本文關鍵詞：斑馬魚高血脂模型的建立及小檗胺降血脂機制研究

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【摘要】：隨著人們飲食結構和生活水平的提高,高血脂及其并發(fā)癥已經成為影響人類生命健康的主要危險因素。高血脂癥是一種脂質代謝紊亂的現(xiàn)象,主要表現(xiàn)為血漿總膽固醇(TC),甘油三酯(TG),低密度脂蛋白膽固醇(LDL-c)和高密度脂蛋白膽固醇(HDL-c)水平發(fā)生異常。有資料顯示,高血脂癥與動脈粥樣硬化、冠心病、高血壓、糖尿病等疾病的發(fā)生有關。導致高血脂癥的因素很多,如遺傳因素、飲食結構、生活習慣、神經因素等。對于高血脂癥的治療,目前臨床上主要用的是他汀類藥物,如辛伐他汀。血漿中TC和LDL-c水平增多是誘發(fā)心血管疾病的主要因素,而保持體內膽固醇平衡是預防和治療高血脂癥及其并發(fā)癥的關鍵。維持體內膽固醇穩(wěn)態(tài)主要有以下途徑:降低羥甲基戊二酰輔酶A還原酶(HMGCR)的活性從而抑制內源性膽固醇的合成;增加低密度脂蛋白膽固醇受體(LDLR)的表達,加速膽固醇吸收;上調膽固醇-7ɑ-羥化酶(CYP7A1)的活性,促進體內膽固醇轉化膽汁酸排出體外。因此,針對各個途徑的關鍵基因,如HMGCR、LDLR和CYP7A1是目前降膽固醇藥物篩選的重要靶標。目前用于篩選降血脂藥物的方法包括體外實驗和體內實驗。體外實驗方法可分為分光光度法、薄層層析法、同位素標記法、HPLC法以及細胞培養(yǎng)。體外實驗的實驗周期短、方便快捷、成本低,因此適用于大批量篩選。但由于體外實驗無法模擬藥物在體內的效果,因此具有一定的局限性。體內實驗主要用到嚙齒動物模型,常用到的高血脂動物模型包括大鼠、金黃地鼠和豚鼠等。先喂養(yǎng)高膽固醇高甘油三酯飼料造模,通過測定血清TC和TG水平確定造模是否成功,然后再用藥物處理檢測降血脂效果。實驗存在周期長、成本高、藥物需要量大等弊端。因此建立一種快速有效的動物模型用于降脂藥物的篩選具有十分重要的意義。斑馬魚作為一種新興的模式動物近年來廣泛用于人類疾病研究。我國傳統(tǒng)中藥歷史悠久,大量研究表明中藥在降血脂方面具有良好效果。本實驗主要研究了高血脂斑馬魚模型的建立及54種中藥降血脂效果比較,并系統(tǒng)研究了小檗胺對高血脂斑馬魚的降血脂機制。本研究的主要內容和結果:(1)對斑馬魚喂養(yǎng)含4%膽固醇的飼料,檢測不同時間血漿TC水平。結果表明與對照組相比,高膽固醇飼料喂養(yǎng)20天后,斑馬魚血漿和肝臟脂質含量顯著升高,5種陽性藥物對其均有降血脂效果。模型組肝臟HMGCR和LDLR mRNA表達下降,并且CYP7A1a mRNA表達升高,其表現(xiàn)與哺乳動物模型相似,說明高血脂斑馬魚模型造模成功。(2)通過應用斑馬魚高血脂模型,實驗從54種中藥中初步篩選出了降脂功效較好的幾種中藥,其中顯著降低血漿TC和TG水平的中藥有黃連,槐米,姜黃,羅布麻,桔梗,赤芍,金櫻子。調節(jié)TC水平明顯的有綠茶,苦丁,蘆薈,黃芪,山楂,山藥,丹參。調節(jié)TG水平顯著的有金銀花,葛根,胡椒。(3)基于以上結果,我們進一步探索了黃連中次要生物堿小檗胺(BBM)的降血脂效果及機制。對斑馬魚胚胎的研究發(fā)現(xiàn),5μg/m L,10μg/m L和20μg/m L BBM對斑馬魚胚胎發(fā)育和細胞沒有明顯毒性,并且20μg/m L BBM可以降低心律。對斑馬魚幼魚研究發(fā)現(xiàn),BBM可以改善血管膽固醇水平。對斑馬魚成魚的研究發(fā)現(xiàn),BBM可以降低血漿TC和LDL-c水平,減少肝臟中脂肪堆積,下調HMGCR和MTP的轉錄,上調LDLR和CYP7A1a mRNA水平�？傊�,斑馬魚可以用于不同靶點降脂中藥的篩選,應用高血脂斑馬魚模型可以加快降血脂中藥的研發(fā)。BBM對高血脂斑馬魚具有較好的降血脂效果,其分子機制可能是抑制膽固醇的合成和脂蛋白的組裝分泌,促進膽固醇的轉運和轉化。
【關鍵詞】：高血脂癥 斑馬魚 中藥 小檗胺 HMGCR
【學位授予單位】：西南大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R285.5;R-332
【目錄】：

