其下游底物糖原合成酶激酶-3β（glycogen synthase kinase-3β, GSK3β）結(jié)合后，使GSK3β失活，發(fā)揮抗凋亡作用。但Akt、GSK3β在VD中如何發(fā)揮作用仍未明確。本研究通過(guò)對(duì)與學(xué)習(xí)記憶密切相關(guān)的海馬組織病理學(xué)觀察及細(xì)胞凋亡相關(guān)蛋白Akt、GSK3β表達(dá)變化的檢測(cè)，以期明確Akt、GSK3β在VD中的作用，為探討VD發(fā)病機(jī)制提供更多依據(jù)。 方法：本研究分為三部分： 第一部分以雄性C57Bl/6小鼠為研究對(duì)象，采用反復(fù)三次結(jié)扎雙側(cè)頸總動(dòng)脈的方法，給予腦缺血20min(ischemia, I)-再灌注10min(reperfusion, R)處理，建立VD小鼠模型，并設(shè)立正常組、假手術(shù)組和模型組；在模型制備后的第15、29、43d，利用水迷宮試驗(yàn)和跳臺(tái)試驗(yàn)對(duì)各組小鼠進(jìn)行學(xué)習(xí)功能測(cè)試，在第16、30、44d進(jìn)行記憶功能測(cè)試；行為學(xué)測(cè)試完畢后，HE染色觀察海馬組織病理學(xué)變化。 第二部分采用Western-blot方法測(cè)定小鼠海馬組織Akt、p-Akt蛋白的表達(dá)變化。 第三部分采用Western-blot方法測(cè)定小鼠海馬組織GSK3β、p-GSK3β蛋白的表達(dá)變化。 結(jié)果： 1術(shù)后3天小鼠體重變化 與正常組和假手術(shù)組相比，模型組小鼠術(shù)后第1d體重明顯減輕(P0.05)，術(shù)后3天可基本恢復(fù)至正常水平（P0.05）。 2水迷宮試驗(yàn) 2.1術(shù)后第15、29、43d，測(cè)試各組小鼠學(xué)習(xí)成績(jī)，結(jié)果顯示： 2.1.1游完全程時(shí)間：正常組和假手術(shù)組相比無(wú)明顯差異；模型組與假手術(shù)組相比時(shí)間明顯延長(zhǎng)(P0.05)。 2.1.2錯(cuò)誤次數(shù)：正常組和假手術(shù)組相比無(wú)明顯差異；模型組與假手術(shù)組相比次數(shù)明顯增多(P0.05)。 2.2術(shù)后第16、30、44d，測(cè)試各組小鼠記憶成績(jī)，結(jié)果顯示： 2.2.1游完全程時(shí)間：正常組和假手術(shù)組相比無(wú)明顯差異；模型組與假手術(shù)組相比時(shí)間明顯延長(zhǎng)(P0.05)。 2.2.2錯(cuò)誤次數(shù)：正常組和假手術(shù)組相比無(wú)明顯差異；模型組與假手術(shù)組相比次數(shù)明顯增多(P0.05)。 3跳臺(tái)試驗(yàn) 3.1術(shù)后第15、29、43d，，測(cè)試各組小鼠學(xué)習(xí)成績(jī)，結(jié)果顯示： 3.1.1反應(yīng)時(shí)間：正常組和假手術(shù)組相比無(wú)明顯差異；模型組與假手術(shù)組相比時(shí)間明顯延長(zhǎng)(P0.05)。 3.1.2錯(cuò)誤次數(shù)：正常組和假手術(shù)組相比無(wú)明顯差異；模型組與假手術(shù)組相比次數(shù)明顯增多(P0.05)。 3.2術(shù)后第16、30、44d，測(cè)試各組小鼠記憶成績(jī)，結(jié)果顯示： 3.2.1潛伏時(shí)間：正常組和假手術(shù)組相比無(wú)明顯差異；模型組與假手術(shù)組相比時(shí)間明顯縮短(P0.05)。。 3.2.2錯(cuò)誤次數(shù)：正常組和假手術(shù)組相比無(wú)明顯差異；模型組與假手術(shù)組相比次數(shù)明顯增多(P0.05)。 4各組小鼠海馬組織HE染色觀察 4.1正常組：海馬CA1區(qū)錐體細(xì)胞數(shù)目多，排列緊密、均勻，輪廓清楚，邊界整齊，細(xì)胞核大而圓，核仁清晰，染色質(zhì)豐富，胞漿清亮。單位面積正常神經(jīng)元計(jì)數(shù)為(115.13±1.92)。 4.2假手術(shù)組：海馬CA1區(qū)錐體細(xì)胞數(shù)目多，排列緊密、均勻，輪廓清楚，邊界整齊，細(xì)胞核大而圓，核仁清晰，染色質(zhì)豐富，胞漿清亮。術(shù)后2周、4周和6周時(shí)各組單位面積正常神經(jīng)元計(jì)數(shù)分別為(115.23±2.14)、(114.92±2.08)和(114.38±2.76)。 4.3VD模型組：海馬CA1區(qū)錐體細(xì)胞數(shù)目減少，排列松散、紊亂，細(xì)胞核體積變小、深染，呈核固縮表現(xiàn)，核仁消失，細(xì)胞質(zhì)呈強(qiáng)嗜酸性。術(shù)后4周、6周時(shí)可見膠質(zhì)細(xì)胞反應(yīng)性增生。術(shù)后2周、4周和6周時(shí)各組單位面積正常神經(jīng)元計(jì)數(shù)分別為(94.67±1.97)、(34.92±2.90)和(69.96±2.37)，較正常組和假手術(shù)組顯著降低(P0.05)，其中以術(shù)后4周損害最嚴(yán)重，僅有少量細(xì)胞形態(tài)正常，正常神經(jīng)元計(jì)數(shù)較術(shù)后2周和6周時(shí)顯著減少(P0.05)。 5Western-blot顯示海馬組織Akt、p-Akt蛋白表達(dá)情況 5.1Akt總蛋白的表達(dá)情況： 正常組、假手術(shù)組和模型組之間無(wú)明顯變化（P0.05）；缺血再灌注后2周、4周、6周之間蛋白表達(dá)亦無(wú)明顯變化（P0.05）。 5.2p-Akt蛋白的表達(dá)情況： 正常組和假手術(shù)組之間無(wú)明顯變化（P0.05）。與假手術(shù)組相比，模型組p-Akt蛋白表達(dá)增高(P0.05)，于術(shù)后4周時(shí)升高最明顯，6周時(shí)基本恢復(fù)至正常水平（P0.05）。 6Western-blot顯示海馬組織GSK3β、p-GSK3β蛋白表達(dá)情況 6.1GSK3β總蛋白的表達(dá)情況： 正常組、假手術(shù)組和模型組之間無(wú)明顯變化（P0.05）；缺血再灌注后2周、4周、6周之間蛋白表達(dá)亦無(wú)明顯變化（P0.05）。 6.2p-GSK3β蛋白的表達(dá)情況： 正常組和假手術(shù)組之間無(wú)明顯變化（P0.05）。與假手術(shù)組相比，模型組p-GSK3β蛋白表達(dá)增高(P0.05)，于術(shù)后4周時(shí)升高最明顯，6周時(shí)基本恢復(fù)至正常水平（P0.05）。 結(jié)論： 1本研究成功建立了VD小鼠模型，經(jīng)水迷宮試驗(yàn)和跳臺(tái)試驗(yàn)證實(shí)了VD小鼠存在學(xué)習(xí)和記憶功能障礙，并伴有海馬組織明顯的病理學(xué)變化。提示此模型能基本模擬臨床上VD患者的智能障礙，是比較理想的VD動(dòng)物模型。 2在VD小鼠中，海馬組織神經(jīng)元減少的同時(shí)，Akt總蛋白的表達(dá)沒有明顯變化，活化形式p-Akt的表達(dá)明顯增多。提示反復(fù)腦缺血再灌注刺激能激活A(yù)kt，活化的Akt能抵抗缺血引起的損傷，阻止神經(jīng)元的凋亡，在神經(jīng)元存活中發(fā)揮重要作用。 3在VD小鼠中，GSK3β總蛋白的表達(dá)沒有明顯變化，失活形式p-GSK3β的表達(dá)明顯增多。提示反復(fù)腦缺血再灌注后抑制了GSK3β的活性，這一變化可能是激活的Akt作用的結(jié)果。GSK3β失活能減少細(xì)胞凋亡的發(fā)生，在神經(jīng)元存活和改善認(rèn)知中發(fā)揮重要作用。
【關(guān)鍵詞】：血管性癡呆 C57Bl/6小鼠 海馬 蛋白激酶B 糖原合成酶激酶-3β
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2012
【分類號(hào)】：R749.13
【目錄】：

