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《中國細(xì)胞生物學(xué)學(xué)報(bào)》 2015年01期

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Egr-1對(duì)APP基因表達(dá)的調(diào)控作用

【摘要】：該研究構(gòu)建了含有APP啟動(dòng)子的熒光素酶報(bào)告質(zhì)粒以及缺失突變的報(bào)告質(zhì)粒,將該質(zhì)粒與Egr-1真核表達(dá)載體p CDNA3-Egr-1共轉(zhuǎn)染到HEK293與U87MG細(xì)胞中進(jìn)行熒光素酶活性測(cè)定,以確定Egr-1對(duì)APP基因表達(dá)的調(diào)控作用。通過染色質(zhì)免疫共沉淀實(shí)驗(yàn)(chromatin immunoprecipitation assay,Ch IP)和凝膠電泳遷移實(shí)驗(yàn)(electrophoretic mobility shift assay,EMSA)確定Egr-1蛋白在APP啟動(dòng)子上的結(jié)合部位,同時(shí)利用組蛋白去乙酰化酶抑制劑TSA(trichostatin A)和butyrate誘導(dǎo)內(nèi)源性Egr-1的表達(dá)以及Egr-1抑制劑suramin來作用于細(xì)胞,通過蛋白免疫印跡分析(Western blot)檢測(cè)Egr-1對(duì)APP蛋白表達(dá)的作用。結(jié)果顯示,Egr-1蛋白在APP基因啟動(dòng)子上5′UTR區(qū)域有特異性的結(jié)合部位,去除該結(jié)合部位則Egr-1失去對(duì)APP基因啟動(dòng)子的調(diào)控作用,Ch IP和EMSA的結(jié)果也證實(shí)了該結(jié)合位點(diǎn);通過HDAC抑制劑和suramin干擾內(nèi)源性Egr-1的表達(dá)則顯著影響了Egr-1對(duì)APP基因表達(dá)的調(diào)控作用。

【作者單位】： 寧夏顱腦疾病重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室 省部共建國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室培育基地;寧夏醫(yī)科大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院;
【關(guān)鍵詞】：
【基金】： 國家自然科學(xué)基金(批準(zhǔn)號(hào):81260197)資助的課題~~
【分類號(hào)】：R749.16
【正文快照】：

#共同第一作者網(wǎng)絡(luò)出版時(shí)間:2014-12-19 11:55 URL:阿爾茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)是一種不可逆轉(zhuǎn)的、漸進(jìn)性的神經(jīng)損害性疾病,緩慢地引起記憶和思維能力的衰退[1]。AD的發(fā)病機(jī)理至今尚未明確,但經(jīng)

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