• 摘要7-9
• Abstract9-12
• 第1章 文獻綜述12-20
• 1.1 高血脂癥12
• 1.2 高血脂癥的發(fā)病機理12
• 1.3 膽固醇的體內代謝12-14
• 1.3.1 膽固醇的合成13
• 1.3.2 膽固醇的轉運13
• 1.3.3 膽固醇的外排13-14
• 1.4 高血脂癥的治療14-17
• 1.4.1 運動14
• 1.4.2 飲食14
• 1.4.3 西藥治療高血脂14-16
• 1.4.4 中藥治療高血脂16-17
• 1.5 降血脂研究的模型17-18
• 1.5.1 分子水平17
• 1.5.2 細胞模型17-18
• 1.5.3 哺乳動物模型18
• 1.5.4 斑馬魚模型18
• 1.6 本課題研究的可行性論證18-20
• 第2章 引言20-22
• 2.1 研究目的和意義20-21
• 2.2 研究內容21-22
• 第3章 斑馬魚高血脂模型的建立22-32
• 3.1 前言22
• 3.2 實驗材料和儀器22-24
• 3.2.1 實驗動物22
• 3.2.2 主要材料22-24
• 3.2.3 主要儀器24
• 3.3 實驗方法24-26
• 3.3.1 飼料配制24-25
• 3.3.2 動物分組25
• 3.3.3 血漿脂質水平測定25
• 3.3.4 肝臟油紅O染色25
• 3.3.5 肝臟mRNA表達水平25-26
• 3.4 統(tǒng)計分析26
• 3.5 實驗結果26-30
• 3.5.1 不同時間血漿TC含量的變化26-27
• 3.5.2 陽性藥物對斑馬魚血脂的影響27-28
• 3.5.3 肝臟組織油紅O染色28-29
• 3.5.4 肝臟膽固醇代謝關鍵基因的影響29-30
• 3.5.5 不同高脂模型對比30
• 3.6 小結與討論30-32
• 第4章 54種中藥降血脂活性比較32-36
• 4.1 前言32
• 4.2 實驗材料和儀器32
• 4.2.1 實驗動物32
• 4.2.2 主要材料32
• 4.2.3 主要儀器32
• 4.3 實驗方法32-33
• 4.3.1 飼料配制32-33
• 4.3.2 動物分組33
• 4.3.3 血漿脂質水平測定33
• 4.4 統(tǒng)計分析33
• 4.5 實驗結果33-35
• 4.5.1 54種中藥降血脂活性比較33-35
• 4.6 小結與討論35-36
• 第5章 小檗胺對高血脂斑馬魚脂質代謝的影響36-50
• 5.1 前言36
• 5.2 實驗材料和儀器36-37
• 5.2.1 實驗動物36
• 5.2.2 主要材料36-37
• 5.2.3 主要儀器37
• 5.3 實驗方法37-39
• 5.3.1 飼料配制37
• 5.3.2 動物分組37-38
• 5.3.3 斑馬魚胚胎吖啶橙染色38
• 5.3.4 斑馬魚胚胎心律測定38
• 5.3.5 斑馬魚幼魚血管膽固醇含量測定38
• 5.3.6 斑馬魚成魚肝臟、血漿脂質水平測定38
• 5.3.7 斑馬魚成魚肝臟油紅O染色38-39
• 5.3.8 斑馬魚成魚肝臟mRNA表達水平39
• 5.4 統(tǒng)計分析39-40
• 5.5 實驗結果40-48
• 5.5.1 黃連次要生物堿降脂活性比較40
• 5.5.2 BBM對斑馬魚胚胎的毒性40-42
• 5.5.3 小檗胺對斑馬魚幼魚血管膽固醇含量的影響42-44
• 5.5.4 BBM對斑馬魚成魚進食情況的影響44
• 5.5.5 BBM對斑馬魚成魚血漿及肝臟脂質水平的影響44-45
• 5.5.6 肝臟組織油紅O染色45-46
• 5.5.7 BBM對肝臟膽固醇代謝關鍵基因的影響46-48
• 5.6 小結與討論48-50
• 第6章 結論50-52
• 第7章 研究展望52-54
• 參考文獻54-60
• 縮略語表60-62
• 致謝62-64
• 碩士研究生期間發(fā)表的學術論文64

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2 ;學科前瞻[J];當代醫(yī)學;2003年12期

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本文編號：758904