本文關(guān)鍵詞：慢病毒介導(dǎo)RNAi干擾β-catenin對(duì)小鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞生物學(xué)行為的影響

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【摘要】：本研究通過構(gòu)建β-連環(huán)蛋白(β-catenin)特異的RNAi慢病毒表達(dá)載體,探討阻斷Wnt/β-catenin信號(hào)通路對(duì)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(MSC)生物學(xué)行為的影響。設(shè)計(jì)3對(duì)針對(duì)β-catenin mRNA不同位點(diǎn)的shRNA編碼序列,分別連接到慢病毒載體質(zhì)粒PLB中,構(gòu)建PLB-β-catenin/shRNA1,PLB-β-catenin/shRNA2和PLB-β-catenin/shRNA3;將重組質(zhì)粒與慢病毒包裝質(zhì)粒及包膜蛋白質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染293FT細(xì)胞,收獲病毒顆粒,濃縮后測(cè)定病毒滴度,感染MSC細(xì)胞,并應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)分選GFP陽性細(xì)胞,Western blot和RT-PCR驗(yàn)證其對(duì)細(xì)胞內(nèi)β-catenin基因表達(dá)的抑制效果,篩選干擾效率最高質(zhì)粒;CCK-8法檢測(cè)細(xì)胞增殖,Annexin-V/7-AAD法檢測(cè)干擾后細(xì)胞凋亡情況,細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)及Transwell實(shí)驗(yàn)檢測(cè)MSC遷移能力。結(jié)果表明:構(gòu)建的特異性慢病毒siRNA干擾組(PLB-β-catenin/shRNA2)能有效抑制β-catenin的mRNA和蛋白表達(dá),并抑制細(xì)胞的增殖;而空載體對(duì)照組(PLB group)和正常對(duì)照組(control group)細(xì)胞增殖無明顯變化,兩組之間無顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05);流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)結(jié)果顯示,采用血清饑餓法處理后,干擾組細(xì)胞的凋亡率明顯增加,但兩對(duì)照組之間無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05);細(xì)胞劃痕和Transwell實(shí)驗(yàn)顯示,干擾組MSC的遷移能力明顯降低,對(duì)照組細(xì)胞遷移能力無明顯變化。結(jié)論:構(gòu)建的特異RNAi慢病毒能夠有效抑制β-catenin基因的表達(dá),減少細(xì)胞內(nèi)目的基因mRNA和蛋白的水平,從而對(duì)MSC細(xì)胞的增殖、凋亡和遷移能力產(chǎn)生重要影響。
【作者單位】： 徐州醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院血液科 徐州醫(yī)學(xué)院移植免疫實(shí)驗(yàn)室;
【關(guān)鍵詞】： RNA干擾 慢病毒載體 wnt信號(hào) β-catenin 間充質(zhì)干細(xì)胞 生物學(xué)行為
【分類號(hào)】：R329.28
【正文快照】： 骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(bone marrow mesenchymalstem cells,BMMSC)是一類存在于骨髓中的非造血干細(xì)胞,因其具有取材方便、培養(yǎng)與擴(kuò)增方便、免疫原性低、連續(xù)傳代培養(yǎng)和凍存后仍具有多向分化潛能等優(yōu)點(diǎn),已被廣泛應(yīng)用于細(xì)胞生物學(xué)基礎(chǔ)研究、干細(xì)胞和基因治療及組織工程學(xué)研究等領(lǐng)域,

【共引文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 吳卓;趙文婧;劉玲瓏;吳麗情;陳維平;;骨髓源性間充質(zhì)干細(xì)胞三維微環(huán)境復(fù)合培養(yǎng)體系的構(gòu)建[J];廣西醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào);2013年04期

2 楊東昌;母小新;劉巧玉;鄧?yán)?陳云;孫倍成;;人膜連蛋白A2基因重組慢病毒載體的構(gòu)建及其在肝癌細(xì)胞株中的表達(dá)[J];南京醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版);2011年02期

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中國(guó)博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

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2 林文平;腦紅蛋白基因修飾的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞對(duì)兔脊髓損傷保護(hù)作用的實(shí)驗(yàn)研究[D];福建醫(yī)科大學(xué);2011年

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4 陳美玲;Sonic hedgehog基因?qū)?duì)植體周圍骨缺損修復(fù)的影響[D];華中科技大學(xué);2011年

