發(fā)布時間：2016-10-17 18:02

  本文關(guān)鍵詞：自噬對血管性癡呆大鼠海馬CA1區(qū)突觸可塑性相關(guān)蛋白表達(dá)的影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

《華北理工大學(xué)》 2015年

自噬對血管性癡呆大鼠海馬CA1區(qū)突觸可塑性相關(guān)蛋白表達(dá)的影響

劉金霞  

【摘要】：目的通過對血管性癡呆模型大鼠分別進(jìn)行側(cè)腦室注射自噬抑制劑(3-甲基腺嘌呤)、自噬激動劑(雷帕霉素),Morris水迷宮測試大鼠學(xué)習(xí)記憶能力,檢測自噬特異性蛋白及突觸可塑性相關(guān)蛋白的表達(dá),探討自噬對血管性癡呆大鼠海馬CA1區(qū)突觸可塑性相關(guān)蛋白表達(dá)的影響,為血管性癡呆的發(fā)病機(jī)制及治療提供理論依據(jù)。方法1選取192只健康雄性SD大鼠,使用隨機(jī)數(shù)字法將實驗大鼠隨機(jī)分為:假手術(shù)組(Sham組)、血管性癡呆模型組(VD組)、自噬抑制劑(3-甲基腺嘌呤)組(3-MA組)、自噬激動劑(雷帕霉素)組(Rap組)。每組又分為模型制備成功后1 w、2 w、4 w、8 w 4個亞組。2血管性癡呆模型制備:應(yīng)用改良的Pulsinelli四血管阻斷法進(jìn)行血管性癡呆模型制備,即電凝雙側(cè)椎動脈致永久性閉塞,24小時后反復(fù)短暫性夾閉雙側(cè)頸總動脈,造成大鼠全腦缺血,制備大鼠血管性癡呆模型。假手術(shù)組大鼠在術(shù)中只進(jìn)行雙側(cè)椎動脈及頸總動脈的暴露,不予以阻斷血流。3給藥方法:自噬抑制劑(3-甲基腺嘌呤)組和自噬激動劑(雷帕霉素)組大鼠于造模前30min,分別進(jìn)行側(cè)腦室注射3-甲基腺嘌呤和雷帕霉素。4用Morris水迷宮測定大鼠的學(xué)習(xí)記憶能力。5采用免疫組化法檢測大鼠海馬CA1區(qū)自噬相關(guān)蛋白微管相關(guān)蛋白1輕鏈3 II(microtubule associated protein 1 light chain 3,MAP1-LC3II,即LC3II)的表達(dá),免疫印跡法檢測大鼠海馬CA1區(qū)自噬相關(guān)蛋白LC3II/LC3I的比值;應(yīng)用免疫組化法及免疫印跡法檢測大鼠海馬CA1區(qū)突觸可塑性相關(guān)蛋白的表達(dá),包括突觸素(synaptophysin,Syn),突觸后膜致密物質(zhì)95(Postsynaptic density material 95,PSD-95),生長相關(guān)蛋白(growth-associated protein,GAP-43),微管相關(guān)蛋白2(microtubule-associated protein2,MAP-2)。6采用OLYMPUS攝像顯微鏡(400×)攝像,并應(yīng)用Motic Med 6.0數(shù)碼醫(yī)學(xué)圖像分析系統(tǒng)進(jìn)行分析,免疫印跡結(jié)果用Image J分析。7數(shù)據(jù)均采用SPSS17.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行分析,計量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(sx±)表示,多組間均值比較采用單因素方差分析(one-way ANOVA),兩組間比較采用t檢驗,兩變量間關(guān)系判斷采用Pearson相關(guān)性分析方法進(jìn)行相關(guān)性分析,以P0.05認(rèn)為有統(tǒng)計學(xué)意義。結(jié)果1與Sham組相比較,VD組觀察的各時間點逃避潛伏期在1 d時無明顯變化(P0.05),第2 d以后各觀察時間點逃避潛伏期較Sham組延長,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05或P0.01),穿越原平臺位置次數(shù)均較Sham組少(均P0.05);與VD組比較,3-MA組大鼠各時間點逃避潛伏期在1 d時無明顯變化(P0.05),第2 d以后各測試時間點逃避潛伏期縮短,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05或P0.01),穿越原平臺位置次數(shù)均增多(均P0.05);與VD組相比,Rap組大鼠各時間點逃避潛伏期在1 d時無明顯變化(P0.05),第2 d以后各測試時間點逃避潛伏期延長,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05或P0.01),穿越平臺的次數(shù)均減少(均P0.05)。2與Sham組比較,VD組各時間點LC3II蛋白陽性表達(dá)細(xì)胞數(shù)及LC3II/LC3I的比值在1 w時較小,2 w增大,4 w時達(dá)到高峰,8 w減少,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(均P0.01);與VD組比較,3-MA組各時間點LC3II蛋白表達(dá)陽性細(xì)胞數(shù)及LC3II/LC3I的比值水平較VD組低,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05或P0.01);與VD組比較,Rap組各時間點LC3II蛋白表達(dá)陽性細(xì)胞數(shù)及LC3II/LC3I的比值水平較VD組高,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05或P0.01)。3與Sham組比較,VD組各時間點Syn、PSD-95、MAP-2蛋白表達(dá)均減少,GAP-43蛋白表達(dá)均增加,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(均P0.01);與VD組比較,3-MA組各時間點Syn、PSD-95、MAP-2、GAP-43蛋白表達(dá)水平較VD組高,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05或P0.01);與VD組比較,Rap組各時間點Syn、PSD-95、MAP-2、GAP-43蛋白表達(dá)水平較VD組低,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05或P0.01)。4相關(guān)性分析結(jié)果示自噬相關(guān)蛋白LC3II或LC3II/LC3I與突觸可塑性相關(guān)蛋白呈負(fù)相關(guān)(均P0.01);自噬相關(guān)蛋白LC3II與GAP-43無明顯相關(guān)性(P0.05)。結(jié)論1自噬參與了血管性癡呆的發(fā)病過程,在一定程度上增加血管性癡呆大鼠海馬CA1區(qū)自噬的發(fā)生,大鼠的學(xué)習(xí)記憶能力可能減退。2突觸可塑性相關(guān)蛋白在血管性癡呆發(fā)病中起重要作用,突觸可塑性相關(guān)蛋白表達(dá)減少可能會減弱大鼠的學(xué)習(xí)記憶能力。3自噬對血管性癡呆大鼠海馬CA1區(qū)突觸可塑性相關(guān)蛋白表達(dá)可能具有抑制作用,在一定程度上增加自噬可能會通過抑制血管性癡呆大鼠海馬CA1區(qū)突觸可塑性相關(guān)蛋白表達(dá)而加重血管性癡呆大鼠的學(xué)習(xí)記憶障礙。

【關(guān)鍵詞】：
【學(xué)位授予單位】：華北理工大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R749.13
【目錄】：

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  本文關(guān)鍵詞：自噬對血管性癡呆大鼠海馬CA1區(qū)突觸可塑性相關(guān)蛋白表達(dá)的影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：143210