本文關鍵詞：慢病毒介導RNAi干擾β-catenin對小鼠骨髓間充質(zhì)干細胞生物學行為的影響

  更多相關文章： RNA干擾 慢病毒載體 wnt信號 β-catenin 間充質(zhì)干細胞 生物學行為

【摘要】：本研究通過構建β-連環(huán)蛋白(β-catenin)特異的RNAi慢病毒表達載體,探討阻斷Wnt/β-catenin信號通路對骨髓間充質(zhì)干細胞(MSC)生物學行為的影響。設計3對針對β-catenin mRNA不同位點的shRNA編碼序列,分別連接到慢病毒載體質(zhì)粒PLB中,構建PLB-β-catenin/shRNA1,PLB-β-catenin/shRNA2和PLB-β-catenin/shRNA3;將重組質(zhì)粒與慢病毒包裝質(zhì)粒及包膜蛋白質(zhì)粒共轉染293FT細胞,收獲病毒顆粒,濃縮后測定病毒滴度,感染MSC細胞,并應用流式細胞術分選GFP陽性細胞,Western blot和RT-PCR驗證其對細胞內(nèi)β-catenin基因表達的抑制效果,篩選干擾效率最高質(zhì)粒;CCK-8法檢測細胞增殖,Annexin-V/7-AAD法檢測干擾后細胞凋亡情況,細胞劃痕實驗及Transwell實驗檢測MSC遷移能力。結果表明:構建的特異性慢病毒siRNA干擾組(PLB-β-catenin/shRNA2)能有效抑制β-catenin的mRNA和蛋白表達,并抑制細胞的增殖;而空載體對照組(PLB group)和正常對照組(control group)細胞增殖無明顯變化,兩組之間無顯著的統(tǒng)計學差異(P0.05);流式細胞術檢測結果顯示,采用血清饑餓法處理后,干擾組細胞的凋亡率明顯增加,但兩對照組之間無統(tǒng)計學差異(P0.05);細胞劃痕和Transwell實驗顯示,干擾組MSC的遷移能力明顯降低,對照組細胞遷移能力無明顯變化。結論:構建的特異RNAi慢病毒能夠有效抑制β-catenin基因的表達,減少細胞內(nèi)目的基因mRNA和蛋白的水平,從而對MSC細胞的增殖、凋亡和遷移能力產(chǎn)生重要影響。
【作者單位】： 徐州醫(yī)學院附屬醫(yī)院血液科 徐州醫(yī)學院移植免疫實驗室;
【關鍵詞】： RNA干擾 慢病毒載體 wnt信號 β-catenin 間充質(zhì)干細胞 生物學行為
【分類號】：R329.28
【正文快照】： 骨髓間充質(zhì)干細胞(bone marrow mesenchymalstem cells,BMMSC)是一類存在于骨髓中的非造血干細胞,因其具有取材方便、培養(yǎng)與擴增方便、免疫原性低、連續(xù)傳代培養(yǎng)和凍存后仍具有多向分化潛能等優(yōu)點,已被廣泛應用于細胞生物學基礎研究、干細胞和基因治療及組織工程學研究等領域,

【共引文獻】

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本文編號：752109