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6 余松濤;hTERT啟動(dòng)子靶向性活體光學(xué)實(shí)時(shí)成像技術(shù)在腫瘤診斷及療效評(píng)估中作用的實(shí)驗(yàn)研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2010年

7 陳偉;C-X-C型趨化因子受體4基因過表達(dá)的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞對(duì)小鼠GVHD防治作用[D];南京醫(yī)科大學(xué);2012年

8 朱天琦;GDNF和NT-3雙基因誘導(dǎo)BMSCs分化為神經(jīng)樣細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)研究[D];華中科技大學(xué);2013年

9 魏璐;轉(zhuǎn)染HCN4基因的犬骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞同種異體移植對(duì)傳導(dǎo)阻滯心臟電生理變化的影響[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2013年

10 熊承杰;人巨噬細(xì)胞移動(dòng)抑制因子及其受體在椎間盤退變過程中的表達(dá)及其功能研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2013年

中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 仲琳;超聲微泡介導(dǎo)人骨形成蛋白-2基因在人牙周膜成纖維細(xì)胞中的表達(dá)[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2010年

2 胡珍珍;慢病毒載體介導(dǎo)的ANNEXIN A10瘤內(nèi)注射對(duì)HepG2細(xì)胞皮下移植瘤抑制作用的研究[D];南昌大學(xué);2012年

3 王介忠;CD40siRNA慢病毒載體的構(gòu)建及其對(duì)EAM大鼠Treg細(xì)胞的影響[D];山東大學(xué);2013年

4 曲戈;IL-24基因修飾的間充質(zhì)干細(xì)胞向肺癌靶向遷移的體外研究[D];鄭州大學(xué);2013年

5 王聰慧;胃癌及癌前病變中SFRPs基因異常甲基化與幽門螺旋桿菌感染之間的相關(guān)性研究[D];河北醫(yī)科大學(xué);2013年

6 吳卓;定向誘導(dǎo)間充質(zhì)干細(xì)胞向心肌細(xì)胞方向分化過程中Nkx2.5的表達(dá)[D];廣西醫(yī)科大學(xué);2013年

7 胡君;TCF4/β-catenin調(diào)控間充質(zhì)干細(xì)胞向HGF的趨化性遷移[D];蘇州大學(xué);2013年

8 翟文斌;不同劑量MSCs移植促進(jìn)大鼠任意皮瓣成活的實(shí)驗(yàn)研究[D];延安大學(xué);2013年

9 聶升波;不同頻率振動(dòng)刺激骨髓基質(zhì)干細(xì)胞成骨分化在體實(shí)驗(yàn)研究[D];大連醫(yī)科大學(xué);2012年

10 熊亞;TCF4、β-catenin、MAD2B、Ki-67在表皮惡性腫瘤中的表達(dá)研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2013年

【相似文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 梁英;吳偉忠;李薇薇;張寧;孫惠川;王魯;夏景林;;靶向Arnt的RNAi慢病毒載體的構(gòu)建及其在HCCLM6中對(duì)Arnt基因表達(dá)的影響[J];中國(guó)臨床醫(yī)學(xué);2008年06期

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3 李玉紅;宋文濤;廖漢林;畢勇毅;;CYP4F3基因RNA干擾重組慢病毒載體的構(gòu)建[J];江蘇醫(yī)藥;2011年14期

4 王玉川;劉正娟;趙永利;閆冬;汪曉霞;;大鼠瘦素受體RNAi慢病毒載體的構(gòu)建及鑒定[J];大連醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào);2009年01期

5 包杰;王前;鄭磊;曾方銀;劉杰;熊石龍;裘宇容;李娟;;小鼠RelB基因RNAi慢病毒載體的構(gòu)建與鑒定[J];解放軍醫(yī)學(xué)雜志;2007年06期

6 馬曉生;呂飛舟;姜建元;李小康;;不同基因載體系統(tǒng)對(duì)臍帶血間充質(zhì)干細(xì)胞轉(zhuǎn)染效果的初步研究[J];復(fù)旦學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);2008年03期

7 萬赤丹;程銳;王春友;王宏博;王帥;劉濤;;解偶聯(lián)蛋白-2 RNA干擾慢病毒載體的構(gòu)建[J];中國(guó)康復(fù);2008年05期

8 降風(fēng);王雪貞;卜碧濤;張?zhí)K明;張e，

本文編號(hào)：752109