• 中文摘要5-9
• ABSTRACT9-13
• 引言13-16
• 第一部分 血管性癡呆小鼠模型的建立、術(shù)后行為學(xué)測(cè)定及海馬病理學(xué)變化16-34
• 前言16
• 材料與方法16-20
• 結(jié)果20-23
• 附圖23-26
• 附表26-29
• 討論29-31
• 小結(jié)31-32
• 參考文獻(xiàn)32-34
• 第二部分 血管性癡呆小鼠海馬組織 Akt、p-Akt 蛋白表達(dá)的變化34-46
• 前言34
• 材料與方法34-38
• 結(jié)果38-39
• 附圖39-40
• 附表40-41
• 討論41-43
• 小結(jié)43-44
• 參考文獻(xiàn)44-46
• 第三部分 血管性癡呆小鼠海馬組織 GSK3β、p-GSK3β蛋白表達(dá)的變化46-55
• 前言46
• 材料與方法46-47
• 結(jié)果47-48
• 附圖48-49
• 附表49-50
• 討論50-52
• 小結(jié)52-53
• 參考文獻(xiàn)53-55
• 結(jié)論55-56
• 綜述 GSK-3 和鋰劑在神經(jīng)精神性疾病中的作用56-67
• 參考文獻(xiàn)62-67
• 致謝67-68
• 個(gè)人簡(jiǎn)歷68

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前6條

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  本文關(guān)鍵詞：血管性癡呆小鼠海馬組織病理學(xué)變化及Akt-GSK3β細(xì)胞信號(hào)通路表達(dá)變化，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：306097