本文關(guān)鍵詞：阿霉素載藥膠束的制備及體外抗腫瘤活性研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

《浙江大學(xué)》 2013年

阿霉素載藥膠束的制備及體外抗腫瘤活性研究

徐菁  

【摘要】：[研究背景] 肺癌是當(dāng)今世界上嚴(yán)重威脅人類健康和生命的肺部最常見的惡性腫瘤,其中約85%為非小細(xì)胞肺癌(NSCLC).化療是目前腫瘤主要治療手段之一。阿霉素(Doxorubicin, DOX)是目前臨床常用的蒽環(huán)類抗腫瘤藥物,然而該類藥物毒性較大,長(zhǎng)期應(yīng)用可發(fā)生劑量依賴性的不可逆的心肌病變,骨髓抑制,脫發(fā),消化道癥狀等,同時(shí)其多藥耐藥性的存在也使其在臨床的應(yīng)用受到一定限制。 目前,載體給藥系統(tǒng),例如脂質(zhì)體、納米粒和聚合膠束等作為一種新型的MDR逆轉(zhuǎn)策略被認(rèn)為是最有效的途徑,已經(jīng)在臨床上取得了可喜的進(jìn)展。作為載體給藥系統(tǒng)的一員,從兩親性嵌段共聚物發(fā)展而來聚合物膠束,近十年來深受青睞。當(dāng)投入到水性介質(zhì)中時(shí),在體系自由能降低的驅(qū)動(dòng)下,膠束的疏水段自發(fā)聚集在一起形成微粒的內(nèi)核。它既可以作為很多難溶性藥物的微儲(chǔ)庫,又能避免藥物在生物體內(nèi)環(huán)境中失活。自組裝形成的載藥膠束是熱力學(xué)、動(dòng)力學(xué)穩(wěn)定的體系,具有穩(wěn)定、長(zhǎng)效、安全等許多優(yōu)良的性質(zhì),使得聚合物膠束成為難溶性藥物理想的輸送系統(tǒng),且在藥物釋放、基因載體和診斷制劑等很多方面得到廣泛地應(yīng)用。 [研究目的] 本課題以聚乙二醇(polyethylene glycol,PEG),聚己酸內(nèi)酯(polycaprolactone,PCL)和普朗尼克P105為高分子材料,采用溶劑揮發(fā)法制備阿霉素載藥膠束,并對(duì)阿霉素載藥膠束的體外抗腫瘤活性進(jìn)行研究。 [研究方法] 1.采用三種不同的高分子聚合物,聚乙二醇,聚己酸內(nèi)酯和普朗尼克P105,阿霉素為模型藥物,溶劑揮發(fā)法制備阿霉素載藥膠束及空白膠束。共聚物膠束在水中的粒徑分布采用動(dòng)態(tài)光散射粒徑測(cè)定儀(DLS)進(jìn)行測(cè)定。共聚物膠束的形態(tài)通過透射電鏡(TEM)觀察,HPLC法測(cè)定阿霉素載藥膠束中阿霉素的含量。 2.溴化四氮唑藍(lán)(MTT)法測(cè)定阿霉素和阿霉素載藥膠束對(duì)肺癌細(xì)胞系A(chǔ)549的抑制作用,并通過繪制細(xì)胞生長(zhǎng)抑制曲線,來判別細(xì)胞毒作用的強(qiáng)弱。 3.阿霉素具有熒光性,我們利用流式細(xì)胞術(shù)和激光共聚焦研究A549細(xì)胞對(duì)阿霉素和阿霉素載藥膠束的攝取和滯留。 4.細(xì)胞吸收阿霉素載藥膠束后,為了更精確觀察藥物在細(xì)胞內(nèi)的分布,我們分別用Hoechst33342, MitoTracker Deep Red FM及LysoTracker Blue DND-22對(duì)細(xì)胞核、線粒體、溶酶體進(jìn)行染色,采用激光共聚焦顯微鏡分析阿霉素載藥膠束的細(xì)胞核及亞細(xì)胞結(jié)構(gòu)的靶向分布。 5.通過克隆形成實(shí)驗(yàn)評(píng)價(jià)阿霉素載藥膠束較阿霉素的放療增敏效應(yīng)。 [研究結(jié)果] 1.透射電鏡觀察結(jié)果顯示,阿霉素載藥膠束及空載體膠束,粒子呈球型,顆粒狀,無粘連。膠束的粒徑多在100-200nm。高效液相色譜法(high performance liquid chromatograph, HPLC)測(cè)得樣本在1.11-111μg/ml濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好,從而測(cè)出阿霉素載藥膠束中藥物濃度。 2.阿霉素載藥膠束的抗腫瘤活性比普通阿霉素明顯增強(qiáng)�？瞻譖EG-PCL/P105聚合物膠束對(duì)細(xì)胞幾乎沒有毒性,說明阿霉素載藥膠束是通過阿霉素,而并非藥物載體起到抗腫瘤的作用。 3.流式及激光共聚焦檢測(cè)細(xì)胞對(duì)藥物的攝取及滯留。結(jié)果顯示在阿霉素藥物濃度相同時(shí),相同作用時(shí)間下,阿霉素載藥膠束比普通阿霉素更容易被細(xì)胞攝取,阿霉素載藥膠束在細(xì)胞內(nèi)滯留時(shí)間明顯延長(zhǎng)。 4.阿霉素載藥膠束和普通阿霉素的亞細(xì)胞定位大致相同。藥物的紅色熒光和LysoTracker Blue DND-22染色劑的熒光信號(hào)部分重疊,和MitoTracker Deep Red FM染色劑的熒光信號(hào)完全重疊,和Hoechst33342染色的熒光信號(hào)不重疊。實(shí)驗(yàn)結(jié)果證明細(xì)胞吸收阿霉素載藥膠束或者阿霉素后,可以通過溶酶體途徑轉(zhuǎn)運(yùn)。 5.與單純放療組相比,普通阿霉素或阿霉素載藥膠束聯(lián)合放療組細(xì)胞生存曲線斜率更低。因此,阿霉素與阿霉素載藥膠束都具有放療增敏作用。同時(shí),與放療聯(lián)合普通阿霉素組相比,放療聯(lián)合阿霉素載藥膠束組對(duì)腫瘤細(xì)胞的放療增敏效應(yīng)更強(qiáng)。 [結(jié)論] 我們采用三種不同的高分子聚合物,聚乙二醇(PEG),聚己酸內(nèi)酯(PCL)和普朗尼克P105,阿霉素為模型藥物,制備合成了阿霉素載藥膠束。通過細(xì)胞實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證所制備的納米膠束給藥系統(tǒng)的體外抗腫瘤活性。MTT結(jié)果證明阿霉素載藥膠束的抗腫瘤活性比普通阿霉素明顯增強(qiáng)而且空白PEG-PCL/P105聚合物膠束對(duì)細(xì)胞幾乎沒有毒性；流式細(xì)胞儀及激光共聚焦結(jié)果均表明阿霉素載藥膠束較普通阿霉素更易被細(xì)胞攝取,在細(xì)胞內(nèi)滯留時(shí)間延長(zhǎng)；采用激光共聚焦手段測(cè)定阿霉素及阿霉素載藥膠束亞細(xì)胞器定位,結(jié)果證明阿霉素載藥膠束與溶酶體是部分共定位,與線粒體是共定位的,但沒有與細(xì)胞核共定位；阿霉素載藥膠束還具有比普通阿霉素更強(qiáng)的放療增敏效應(yīng)。

【關(guān)鍵詞】：
【學(xué)位授予單位】：浙江大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號(hào)】：R749
【目錄】：

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